Name: 人地幔细胞淋巴瘤移植小鼠模型中肿瘤植入的研究 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-30T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: 学习建立套细胞淋巴瘤异种移植小鼠模型，用于血液肿瘤学治疗策略研究。该方法可在体内评估药物对人淋巴瘤细胞的治疗效果，为个性化医疗提供重要研究工具。

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本工作得到了日内瓦抗癌联盟、Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti 基金会、Oncosuisse KPS-OCS（项目号：OCS-02260-08-2008 和 2914-02-2012）以及瑞士国家科学基金会资助项目 31003A_156760 和 310030-153456 的支持。

人血样使用均依照日内瓦大学医院当地伦理与人体实验委员会批准的程序进行。
动物实验遵循瑞士日内瓦机构动物护理伦理委员会和州兽医办公室的规定（许可编号：GE/26/15）。
1. 通过密度梯度离心法分离制备外周血单个核细胞（PBMCs）
注意：从处于白血病期的套细胞淋巴瘤（MCL）患者中采集 3 - 5 mL 外周血。诊断依据流式细胞术的标准诊断标准（CD5+、CD23−、CD200+、单克隆B细胞群）确立，并通过染色体易位 t(11;14) 的存在以及细胞周期蛋白 D1 的过表达进一步确认。在所有病例中，单克隆B细胞占总B细胞群体的 &#62;90%。其余细胞主要为单核细胞及少量T细胞。
<ol>
	<li>将5 mL MCL血液样本与5 mL Roswell Park Memorial Institute 1640培养基（RPMI）按1:1比例稀释（图1A）。</li>
	<li>使用前将密度梯度介质（材料表）反复颠倒数次，以确保充分混匀。</li>
	<li>用移液器吸取5 mL密度梯度介质加入15 mL离心管中。</li>
	<li>用移液器将稀释后的血液样本轻柔地铺在15 mL离心管中的密度梯度介质上方（血液与密度梯度介质的体积比应为2:1，例如，10 mL血液加5 mL密度梯度介质）。注意避免两层液体混合（图1B，C）。</li>
	<li>将样本在室温下以400 × g离心40分钟，离心机刹车关闭。</li>
	<li>使用无菌巴斯德吸管，小心吸取中间层（呈乳白色、薄环状，箭头所示处（图1D，E））含有单个核细胞的部分，并将其转移至一支洁净的离心管中。</li>
	<li>单个核细胞的洗涤
	<ol>
		<li>估计所转移细胞悬液的体积，并加入3倍体积的含1%牛血清白蛋白（BSA）的无菌1×磷酸盐缓冲液（PBS）。</li>
		<li>通过反复吹打数次混匀细胞悬液。</li>
		<li>在室温下以400 - 500 × g离心10 - 15分钟。</li>
		<li>弃去上清液，获得细胞沉淀，并重复洗涤步骤一次。</li>
		<li>去除上清液，将细胞重悬于所需体积的缓冲液中，例如，1或2 mL PBS中。</li>
		<li>使用自动细胞计数仪或血细胞计数板（Neubauer计数室）对细胞数量进行计数。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 通过B细胞阴性选择富集B细胞
<ol>
	<li>用 PBS 将细胞稀释至终浓度为 50 ×&#160;106 个细胞/mL。</li>
	<li>将细胞转移至 5 mL 圆底聚苯乙烯管中。向 2 mL 细胞悬液中加入 B 细胞富集试剂盒中的 100 µL 抗体混合液，通过上下吹打轻轻混匀（图 2-1）。</li>
	<li>室温孵育 10 分钟。</li>
	<li>将 B 细胞富集试剂盒中提供的磁性颗粒短暂涡旋振荡 30 秒（图 2-2），然后向 2 mL 样品中加入 150 µL 磁性颗粒。</li>
	<li>样品再于室温孵育 5 分钟。</li>
	<li>用含 2% 胎牛血清（FCS）和 1 mM 乙二胺四乙酸（EDTA）的 1×PBS 将样品体积调至 2.5 mL。将试管放入磁架中，继续孵育 3–5 分钟（图 2-3）。</li>
	<li>手持磁架并保持试管在位，连续动作倾倒试管，使富集后的细胞悬液转移至新的洁净试管中（图 2-4）。使用自动细胞计数仪或血细胞计数板进行细胞计数，以获得 B 细胞的总回收量。 
	注意：通常情况下，正常 B 细胞的回收量约为 ~105 个 B 细胞/mL，套细胞淋巴瘤（MCL）样本的回收量为 5–50 ×&#160;106 个细胞/mL。</li>
	<li>确认 B 细胞富集纯度
	<ol>
		<li>取约 50,000 个细胞，与不同荧光染料标记的抗 CD19/CD20 抗体（1:20 稀释）和抗 CD45 抗体（1:10 稀释）在室温下孵育 15–30 分钟。</li>
		<li>用 1 mL 的 1×PBS + 1% BSA 洗涤，400–500 × g 离心 5 分钟，将细胞重悬于约 200 µL PBS 中。</li>
		<li>通过流式细胞术检测细胞样本，并分析 B 细胞纯度。该方法获得的纯度通常 &#62;90%（图 3）。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 异种移植小鼠模型的建立
<ol>
	<li>重悬约 40 - 60 × 106 150 - 200 µL 的 1x PBS 中的细胞（每只小鼠注射所需体积）。</li>
	<li>将150 µL细胞悬液经尾静脉静脉注射（i.v.）注入6至7周龄免疫缺陷型NOD scid gamma（NSG）小鼠，性别不限。图4A).</li>
	<li>让小鼠发育人淋巴瘤约10周。 
	注意：原代人类淋巴瘤细胞形成肿瘤所需时间远长于人类淋巴瘤细胞系（约3周）。</li>
	<li>当动物开始出现体重减轻、毛发竖立、活动减少、后肢瘫痪等致命疾病的症状时， 等等。，通过 CO 处死小鼠2 窒息后经心脏穿刺取血。</li>
	<li>通过解剖小鼠采集骨髓、脾脏和肝脏等不同器官，并在处死时经心脏采血以收集外周血，用于肿瘤移植分析（图4B - F).</li>
</ol>
4. 不同器官中移植肿瘤细胞的嵌合体分析
<ol>
	<li>在收集不同器官后，通过机械破碎处理样本，先进行红细胞（RBC）裂解，再制备单细胞悬液：血液和骨髓使用 200 µL 1× 氯化铵钾缓冲液，脾脏使用 500 µL，肝脏使用 2 mL。</li>
	<li>使用人B细胞特异性抗体对细胞进行计数和染色， 即抗CD19、抗CD20和抗CD45。 
	注意：NSG 小鼠缺乏 B 细胞，因此在分析时，细胞需用特异性针对人类 B 细胞的标记物进行染色。</li>
	<li>通过流式细胞术分析各器官来源的细胞，设门圈选B细胞（CD19+、CD20+、CD45+）。</li>
	<li>根据第4.3步中设定的门控细胞，定量分析MCL注射小鼠不同器官中移植的肿瘤细胞图 4G) . 
	注意：参见 材料表 详情请见。</li>
</ol>

<ol><li>Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+chemokines%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human chemokines: an update.</a> Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).</li>
<li>Baggiolini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+and+leukocyte+traffic%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemokines and leukocyte traffic.</a> Nature. 392, 565-568 (1998).</li>
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<li>Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+tumor+xenografts+as+predictive+preclinical+models+for+anticancer+drug+activity+in+humans%3A+better+than+commonly+perceived-but+they+can+be+improved%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved.</a> Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).</li>
<li>Johnson, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+drug+activity+in+NCI+preclinical+in+vitro+and+in+vivo+models+and+early+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials.</a> Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).</li>
<li>Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+drug+response+in+patients+and+in+the+clonogenic+assay+with+solid+human+tumour+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts.</a> Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).</li>
<li>Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27256571">Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma.</a> J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).</li>
</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

对于处于研发后期阶段的药物可以开展临床试验，但临床试验不适用于药物发现。长期以来，人们一直致力于开发可接受人类细胞异种移植的动物受体，以用于测试早期阶段的药物。本文介绍一种能够避免人类移植物排斥反应的动物模型，并可用于建立人类疾病（如MCL）的研究模型。目前，这是一种最先进的异种移植模型，可用于研究人类肿瘤移植及肿瘤生长的机制。本研究采用NSG小鼠，这是迄今免疫缺陷程度最高的小鼠模型之一，可显著提高淋巴瘤移植的成功率。NSG小鼠缺乏成熟的T细胞、B细胞和NK细胞，同时存在细胞因子信号传导障碍以及固有免疫应答缺陷。
通过密度梯度法从原发性套细胞淋巴瘤（MCL）样本中制备淋巴细胞是去除红细胞和血小板等其他细胞类型的重要步骤。传统上，密度梯度离心法可有效分离淋巴细胞。为进一步富集B细胞群体，可按照本文所述方案使用B细胞富集试剂盒对这些淋巴细胞进行后续处理。为实现淋巴瘤细胞的最佳移植效果，应确保获得高纯度的B淋巴细胞群体。MCL细胞通过静脉注射方式注入（至少40–60 × 10⁶个细胞）。6 通过尾静脉每只小鼠注射细胞，随后让小鼠自由发展淋巴瘤，最长观察期为10周。每...

淋巴细胞在免疫监视中起着重要作用，而淋巴细胞迁移是启动抗原特异性免疫的关键步骤1,2。该过程包括初始T淋巴细胞从胸腺迁移至血液，并进一步迁移至次级淋巴器官（如淋巴结、派伊尔集合淋巴结或脾脏），在这些部位与相应的抗原相遇。B淋巴细胞在骨髓中分化，并以初始细胞形式迁移至次级淋巴器官的滤泡中3。部分B细胞通过其受体结合抗原，并由特异性T细胞激活。这些B细胞的增殖和分化将未激活的初始B细胞推入滤泡的外套层。激活后的细胞可进一步分化为在体内巡逻的记忆B细胞，或成熟为分泌免疫球蛋白的浆细胞，并迁移至骨髓4。
套细胞淋巴瘤（MCL）发生于生发中心周围套区的初始B淋巴细胞转化为肿瘤细胞时。这些淋巴瘤细胞定位于淋巴器官的微环境中，可在无特定T淋巴细胞调控的情况下自主增殖。然而，当肿瘤细胞达到一定密度时，便会离开原有微环境，进入血液循环，继而迁移至其他器官寻找新的定植位点。鉴于黏附分子的复杂性以及趋化因子与其受体之间广泛存在的交叉反应性，该类细胞迁移的分子机制 体内 其机制尚不明确，因而阻碍了治疗。需要开发新方法以有效阻断这一迁移过程，防止淋巴瘤B细胞到达新的微环境。
套细胞淋巴瘤（MCL）是最难治疗的B细胞恶性肿瘤之一。MCL肿瘤表型的发展是一个多步骤级联过程，其特征是获得独特的生物学特性。在诊断时，大多数患者（70%） already 存在播散性疾病，其中多数病例出现脾脏、骨髓和/或胃肠道等结外受累5,6。在接受治疗的患者中，尽管传统化疗在短期内可诱导较高的缓解率，但在数年内常出现耐药性肿瘤的复发7,8。本文介绍了一种有助于理解MCL播散及其潜在生物学机制的新疾病模型：我们建立了一种源自患者原发肿瘤细胞的人源MCL异种移植小鼠模型。我们希望该模型有助于开发针对MCL播散的治疗策略，并可能为复发患者的优化诊断和治疗提供新的临床视角。

<table><tbody><tr><td>菲可-泛介质</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02</td><td>用于分离单个核细胞</td></tr><tr><td>RPMI 1640 培养基</td><td>Gibco-Life technologies</td><td>61870-010</td><td>用于稀释血液样本</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td>用于细胞洗涤</td></tr><tr><td>牛血清白蛋白（BSA）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8412</td><td>用于配制含1% BSA的PBS，用于细胞分离过程中的洗涤</td></tr><tr><td>CD19-APC700</td><td>Beckman Coulter</td><td>B49212</td><td>人全B细胞标记物</td></tr><tr><td>CD20-APC</td><td>Beckman Coulter</td><td>A21693</td><td>人全B细胞标记物</td></tr><tr><td>CD20-ECD</td><td>Beckman Coulter</td><td>IM3607</td><td>人全B细胞标记物</td></tr><tr><td>CD5-PC 5.5</td><td>Beckman Coulter</td><td>PN A70203</td><td>人T细胞标记物</td></tr><tr><td>CD23-PE</td><td>Pharmingen</td><td>555711</td><td>通常在套细胞淋巴瘤（MCL）中缺失的细胞表面蛋白</td></tr><tr><td>CD45 KO</td><td>Beckman Coulter</td><td>B36294</td><td>全白细胞标记物</td></tr><tr><td>CD200-PE</td><td>Pharmingen</td><td>552475</td><td>通常在套细胞淋巴瘤（MCL）中缺失的细胞表面蛋白</td></tr><tr><td>NOD scid gamma（NSG）小鼠</td><td>Charles River Laboratories</td><td>5557</td><td>本研究中用于建立MCL异种移植模型</td></tr><tr><td>EasySep人B细胞富集试剂盒</td><td>Stem cell technologies</td><td>19054</td><td>用于富集B细胞，以获得纯化的细胞用于注射至小鼠体内</td></tr><tr><td>FACS</td><td>Beckman Coulter</td><td>Navios</td><td>用于表征MCL样本及检测器官中MCL的移植情况</td></tr><tr><td>1× 氯化铵钾缓冲液</td><td></td><td></td><td>红细胞裂解缓冲液（NH4Cl 8,024 mg/L；KHCO3 1,001 mg/L；EDTA.Na2&amp;middot;2H2O 3.722 mg/L）</td></tr></tbody></table>

人套细胞淋巴瘤异种移植小鼠模型中的肿瘤移植

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

B 淋巴细胞在免疫细胞循环中起关键作用，主要归巢并驻留在淋巴器官中。正常 B 细胞仅在 T 淋巴细胞刺激下增殖，而肿瘤性 B 细胞则能在未明确定义的器官微环境中自主存活并扩增。套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma, MCL）即为一种此类 B 细胞疾病，患者中位生存期为 4 至 5 年。因此，亟需开发有效策略，阻断这些细胞的归巢与植入，以延长患者的生存时间。为此，需建立异种移植小鼠模型，用于研究通过抑制归巢机制来评估 MCL 治疗药物的有效性 体内 至关重要。长期以来，人们一直致力于开发用于人体细胞异种移植以测试早期药物的动物受体，因为相关的临床前小鼠模型对于筛选新的治疗药物至关重要。该动物模型的建立旨在避免人体移植物排斥反应，并为人类疾病构建研究模型，可能成为研究不同类型淋巴瘤疾病进展以及对血液系统恶性肿瘤（如套细胞淋巴瘤，MCL）候选药物进行临床前测试的极为有用的工具。我们建立了一种异种移植小鼠模型，可作为研究和开发MCL新型治疗策略的优良资源。

该论文描述了一种优化的实验方案，可用于成功建立套细胞淋巴瘤（MCL）细胞移植的异种移植小鼠模型。获得纯化的细胞群体（在本研究中为MCL细胞）对于成功构建MCL异种移植模型至关重要。 图1 代表通过密度梯度离心法从套细胞淋巴瘤（MCL）患者血液中分离单个核细胞的制备步骤。进一步使用阴性B细胞富集试剂盒对单个核细胞进行处理，以获得高纯度的B细胞群体，用于移植至小鼠体内。为确保MCL细胞成功植入，应尽可能提高细胞纯度。采用该方法获得的细胞纯度通常为 &gt;90%。剩余细胞主要为单核细胞及少量T细胞（数据未显示）。
图2展示了方法部分所述B细胞纯化方案的不同步骤。通过流式细胞仪使用多种标记物（CD45、CD19、CD20、CD23、CD200、CD5、kappa和lambda）对富集后的细胞进一步分析其纯度。如<strong class="...

套细胞淋巴瘤（MCL）是一种难以治疗的B细胞疾病，建立用于研究和开发治疗方法的原发性MCL异种移植小鼠模型同样具有挑战性。本文中，我们描述了在小鼠中成功建立MCL异种移植模型的方法，以帮助深入理解其潜在的生物学特性。

B 淋巴细胞在免疫细胞循环中起着关键作用，主要归巢并驻留在淋巴器官中。正常 B 细胞仅在……时发生增殖。

本方法的总体目标是建立套细胞淋巴瘤的异种移植小鼠模型，以开发该疾病的治疗策略。该方法有助于回答血液肿瘤学领域中的关键问题，例如不同治疗策略的治疗效果。该技术的主要优势在于，它使我们能够在体内研究药物对人类淋巴瘤细胞的作用。该技术的应用前景涉及套细胞淋巴瘤的治疗，因为利用此模型不仅能够研究治疗对患者来源细胞的影响，而且操作简便。尽管该方法可为套细胞淋巴瘤的治疗研究提供重要信息，也可推广应用于其他类型淋巴瘤的研究。通常，初学者在应用该方法时会面临困难，主要原因在于获取患者来源的异种移植样本较为困难。当我们最初提出该方法时，是为了研究体内B细胞迁移及其对某些治疗干预的影响。将12毫升套细胞淋巴瘤血液样本与等体积的RPMI 1640培养基混合稀释。然后，在使用前将密度梯度介质反复倒置数次。在50毫升离心管中加入15毫升密度梯度介质。借助移液器，将稀释后的血液样本小心且轻柔地加在密度梯度介质上方，避免两层液体混合。随后，关闭离心机刹车，于室温下以400×g离心40分钟。使用无菌巴斯德吸管从中间层吸取单个核血细胞，并转移至一个洁净的离心管中。为洗涤单个核细胞，向估计体积的细胞悬液中加入三倍体积的含1%胎牛血清的无菌1倍磷酸盐缓冲液。反复吹打细胞悬液数次以充分混匀。然后，在室温下以400-500×g离心10-15分钟。离心后，弃去上清液，并用含1%牛血清白蛋白的1倍浓度磷酸盐缓冲液洗涤细胞沉淀。再次离心样品。然后，弃去上清液，并将细胞重悬于一至二毫升磷酸盐缓冲液中。接着使用自动细胞计数仪对细胞数量进行计数。用磷酸盐缓冲液稀释细胞，然后将细胞移液至一个5毫升聚苯乙烯管中，并向细胞悬液中加入100微升抗体混合液。轻轻吹打细胞悬液数次以充分混匀。随后将细胞在室温下的超净台中孵育10分钟。在此期间，将B细胞富集试剂盒中的磁性颗粒涡旋振荡30秒。然后，向2毫升细胞悬液中加入150微升磁性颗粒。将细胞与磁性颗粒的混合物在室温下孵育5分钟。将样品体积调整至2.5毫升，随后将试管放入磁架中，再孵育3至5分钟。孵育后，将连接磁铁的离心管中的细胞悬液一次性连续倒入新管中。随后使用自动细胞计数仪对悬液中的B细胞总产量进行计数。为确认富集B细胞的纯度，取约50,000个细胞，在室温下与偶联不同荧光染料的抗CD19、CD20和抗CD45抗体孵育15–30分钟。随后，用一毫升含1%牛血清白蛋白的1×磷酸盐缓冲液洗涤细胞。在室温下以400–500×g离心五分钟。离心后，弃去上清液，并将沉淀重悬于200微升磷酸盐缓冲液中。使用流式细胞术分析B细胞的纯度，该方法通常可达到90%以上。将细胞重悬于150 µL的1×磷酸盐缓冲液中。随后，无论小鼠性别，将其尾静脉注射入6至7周龄小鼠体内。将从患者血液中分离的淋巴瘤细胞通过尾静脉静脉注射到小鼠体内，对于确保成功移植也至关重要。在二氧化碳安乐死小鼠后，收集不同器官。然后，使用注射器活塞的末端在70微米滤膜上对器官进行机械性解离，以制备单细胞悬液。除血液外，将所有样品在400至500×g离心5分钟，弃去上清液。使用单倍浓度的氯化铵-氯化钾缓冲液裂解血液、骨髓、脾脏和肝脏细胞。在将从小鼠分离的器官获得的细胞进行流式细胞术分析前，过滤以获得单细胞悬液，这对于防止仪器堵塞至关重要。使用B细胞特异性抗体（如抗CD19、CD20和CD45抗体）对细胞进行染色。通过流式细胞术分析，获得来自各器官的B细胞，其表达CD19阳性、CD20阳性和CD45阳性抗体标记。根据设门的细胞群，定量分析来自套细胞淋巴瘤注射小鼠的器官特异性细胞及移植肿瘤细胞。本研究通过流式细胞术分析套细胞淋巴瘤在富集前后B细胞的纯度。为鉴定单核型套细胞淋巴瘤，采用了B细胞特异性标志物，如CD45、CD19、CD5、CD200、CD20、Kappa和Lambda。流式细胞术分析结果显示，细胞对CD45、CD19、CD20和CD5呈阳性染色。然后选择这些细胞进行表征。同时选择未表达CD23和CD200染色的细胞。通过进一步采用流式细胞术处理器官，然后分析B细胞，来研究器官特异性植入程度。此处展示的是利用脾脏、骨髓和肝脏等器官，从两名患者获得的移植模式的比较图示。一旦掌握该技术，可在三周内完成操作。在进行此操作时，需注意富集用于异种移植的外周血单个核细胞（PBMCs），并定期监测小鼠的疾病体征，如毛发竖立、弓背、后肢瘫痪和体重减轻。采用此方法后，异种移植技术可应用于其他类型的淋巴瘤，例如，有助于实现个体化治疗。该技术发展成熟后，可为血液肿瘤学领域的研究人员探索如何在免疫缺陷的nod scid小鼠体内建立源自患者的套细胞淋巴瘤模型提供新的途径。观看本视频后，您应能充分了解如何纯化患者来源的外周血单个核细胞（PBMCs），并将其用于免疫缺陷小鼠的异种移植，以深入理解治疗策略的机制。请注意，处理人源性血液样本可能具有极高的危险性，进行这些操作时必须采取预防措施，例如始终佩戴手套。

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癌症研究

人地幔细胞淋巴瘤移植小鼠模型中肿瘤植入的研究

本文描述了一种将荧光素酶标记的人恶性外周神经鞘瘤细胞稳定移植到免疫缺陷小鼠坐骨神经中的方法。同时讨论了利用生物发光成像技术验证肿瘤移植物成功建立的标准，以及将动物随机分入研究组别的依据。...

人源荧光素酶标记的恶性周围神经鞘瘤细胞原位异种移植 体内 候选治疗药物的测试

本视频展示了一种建立人源化异种移植小鼠模型的实验方法。将免疫缺陷小鼠注射环磷酰胺以耗竭其免疫细胞，随后将来源于患者的肿瘤细胞与人外周血单个核细胞（PBMCs）混合于水凝胶中，皮下注射至小鼠体内，从而形成含有T细胞浸润的肿瘤。...

一种构建人PBMC嵌合人源化异种移植小鼠模型的技术

免疫缺陷小鼠中的人类肿瘤异种移植模型是研究癌症生物学的有力工具。本文描述了从人肝细胞癌细胞或肿瘤组织片段建立皮下和肝内异种移植模型的具体实验方案。通过部分肝切除术诱导受体小鼠肝脏再生，可作为促进肝内移植瘤定植的有效策略。...

在免疫缺陷小鼠中建立人肝细胞癌皮下及肝内异种移植模型

本文介绍了一种在携带原位人源性原发性脑肿瘤的免疫缺陷小鼠中，制备并进行立体定向移植同种异体人淋巴细胞的实验方案。本研究为细胞免疫疗法经颅内递送的可行性和抗肿瘤疗效提供了概念验证。...

立体定向过继性移植细胞毒性免疫细胞至原位人源多形性胶质母细胞瘤异种移植小鼠模型

在此，我们采用生物发光、X射线以及正电子发射断层扫描/计算机断层扫描成像技术，研究抑制mTOR活性对异种移植模型中骨髓植入性骨髓瘤肿瘤的影响。该方法可对靶向骨髓植入性骨髓瘤肿瘤的治疗手段的抗骨髓瘤效应进行符合生理条件的、无创的和多模态的分析 体内.

NOG小鼠中多发性骨髓瘤骨髓异种移植的多模态生物发光与正电子发射断层扫描/计算机断层扫描成像

本文介绍了一种在异种移植物抗宿主病（xenoGVHD）模型中诱导并评估疾病发生的方法。xenoGVHD...

异基因小鼠模型中移植物抗宿主病的诱导与评分及使用数字PCR定量小鼠组织中的人源T细胞

我们描述了一种基于人外周血单个核细胞（PBMC）的人源化异种移植小鼠模型，用于转化性肿瘤免疫学研究。该方案可作为建立和表征类似模型以评估免疫肿瘤学疗法的通用指南。...

用于转化性肿瘤免疫学（I-O）研究的人源外周血单个核细胞（PBMC）移植人源化异种移植模型

本方案描述了从手术获取的胃癌样本中建立患者来源的异种移植（PDX）模型和原代癌细胞系的方法。这些方法为药物开发和癌症生物学研究提供了有用的工具。...

建立胃癌患者来源的异种移植模型和原代细胞系

采用手术原位移植技术，将患者来源的肿瘤组织块植入小鼠体内，同时结合培养的人眼葡萄膜黑色素瘤细胞系进行针头注射，从而建立人肝转移性葡萄膜黑色素瘤的原位异种移植小鼠模型。...

在免疫缺陷小鼠中建立肝脏原位人眼葡萄膜黑色素瘤异种移植平台

本文介绍了一种用于在小鼠肿瘤模型中表征肿瘤固有及外周来源的肿瘤浸润淋巴细胞的肿瘤移植方案。通过流式细胞术特异性追踪受体来源免疫细胞的浸润，可揭示这些细胞在抗肿瘤免疫应答过程中表型与功能变化的动力学特征。...

小鼠肿瘤浸润性CD8+ T细胞动态评估的肿瘤移植方法

本方案描述了如何将人皮肤移植到非肥胖型糖尿病（NOD）-scid...

异种移植皮肤模型用于调控人类免疫反应 体内

学习建立套细胞淋巴瘤异种移植小鼠模型，用于血液肿瘤学治疗策略研究。该方法可在体内评估药物对人淋巴瘤细胞的治疗效果，为个性化医疗提供重要研究工具。

人套细胞淋巴瘤异种移植小鼠模型中的肿瘤移植

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