小鼠新生儿缺氧缺血性脑损伤模型的神经行为评估

我们进行了单侧颈动脉闭塞产后 7-10 CD-1 小鼠幼崽创建一个新生儿缺氧缺血 (hi) 模型和调查的影响, hi 脑损伤。我们研究了这些小鼠的神经行为功能与手术正常小鼠相比。

缺氧缺血性新生儿脑损伤手术的总体目标是有一个小鼠模型来研究此类损伤和相关脑损伤。这种方法可以帮助回答有关新生儿缺氧缺血性脑损伤的关键问题，例如此类损伤如何影响运动和认知功能。这种技术的主要优点是它是众所周知的并且被广泛使用。

它也是脑瘫和新生儿卒中的临床前模型。一般来说，刚接触这种方法的人会很挣扎，因为单侧右颈动脉很难识别。与我们实验室的研究生 Yoon-Kyum Shin 将一起演示该程序。

麻醉至少 5 只 P-7 小鼠幼崽后，将幼崽置于解剖显微镜下，腹部向上。然后，用酒精清洁颈部。要开始手术，请用剪刀在颈部做一个 0.7 毫米的切口。

然后，使用镊子小心地取出脂肪组织，直到暴露出单侧右颈动脉。接下来，使用 5-0 缝合线结扎单侧右颈动脉。现在，用 5-0 尼龙缝合颈部的切口，并对切口进行消毒。

然后，让幼犬在 37 摄氏度的低氧室中恢复，打开盖子约一个小时。将另一只手术作的小鼠放入缺氧室中以恢复。一旦幼仔完全清醒，关闭腔室盖并降低气体水平以建立低氧条件。

缺氧 90 分钟后，将脑损伤的幼崽放回笼子里。一周后，像以前一样为幼崽准备手术，以寻找受伤的证据。在头皮上做一个切口，以确定右半球后外侧区域的脑损伤。

通过半透明的颅骨寻找皮质损伤和海马损伤的证据。因此，将幼崽分类为受伤或未受伤的对照。检查后，用缝合线缝合头皮，并对切口进行消毒。

当小鼠六周大时，根据对逆性刺激的学习和避免来评估它们的记忆力。使用商用双隔间、步进式被动避障装置来完成这项任务。首先，将鼠标放入盒子的明亮隔间中 30 秒。

然后，打开隔间之间的门，并记录动物进入黑暗隔间的潜伏期。最多等待 300 秒来执行任务。当鼠标的所有四肢都完全进入黑暗的隔间时，关上门。

然后，对 1/2 毫安的脚部电击 2 秒钟，然后将鼠标放回笼子。24 小时后，重复测试。这一次，让鼠标整整 300 秒进入暗室，不要电击鼠标。

6 周龄的小鼠进行梯子行走测试，以使用定性和定量分析来区分运动功能的细微障碍。首先，设置梯子装置，然后设置摄像机，记录鼠标在装置上的肢体运动。接下来，将鼠标放在开始面板上，然后开始使用摄像机进行录制。

确保视频显示腿部对焦良好。当鼠标触碰到梯形装置的最后一个面板时，停止录制。然后，将鼠标移回启动面板，并再次录制鼠标穿过设备的过程。

在每个试用日期，每只鼠标总共执行四次。稍后，在分析视频时，手动计算以 1/10 的速度播放视频时每个肢体的滑倒次数。当肢体在杆之间滑动时，这构成滑倒。

当小鼠 6 周大时，评估它们的握力。使用推/拉应变片，配备直径为 2 毫米的三角线，全部固定在面板上。将鼠标放在面板上，握住它的尾部。

然后，让鼠标用前肢接触到金属丝。一旦老鼠抓住电线，轻轻拉动它的尾巴，直到它松开抓握。该装置将以克为单位记录导线上的峰值力。

在让鼠标休息之前，重复此测试五次。在握力测试期间，有明显的准确表现动作。在让鼠标休息之前，尝试通过五次努力找到这些动作，至少一分钟以减少其肌肉疲劳。

在鼠标休息至少 1 分钟后，再次重复 5 次试验系列。然后，让鼠标再次休息，并在该测试日最后一次执行该系列。从数据中，使用前肢或两个前肢的三个最大分数的平均值进行分析。

在收集 14 周龄缺氧缺血受伤动物的大脑后，对大脑进行形态学评估为无皮质损伤、轻度损伤或严重损伤。一周前通过核磁共振扫描了相同的动物，这也非常具有启发性。即使是形态正常的大脑也显示出海马体的轻度损伤。

在 6 周龄时，即受伤后 5 周，对小鼠进行了各种行为任务评估。缺氧缺血受伤的小鼠在 24 h 被动回避任务中认知受损。由于只有右半球受损，小鼠表现出偏瘫运动功能。

这可以通过每个前肢梯子横向横档上滑移百分比的差异来揭示。此外，由于握力涉及大脑中的运动皮层，因此正常组和皮质损伤组在握力上表现出差异。在正常对照小鼠和绝对未受伤的小鼠之间没有观察到差异，但受伤的小鼠明显受损。

看完这个视频，你应该对如何结扎单侧右颈动脉产生新生儿缺氧缺血小鼠以及如何进行后续行为分析有一个很好的了解。需要注意的是，即使在受伤 7 天后皮质脑上没有看到明显的损伤，MRI 也可能显示海马损伤。此外，重要的是要记住温和地对待幼崽并尽快完成手术。

幼犬的皮肤非常脆弱和薄，所以要非常小心。