Name: 水平凝胶电泳用于增强蛋白质 - RNA复合物的检测 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 36 s
Description: 学习水平天然聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，用于分析RNA-蛋白质相互作用并实时监测复合物形成。该方法可同时检测48个样品，为RNA生物化学研究提供重要工具。

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感谢 Laura Vanderploeg 在制备图示方面的工作。Sheets 实验室的工作由美国国家科学基金会（NSF）资助项目 1050395 和美国国立卫生研究院（NIH）资助项目（R21HD076828）支持。Ryder 实验室的工作由美国国立卫生研究院（NIH）资助项目 R01GM117237 和 R01GM117008 支持。Megan Dowdle 获得威斯康星大学麦迪逊分校研究生院 SciMed GRS 高级机会奖学金以及美国国立卫生研究院下属国家普通医学科学研究所生物技术培训项目（T32GM008349）的支持。

1. 水平天然聚丙烯酰胺凝胶的制备4。
<ol>
	<li>准备所需材料。
	<ol>
		<li>对于水平凝胶装置，使用一个尺寸为 37 cm × 24 cm 的电泳槽，配备 27 cm × 21 cm 的托盘，并可容纳两个 24 孔梳子。此设置可同时分析总共 48 个样品。</li>
		<li>准备以下试剂：40% 丙烯酰胺-双丙烯酰胺（19:1）、5× TBE（Tris-硼酸-EDTA，pH 8.0）、TEMED 和 10% 过硫酸铵（APS）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>制备 10% 天然丙烯酰胺凝胶。
	<ol>
		<li>在 500 mL 锥形瓶中加入 80 mL 5× TBE、100 mL 40% 丙烯酰胺溶液，并加水至终体积为 400 mL。</li>
		<li>加入 4 mL 10% APS 和 400 µL TEMED，充分混匀。</li>
		<li>将混合液倒入水平制胶托盘中，静置聚合 30 分钟。凝胶厚度约为 2 cm。 
		注意：可在通风橱中制胶以加快聚合速度。聚合完成后，凝胶表面将残留一层薄液体。</li>
		<li>倾去液体，并用运行缓冲液冲洗。小心拔出梳子，并使用注射器以运行缓冲液冲洗加样孔。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>运行缓冲液的配制。
	<ol>
		<li>为电泳槽配制 2 L 的 1× TBE 运行缓冲液。将 400 mL 5× TBE 用 1600 mL 水稀释并混匀。将 1× TBE 缓冲液置于冷室中冷却。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>凝胶预电泳。
	<ol>
		<li>向电泳槽中加入 2 L 冷却的运行缓冲液，并插入凝胶。</li>
		<li>在冷室中以 4 °C、120 V 预电泳 1 小时。在此期间，准备结合反应体系。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 结合反应8
<ol>
	<li>2.1. 准备以下反应组分。 
	20 mM DTT 
	10 mM BSA 
	10 mM 酵母tRNA 
	5X 结合缓冲液（50 mM HEPES pH 8.0，5 mM EDTA，250 mM KCl，0.2% Tween-20） 
	商业购买的荧光素标记RNA，浓度为100 nM 
	浓缩的Bicaudal-C蛋白 
	DEPC处理过的H2O中含50%甘油 
	DEPC处理过的H2O</li>
	<li>在无RNase的微量离心管中配制结合反应体系。
	<ol>
		<li>向离心管中加入5 µL 10 mM BSA、5 µL 20 mM DTT、5 µL 10 mM 酵母tRNA以及10 µL 5x 结合缓冲液。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>加入蛋白，使其终浓度为250 nM，总体积为50 µL；再加入水，使终体积达到45 µL。</li>
	<li>加入5 µL 荧光标记的RNA底物。使用商业购买的3'端荧光素标记的32核苷酸底物。</li>
	<li>混匀后避光孵育，室温下反应30分钟。</li>
</ol>
3. 天然水平聚丙烯酰胺凝胶上样品的分析
<ol>
	<li>向每个反应体系中加入 15 µL 的 50% 甘油，并轻轻混匀。</li>
	<li>小心地将每个反应体系中的 30 µL 加样至凝胶中。单个加样孔可加载的样品量取决于凝胶厚度和加样孔大小。我们曾将 15 µL 至 45 µL 不等的体积加样至使用 24 孔梳、厚度为 2 cm 的凝胶单孔中。</li>
	<li>将电源连接至凝胶电泳装置后，打开电源并调节电压。在 4 °C 条件下以 120 V 进行电泳。 
	注意：对于水平电泳装置，这相当于约 5 V/cm；对于垂直电泳装置，则为 16 V/cm。
	<ol>
		<li>为防止荧光标记的 RNA 受损或淬灭，应在避光条件下进行电泳。</li>
		<li>根据所分析的 RNA-蛋白质复合物的具体情况调整电泳时间。 
		注意：水平 EMSA 分析的一个主要优势在于，电泳可中途暂停，对凝胶成像后，再将凝胶放回装置中继续进行更长时间的电泳。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 凝胶成像
<ol>
	<li>使用专为检测和成像荧光底物设计的任何仪器进行分析。</li>
	<li>将凝胶放置在成像仪上。</li>
	<li>调整成像仪设置。对于荧光素标记的RNA配体，使用以下设置：FAM（波长473 nm），750 光电倍增管电压（PMT），100 µm 像素尺寸。</li>
	<li>扫描凝胶以获取图像。</li>
</ol>

<ol><li>Ryder, S. P., Recht, M. I., Williamson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+protein-RNA+interactions+by+gel+mobility+shift%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of protein-RNA interactions by gel mobility shift.</a> Methods Mol Biol. 488, 99-115 (2008).</li>
<li>Dahlberg, A. E., Dingman, C. W., Peacock, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoretic+characterization+of+bacterial+polyribosomes+in+agarose-acrylamide+composite+gels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Electrophoretic characterization of bacterial polyribosomes in agarose-acrylamide composite gels.</a> J Mol Biol. 41 (1), 139-147 (1969).</li>
<li>Hellman, L. M., Fried, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoretic+mobility+shift+assay+%28EMSA%29+for+detecting+protein-nucleic+acid+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Electrophoretic mobility shift assay (EMSA) for detecting protein-nucleic acid interactions.</a> Nat Protoc. 2 (8), 1849-1861 (2007).</li>
<li>Pagano, J. M., Farley, B. M., Essien, K. I., Ryder, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+recognition+by+the+embryonic+cell+fate+determinant+and+germline+totipotency+factor+MEX-3%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">RNA recognition by the embryonic cell fate determinant and germline totipotency factor MEX-3.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 106 (48), 20252-20257 (2009).</li>
<li>Royer, C. A., Scarlata, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+approaches+to+quantifying+biomolecular+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Fluorescence approaches to quantifying biomolecular interactions.</a> Meth Enzymol. 450, 79-106 (2008).</li>
<li>Su, C., Wang, F., Ciolek, D., Pan, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoresis+of+proteins+and+protein-protein+complexes+in+native+polyacrylamide+gels+using+a+horizontal+gel+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Electrophoresis of proteins and protein-protein complexes in native polyacrylamide gels using a horizontal gel apparatus.</a> Anal Biochem. 223, 93-98 (1994).</li>
<li>Buczek, P., Horvath, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermodynamic+Characterization+of+Binding+Oxytricha+nova+Single+Strand+Telomere+DNA+with+the+Alpha+Protein+N-terminal+Domain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Thermodynamic Characterization of Binding Oxytricha nova Single Strand Telomere DNA with the Alpha Protein N-terminal Domain.</a> J Mol Biol. 359 (5), 1217-1234 (2006).</li>
<li>Zhang, Y., Park, S., Blaser, S., Sheets, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+RNA+binding+and+translational+repression+by+the+Bicaudal-C+regulatory+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Determinants of RNA binding and translational repression by the Bicaudal-C regulatory protein.</a> J Biol Chem. 289 (11), 7497-7504 (2014).</li>
<li>Gamberi, C., Lasko, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bic-C+family+of+developmental+translational+regulators%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Funct+Genomics%22%5BJournal%5D)">The Bic-C family of developmental translational regulators.</a> Comp Funct Genomics. , 141386(2012).</li>
<li>Saffman, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Premature+translation+of+oskar+in+oocytes+lacking+the+RNA-binding+protein+bicaudal-C%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Premature translation of oskar in oocytes lacking the RNA-binding protein bicaudal-C.</a> Mol Cell Biol. 18 (8), 4855-4862 (1998).</li>
<li>Chicoine, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicaudal-C+recruits+CCR4-NOT+deadenylase+to+target+mRNAs+and+regulates+oogenesis%2C+cytoskeletal+organization%2C+and+its+own+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Bicaudal-C recruits CCR4-NOT deadenylase to target mRNAs and regulates oogenesis, cytoskeletal organization, and its own expression.</a> Dev Cell. 13 (5), 691-704 (2007).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicaudal-C+spatially+controls+translation+of+vertebrate+maternal+mRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Bicaudal-C spatially controls translation of vertebrate maternal mRNAs.</a> RNA. 19 (11), 1575-1582 (2013).</li>
<li>Maisonneuve, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicaudal+C%2C+a+novel+regulator+of+Dvl+signaling+abutting+RNA-processing+bodies%2C+controls+cilia+orientation+and+leftward+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Bicaudal C, a novel regulator of Dvl signaling abutting RNA-processing bodies, controls cilia orientation and leftward flow.</a> Development. 136 (17), 3019-3030 (2009).</li>
<li>Tran, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNA-binding+protein+bicaudal+C+regulates+polycystin+2+in+the+kidney+by+antagonizing+miR-17+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The RNA-binding protein bicaudal C regulates polycystin 2 in the kidney by antagonizing miR-17 activity.</a> Development. 137 (7), 1107-1116 (2010).</li>
<li>Pagano, J. M., Clingman, C. C., Ryder, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+approaches+to+monitor+protein-nucleic+acid+interactions+using+fluorescent+probes%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Quantitative approaches to monitor protein-nucleic acid interactions using fluorescent probes.</a> RNA. 17 (1), 14-20 (2011).</li>
<li>Foley, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platform+to+Enable+the+Pharmacological+Profiling+of+Small+Molecules+in+Gel-Based+Electrophoretic+Mobility+Shift+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Platform to Enable the Pharmacological Profiling of Small Molecules in Gel-Based Electrophoretic Mobility Shift Assays.</a> J Biomol Screen. 21 (10), 1125-1131 (2016).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

天然聚丙烯酰胺凝胶是研究蛋白质-RNA相互作用的重要工具，传统上这些凝胶采用垂直电泳方式2,3。我们采用了一种改进的方案，使用水平制备和水平电泳的天然聚丙烯酰胺凝胶1,4,6,7,15。这种改进结合荧光标记的RNA底物，在蛋白质-RNA结合相互作用的生化分析中具有多种优势：与需要泵将缓冲液从下层室转移到上层室的垂直装置相比，水平系统的缓冲液配制更为简便；水平凝胶可制备更大的加样孔，从而提高对较大样本的分析能力；水平凝胶电泳通常比垂直凝胶能提供更佳的RNA-蛋白质复合物分辨效果；此外，水平凝胶电泳还允许在分析过程中对实验进行多个时间点的成像观察。
<p class="jove_content"...

电泳迁移率变动分析（EMSAs）已被证明是分析特定蛋白质-核酸相互作用的一种极为重要的生物化学工具1,2,3。该分析方法可提供有关蛋白质与RNA或DNA结合亲和力的重要信息3，核酸-蛋白质复合物的组分化学计量关系1，并通过底物竞争实验为RNA结合蛋白的结合特异性提供重要的新见解1。
这些实验的传统设置包括将纯化的蛋白质与放射性标记的RNA底物混合。随后，通过在两块玻璃板之间灌注的非变性（天然）聚丙烯酰胺凝胶对形成的复合物进行分析，并在垂直电泳装置中进行样品电泳3。尽管该方法已被广泛用于深入揭示蛋白质与核酸结合背后的生物化学机制，但也存在若干局限性。例如，这种基本策略的通量相对较低，难以适应需要平行分析大量结合反应的应用场景。此外，在使用传统的垂直电泳装置时，难以在电泳过程中多个时间点对复合物进行实时监测3,4。
本文介绍了一种对EMSA实验方法的改进，该方法采用在平板装置中制备的天然聚丙烯酰胺凝胶、水平电泳以及荧光标记的RNA底物4,5,6,7。在基本实验策略中引入这些相对简单的改进后，带来了一些显著优势。特别是，水平平板电泳格式可轻松实现数十个样品的同步分析4。此外，对于某些RNA-蛋白质复合物（例如Bicaudal-C蛋白与其RNA底物形成的复合物），在水平凝胶中进行电泳能够更有效地分辨不同的RNA-蛋白质复合物，并将其与未结合的RNA底物区分开来。

<table><tbody><tr><td>水平凝胶电泳槽</td><td>OWL</td><td>N/A</td><td>该产品已停产。类似产品可参见赛默飞世尔科技（Thermo Scientific）A系列凝胶电泳槽，目录号：A2-BP</td></tr><tr><td>24孔大型水平凝胶电泳梳子</td><td>OWL</td><td>N/A</td><td>该产品已停产。类似产品可参见赛默飞世尔科技（Thermo Scientific）A系列凝胶电泳梳，目录号：A2-24C</td></tr><tr><td>Powerpac 300</td><td>Bio-Rad</td><td>1655050</td><td></td></tr><tr><td>Mini-Protean II 电泳槽</td><td>Bio-Rad</td><td>165-2940</td><td></td></tr><tr><td>InstaPAGE-19 40% 19:1 丙烯酰胺/双丙烯酰胺溶液</td><td>IBI</td><td>IB70015</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>IBI</td><td>IB70120</td><td></td></tr><tr><td>APS</td><td>IBI</td><td>IB70080</td><td></td></tr><tr><td>酵母tRNA</td><td>Ambion</td><td>AM7119</td><td></td></tr><tr><td>荧光素标记RNA</td><td>IDT</td><td>N/A</td><td>可根据所需长度和序列定制订购</td></tr><tr><td>乙二胺四乙酸四钠盐水合物</td><td>西格玛-奥德里奇（Sigma-Aldrich）</td><td>E5391-1KG</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>西格玛-奥德里奇（Sigma-Aldrich）</td><td>H4034-500G</td><td></td></tr><tr><td>超纯Tris碱</td><td>US Biological</td><td>T8600</td><td></td></tr><tr><td>硼酸</td><td>菲舍尔科技（Fisher Scientific）</td><td>BP168-500</td><td></td></tr><tr><td>氯化钾</td><td>菲舍尔科技（Fisher Scientific）</td><td>BP366-1</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>菲舍尔科技（Fisher Scientific）</td><td>BP337-500</td><td></td></tr><tr><td>DEPC</td><td>西格玛-奥德里奇（Sigma-Aldrich）</td><td>1609-47-8</td><td></td></tr><tr><td>二硫苏糖醇（DTT）</td><td>西格玛-奥德里奇（Sigma-Aldrich）</td><td>3483 12 3</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白（BSA）</td><td>西格玛-奥德里奇（Sigma-Aldrich）</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr></tbody></table>

用于增强检测蛋白质-rna 复合物的水平凝胶电泳

Horizontal Gel Electrophoresis for Enhanced Detection of Protein-RNA Complexes

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是分子生物学的一项基本工具，已广泛用于RNA-蛋白质相互作用的生化分析。传统上，这些相互作用是通过在两块玻璃板之间制备的聚丙烯酰胺凝胶，并在垂直方向上进行样品电泳来分析的。然而，使用托盘制备并在水平方向上进行电泳的聚丙烯酰胺凝胶具有多项优势。例如，在分析荧光标记RNA底物与特定蛋白质形成的复合物时，可在电泳过程中多次成像水平凝胶，从而能够在实验的多个时间点实时监测RNA-蛋白质复合物的迁移情况。此外，水平凝胶电泳可实现多个样品的平行分析，这大大有利于时间进程实验，以及同时比较不同组分和条件下的多个反应。本文提供了一套详细的实验方案，用于制备和使用水平非变性凝胶电泳来分析RNA-蛋白质相互作用。

为了展示水平非变性凝胶电泳的强大功能与广泛应用性，我们分析了结合过程的 非洲爪蟾 Bicaudal-C（Bicc1）蛋白与含有Bicc1结合位点的荧光标记RNA结合。Bicc1蛋白作为mRNA特异性的翻译抑制因子，在动物发育的母源阶段调控细胞命运决定9,10,11,12 以及成人特定器官的功能13,14. 我们在 非洲爪蟾 鉴定出Bicc1蛋白的第一个结合位点8Cripto-1 mRNA 3'非翻译区的一个32个核苷酸的区域8,<sup class="...

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是分析RNA-蛋白质相互作用的基本工具。传统上，大多数实验采用垂直凝胶。然而，水平凝胶具有多个优势，例如可在电泳过程中实时监测复合物的迁移情况。本文提供了一种制备和使用水平非变性凝胶电泳的详细实验方案。

用于增强检测蛋白质-RNA 复合物的水平凝胶电泳

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是分子生物学的一项基本工具，已被广泛用于生物化学分析……

本方案的总体目标是利用水平非变性凝胶电泳分析RNA与蛋白质的相互作用。该方法有助于解答RNA生物化学领域中的关键问题，例如明确特定RNA-蛋白质相互作用的特征。该技术的主要优势在于可在电泳过程中多次监测复合物的形成情况。对于水平凝胶电泳装置，使用带有 27 厘米 × 21 厘米制胶托盘的电泳槽，并可容纳两把 24 孔梳子。此配置可同时分析总共 48 个样品。通过将 400 毫升 5x TBE 缓冲液与 1,600 毫升水混合，稀释配制 2 升 1x TBE 电泳缓冲液。将TBE缓冲液置于冷室中冷却。按照标准操作步骤准备以下试剂：40%丙烯酰胺（最佳比例19:1）、5×TBE、TEMED和10%过硫酸铵。制备10%非变性丙烯酰胺凝胶时，向500毫升烧瓶中加入以下成分：80毫升5×TBE、100毫升40%丙烯酰胺，并加水至终体积为400毫升。加入4毫升10%过硫酸铵和400微升TEMED，充分混匀。将混合液倒入水平制胶盘中，在通风橱中静置聚合30分钟。聚合后的凝胶厚度约为2厘米，凝胶表面将残留一层薄薄的液体。将凝胶放入电泳槽并移至冷室。随后倒出液体，用冷的电泳缓冲液冲洗。小心移除梳子，向电泳槽中加入两升冷的电泳缓冲液，然后用注射器以电泳缓冲液冲洗加样孔。在4摄氏度的冷室中，以120伏电压预电泳凝胶1小时。在凝胶预电泳的同时，准备结合反应。按以下顺序向每个无RNA的微量离心管中加入下列结合反应组分：5 µL 10 mM BSA、5 µL 20 mM DTT、5 µL 10 mM 酵母tRNA、10 µL 5×结合缓冲液、bicaudal-c蛋白（终浓度为250 nM，总体积50 µL）、DEPC处理水（补足至终体积45 µL）以及5 µL荧光标记的RNA底物。盖上管盖，轻轻弹动混匀，短暂离心后于室温避光孵育30分钟。当结合反应完成后，向每个反应体系中加入15 µL 50%甘油，轻轻混匀。小心将每个反应体系中的30 µL样品加入凝胶孔中，单个孔所能加载的样品量取决于凝胶厚度和孔的大小。将凝胶电泳装置连接电源，打开电源开关，调节电压至120伏，并在4摄氏度条件下进行电泳。为防止荧光标记的RNA发生损伤或淬灭，应在避光条件下进行电泳。电泳时间将根据所分析的RNA-蛋白质复合物的具体情况而有所不同。水平电泳迁移率偏移分析的一个主要优势是，可以在电泳运行完成之前停止凝胶成像。使用任何专为检测荧光底物成像而设计的仪器进行分析。针对荧光标记的配体，调整成像仪设置，采用以下参数。荧光素激发波长为473纳米，光电倍增管电压为750伏特，像素大小为100微米。扫描凝胶以获取图像。成像后，可将凝胶重新放回装置中，并继续电泳更长时间。通过垂直和水平天然凝胶电泳分析了非洲爪蟾 bicaudal-C 或 Bicc1 蛋白与含有 Bicc1 结合位点的荧光标记 Cripto1 mRNA 的结合情况。作为阴性对照，将 Bicc1 与来源于 CyclinB1 mRNA 的荧光标记 RNA 混合。两种方法均明显显示，Bicc1 能够结合 Cripto1 RNA 并形成特异性复合物。然而，使用水平凝胶分析时，Bicc1 与 Cripto1 的复合物更为清晰，有利于检测，并可有效区分蛋白-RNA 复合物与未结合的 RNA。成像后，将凝胶放回电泳装置，继续电泳三个半小时，然后重新成像。如图所示，复合物迁移得更远，但仍可清晰检测，表明其具有稳定性。一旦掌握，该技术若操作得当，可在四到五小时内完成。观看本视频后，您应能够充分理解如何利用水平非变性凝胶电泳分析RNA与蛋白质的相互作用。

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水平凝胶电泳用于增强蛋白质 -  RNA复合物的检测

来源： Stenum, T. S., 等 转运RNA丰度及其氨酰化水平的定量分析 大肠杆菌. 视频实验杂志 (2017)本视频演示了如何通过分离氨酰化和去氨酰化的tRNA形式，利用凝胶电泳和RNA印迹技术来检测和比较大肠杆菌（E.

凝胶电泳与RNA印迹法检测tRNA充电水平 大肠杆菌

本视频展示了一种基于变性聚丙烯酰胺的蛋白质分离技术。该技术可根据蛋白质的分子量对其进行初步鉴定。...

基于分子量分离与可视化蛋白质的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳技术：用于蛋白质分析

在本视频中，我们演示了一种二维凝胶电泳方法，该方法可从人无功能性垂体腺瘤（NFPA）的肿瘤组织中获得的复杂蛋白质混合物中分离出单个蛋白质。蛋白质首先在第一维中根据其电荷进行分离，然后在第二维中根据其分子量进一步分离。...

二维聚丙烯酰胺凝胶电泳：一种基于电荷和分子量分离复杂蛋白质混合物中蛋白质的分析技术

在本视频中，我们演示了使用红外荧光标记的DNA探针，通过电泳迁移率变动实验检测蛋白质-DNA相互作用的方法。当蛋白质与DNA探针结合时，会形成一个较大的复合物，在凝胶电泳中迁移较慢，并表现为发生迁移的条带。...

检测转录因子-DNA复合物的电泳迁移率变动分析

本文介绍了一种分析RNA/蛋白质相互作用的实验方案。电泳迁移率变动分析（EMSA）基于RNA/蛋白质复合物与游离RNA在非变性凝胶电泳中迁移速率的差异。通过使用放射性标记的RNA探针，可利用放射自显影技术对RNA/蛋白质复合物进行可视化检测。...

研究RNA-蛋白质相互作用的电泳迁移率变动分析（EMSA）：以IRE/IRP为例

本文以纯化的SOX-2蛋白与红外荧光染料标记的DNA探针为例，介绍了一种优化的荧光电泳迁移率变动分析（fEMSA）实验方案，用于解决一个重要生物学问题。...

使用红外荧光染料标记寡核苷酸的电泳迁移率 shift 实验优化方案

我们报告了含有修饰残基的肽核酸（PNA）寡聚体的合成与纯化方案。同时描述了用于表征修饰PNA识别RNA双链体的生物化学与生物物理方法。...

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无鞘液毛细管电泳-质谱联用技术用于生物样本的代谢谱分析

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利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对人源MxA多亚基蛋白复合物的表征

在此演示了如何 原位 邻近连接实验（Proximity Ligation Assay, PLA）可用于检测和可视化在基因毒性应激条件下悬浮培养细胞中ATM与p53之间的直接蛋白质-蛋白质相互作用。...

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学习水平天然聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，用于分析RNA-蛋白质相互作用并实时监测复合物形成。该方法可同时检测48个样品，为RNA生物化学研究提供重要工具。

用于增强检测蛋白质-RNA 复合物的水平凝胶电泳

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