光学相干断层扫描: 成像小鼠视网膜神经节细胞在体内

该实验的总体目标是使用光学相干断层扫描或 OCT 快速获得视网膜厚度的准确评估。OCT 可以帮助回答眼科领域的关键问题，例如视神经病变。该技术的主要优点是，它是一种检测小鼠视网膜神经节细胞结构变化的非侵入性方法。

这项技术真的很有趣，因为它是非侵入性、安全且信誉良好的方法来测试治疗对视神经病变的效果。首先，首先调整适合镜头的参考臂设置。接下来，打开电源和计算机。

计算机准备就绪后，启动映像程序。创建新的临床研究并添加所需的方案。转到 patient exam 部分并设置检查默认值。

单击患者检查部分中的 Add patient 以添加新患者并输入相关的患者信息。然后单击、添加检查、开始检查并从列表中添加预设扫描，以从首先要测量的眼睛开始选择所需的方案。至少在数据采集前 15 分钟，将室温 10% 去氧肾上腺素滴入所有待测试小鼠的每只眼睛中。

然后去除多余的试剂，滴入室温 0.5% 托吡卡胺滴加。采集前大约 5 分钟，诱导全身麻醉。之后，立即将 0.4% 盐酸奥布卡因涂抹在每只眼睛上，将溶液留在原位三秒钟以麻醉和固定眼睛。

然后，取出滴剂并重复 10% 去氧肾上腺素和 0.5% 托吡卡胺的安装。当眼睛充分散瞳以进行成像时，用基于粘性乙二醇的滴眼液润滑眼睛以提供角膜水合作用，并用手术纱布包裹小鼠以保持温暖。使用海绵或棉芯，在每只眼睛上涂抹一层薄薄的眼用凝胶，并补充 0.3% 羟丙甲纤维素。

这样做时，将睫毛和胡须放在一边。将鼠标放入鼠标盒中，头部笔直并指向前方，然后小心地将咬棒放入其口中。将棉卷放在正在检查的动物眼睛的侧面下方。

然后，将夹子保持在鼠标专用镜头上的瞄准尖端上，逆时针旋转 z 转换器螺钉，使镜头朝向眼睛。通过旋转和旋转盒并转动咬合杆和 x 平移螺钉来预设鼠标的位置，直到实验眼位于可以直接观察镜头的位置。当眼睛的光轴和晶状体对齐时，选择检查中的第一次扫描。

单击开始瞄准并使用 z 平移螺钉在左侧面板中垂直移动视网膜，在右侧面板中水平移动视网膜。通过旋转暗盒，向上或向下移动视神经头，使其进入右侧面板的中间。使用咬杆螺钉拉直右侧面板内的视网膜，并旋转盒以将视神经头定位在左侧面板的中间。

然后使用 x 平移螺钉在左侧面板内调平视网膜，并牢记每个调制器的主要功能，进一步调整视网膜的位置，以便在视神经头上完美居中。当视网膜就位时，单击 start snapshot（开始快照）开始光谱域光学相干断层扫描。不要忘记保存扫描和报告。

如有必要，请调整集中化。扫描完成后，缩回镜头并放置第二只眼睛，就像刚才演示的那样。扫描第二只眼睛后，从盒中取出鼠标，在每只眼睛上涂抹含有 0.3% 羟丙甲纤维素的眼凝胶，然后将鼠标放在加热板上监测直至完全恢复。

要关注视网膜神经节细胞，请使用为图像 J 创建的 MRI 视网膜工具宏，打开 MRI 视网膜工具并修改多边形选择工具并加载感兴趣的图像。单击 M 开始测量，然后单击 E 调整水平位置。在新打开的感兴趣区域管理器窗口中选择第一个暗盒。

单击蓝色多边形，然后单击图片中测量层的边界，以调整第一个暗盒的位置。在感兴趣区域管理器窗口中选择第二个暗盒并调整第二个暗盒。然后单击 R，重新测量视网膜并在测量窗口中查看结果。

尽管光谱域 OCT 扫描的质量不如视网膜横截面的图像，但 OCT 允许可视化更多层。视网膜层很容易在 OCT 扫描中测量，并将视网膜神经纤维包含在神经节细胞层、内核层、外丛状层、外核层、内外段层视网膜色素上皮和脉络膜中，允许对整个视网膜进行复杂的研究。刚刚证明视网膜厚度的 OCT 测量表明，视力受损的遗传突变 OPA1 雌性小鼠表现出神经节细胞复合体和周围视网膜神经纤维层的进行性增厚。

使用标准和自制卡尺比较神经节细胞层厚度中的视网膜神经纤维，表明标准卡尺的厚度明显低于自制卡尺，因为标准卡尺更厚，更难放置在薄层边界上。一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在 15 分钟内完成。OCT 发展后，为眼科领域的研究人员分析小鼠视网膜的结构变化铺平了道路。

观看此视频后，您应该对如何对小鼠视网膜神经节细胞进行 OCT 成像有很好的了解。