确定癌细胞使用肿瘤治疗领域的最佳抑制频率（TTFields）

TTFields 体外应用系统的总体目标是研究它们对不同肿瘤类型癌细胞的影响，以指导 TTFields 临床给药并优化治疗结果。该方法可以帮助确定不同 TTField 参数对癌细胞的影响。该技术的主要优点是，它允许临床前识别抑制特定癌细胞系生长的最有效 TTField 频率，最终可应用于人类。

通过对该技术的轻微修改，可以测试 TTField 和其他治疗方式（如化疗和放疗）的联合治疗效果。演示该程序的是我们团队的研究人员 Yaara Porat。首先，将带盖的 TTFields 培养皿安装到底板上，并准备另外 8 个培养皿，用于培养对照细胞。

在每个培养皿的底部放置一个无菌的 2 毫米盖玻片。接下来，在 1 毫升 DMEM 培养基中悬浮 5 次 10 至第四个 U-87 MG 细胞。每个培养皿中铺板的适当细胞数量取决于所用细胞系的特性。

实验前对其进行校准以避免细胞过度生长至关重要。将 200 微升细胞悬液吸到每个盖玻片上，使其表面形成液滴，并用盖子盖住培养皿。将所有培养皿在 37 摄氏度、5% 二氧化碳下孵育过夜，以使细胞粘附。

细胞附着后，使用 200 微升移液管从盖玻片中吸出培养基，然后小心地将 2 毫升完全生长培养基移液到每个培养皿上。用无菌移液器吸头轻轻敲击盖玻片边缘，以释放载玻片下卡住的任何气泡。然后，在 37 摄氏度、5% 二氧化碳下孵育细胞，直到 TTFields 处理开始。

要开始 TTFields 处理，请从 37 摄氏度的培养箱中取出底板，并将其放入冷藏的二氧化碳培养箱中。冷藏培养箱的温度将决定电场强度。使用适当的强度很重要，这取决于细胞对 TTFields 的敏感性。

然后将扁平电缆母连接器插入底板，并打开 TTFields 发生器。打开 TTFields 体外应用专用软件系统。通过输入实验和实验者的名称定义新研究后，调整每个培养皿的频率和目标温度。

点击开始按钮，在软件中启动 TTFields 治疗，并检查显示器上是否所有培养皿都显示为浅蓝色，确认其连接正确。要重新建立连接，请轻轻向下按压培养皿并缓慢来回旋转，直到培养皿在屏幕上显示浅蓝色。处理 24 小时后，单击暂停在软件中停止实验。

断开扁平电缆连接器与底板的连接，然后将底板放入层流柜中，然后从培养箱中取出带有培养皿和在标准条件下生长的对照细胞的底板。用新鲜的完全生长培养基替换所有培养皿中的培养基，然后将对照细胞置于 37 摄氏度、5% 二氧化碳的培养箱中，并将底板放回冷藏培养箱中。将底板重新连接到生成器。

单击 continue （继续） 按钮继续治疗。处理完成后，点击软件中的结束实验按钮完成实验，然后保存从系统上传的数据。关闭 TTFields 发生器后，断开扁平电缆与底板的连接，然后从培养箱中取出系统。

逆时针向下按压并转动陶瓷盘，将其从底板上拆下。接下来，将经 TTFields 处理的和对照盖玻片无菌转移至含有新鲜培养基的无菌培养皿中，以进行进一步评估。为了评估 TTFields 处理的效果，从每个含有盖玻片的培养皿中取出培养基，然后加入 0.5 毫升 0.25% 胰蛋白酶/EDTA，并在 37 摄氏度、5% 二氧化碳下孵育培养皿，直到细胞从盖玻片表面分离。

用 0.5 mL 完全生长培养基中和胰蛋白酶，然后通过轻轻上下移液来重悬细胞。最后，通过流式细胞术对细胞进行计数。这里介绍的是 A2780 细胞进行的频率扫描结果，揭示了 TTFields 对所研究细胞生长和克隆形成能力的频率依赖性影响。

当使用 200 kHz 的频率时，观察到最显着的治疗效果。在 OVCAR-3 细胞中研究了以两种不同强度进行的 TTFields 治疗的疗效。该研究表明，施加的强度与治疗结果之间存在明显的关系，较高的野强度具有更大的生长抑制活性。

无论施加的磁场强度如何，在 200 kHz 的频率下观察到 TTFields 处理的效果最强。一旦掌握，这项技术可以在每天不到 30 分钟的时间内完成。在尝试此程序时，请务必记住避免介质溢出，并在将培养皿从培养箱转移到通风橱并返回时保持培养皿平衡。

应用 TTField 后，可以进行其他方法，如流式细胞术、丙氨酸蛋白分析或免疫荧光显微镜检查，以进一步研究治疗结果和观察到的活动背后的机制。该技术用于确定在临床环境中针对不同类型癌症应用的最佳 TTFields 频率。观看此视频后，您应该对如何计划和执行 TTFields 体外实验有了很好的了解。

不要忘记，与人类细胞系一起工作可能很危险，因此在执行此程序时应始终采取预防措施，例如防护手套和衣服。