Name: 大鼠实验性生殖研究中的超声检查 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: 学习使用高分辨率超声生物显微镜对Sprague-Dawley大鼠进行生殖健康监测的无创成像方法。该技术为生殖生物学和妇科研究提供了可靠的实验模型平台。

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本研究得到了穆尔西亚大学动物实验科和穆尔西亚大学妇产科的支持。我们感谢所有在穆尔西亚大学生物医学研究中心（CEIB）动物实验科工作的技术人员，他们为本项目提供了协作与支持。

本研究严格遵循美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》中的建议，并符合ARRIVE（动物研究：体内实验报告）指南的要求。实验方案已获得符合欧盟指令2010/63/EU的动物实验许可，授权编号为A13170404（附件1）。所有实验均在欧盟认证的实验室中进行，遵循国家关于动物伦理护理的指导原则（RD 53/2013，欧盟指令63/2010）。该实验方案已通过穆尔西亚大学动物实验伦理委员会的批准。
1. 动物准备
注：所有实验均得到穆尔西亚大学动物实验科和穆尔西亚大学妇产科系的支持。
<ol>
	<li>所有实验均使用8周龄、体重200–250 g的Sprague-Dawley大鼠（共28只雌性大鼠）。 
	注意：本研究中还使用了5只妊娠大鼠。</li>
	<li>为获得妊娠大鼠，将8周龄的雌性大鼠与具有生育能力的雄性大鼠同笼饲养，并在17:00至23:00期间进行交配。若次日早晨观察到阴道栓，则视为交配成功。 将交配后的次日定为妊娠第1天。</li>
	<li>在妊娠第9、15和18天进行实验。</li>
	<li>将大鼠以每笼两只的方式饲养，自由摄食饮水，并维持在12小时光照/12小时黑暗的常规光照周期中。</li>
	<li>在实验环境中适应至少两周后，每日早晨通过阴道细胞学检测评估动情周期的频率与规律性。 
	注意：选择28只动情周期规律、周期长度为4至5天的大鼠纳入本研究。</li>
</ol>
2. 成像用大鼠的制备
注意：图像采用高分辨率经腹超声检查获得。动情周期各阶段通过阴道涂片细胞学确定。
<ol>
	<li>成像研究前，将母鼠置于诱导室中，使用 2-3% 异氟烷气体进行麻醉。</li>
	<li>取出动物后，立即将其口鼻部放入与麻醉系统相连的鼻罩中，并在超声检查期间以 1.5-2% 异氟烷维持麻醉状态。</li>
	<li>使用电动剪刀和脱毛膏去除从肋缘至尾腹部的毛发。</li>
	<li>将麻醉后的实验大鼠仰卧位固定于加热台上，以确保动物稳定，并在整个成像过程中维持其生理参数处于最佳状态。所有生理参数应通过超声应用实时整合至所采集的图像和数据中。</li>
	<li>在润滑后轻轻插入直肠探头，以监测体温（37.5 °C ± 0.5 °C）。</li>
	<li>将换能器（30 Hz）置于固定支架中，并通过手动操纵杆或手工方式沿垂直轴和水平轴（前后及左右方向）移动。</li>
	<li>在大鼠眼部涂抹石油基眼用软膏，以防止操作过程中眼睛干燥。</li>
</ol>
3. 检查步骤
注意：大鼠生殖器官的解剖结构：阴道位于尿 bladder 的背侧，分为两个向肾脏方向延伸的子宫角。卵巢通过输卵管与子宫角相连（图1）。子宫位于肾脏后方区域。
<ol>
	<li>子宫的识别
	<ol>
		<li>通过将膀胱作为解剖标志来定位宫颈，沿宫颈追踪至左右子宫角的分支。</li>
		<li>通过选择切换至二维视图/视频 &#34;B型超声模式&#34;在矢状中线图像上，测量每侧子宫角峡部中间区域的前后直径，使用超声系统软件进行测量。</li>
		<li>在矢状面中线图像上，测量子宫腔内从一侧强回声边界至对侧强回声边界的子宫内膜厚度 &#34;B型超声模式&#34;.</li>
		<li>选择切换至彩色多普勒模式 &#34;彩色多普勒&#34;使用彩色多普勒识别子宫内膜的血供，并测量子宫内膜的血流。在彩色多普勒模式下选择以下参数：高通滤波器设为4 Hz，脉冲重复频率设为4至48 kHz，脉冲多普勒取样门设为0.2至0.5 mm。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>子宫动脉血流的识别
	<ol>
		<li>在子宫颈旁交界处外下缘靠近髂动脉的两侧，获取子宫动脉的多普勒血流波形。</li>
		<li>在多普勒模式下使用以下参数：高通滤波器设置为 6 Hz，脉冲重复频率设置在 4 至 48 kHz 之间，脉冲多普勒取样门设置在 0.2 至 0.5 mm 之间。</li>
		<li>注意对齐血流方向与多普勒声束，以尽量减小多普勒角度。记录多普勒声束与血管之间的夹角。当角度超过60°时，所获取的数值不准确，应避免使用。6.</li>
		<li>从三个连续周期中测量收缩期峰值流速（PSV）和舒张末期流速（EDV）。然后计算每侧子宫角的收缩期与舒张期流速比值（S/D 比值，PSV/EDV）和阻力指数（RI，[PSV−EDV]/PSV）的数值。</li>
		<li>在第9天测量5只妊娠大鼠的子宫动脉血流th, 15th, 18th 妊娠天数</li>
	</ol>
	</li>
	<li>卵巢及卵巢动脉血流的识别 
	注意：雌性大鼠的卵巢位于动物体两侧肾脏外侧，处于子宫角末端的脂肪垫内图1).
	<ol>
		<li>成像卵巢时，先将探头置于动物肋骨稍下方的侧面横向位置。与卵巢相比，肾脏和脂肪垫呈高回声。</li>
		<li>测量卵巢和卵泡的外部边界。每张图像比例尺上的数字单位为毫米，增量为0.1毫米。 
		注意：彩色多普勒模式和能量多普勒模式成像有助于识别卵巢的血流强度和方向。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 研究设计
<ol>
	<li>通过阴道涂片细胞学检查动情周期。</li>
	<li>将所有大鼠分为两组。第一组为生育前期（或围排卵期），包括处于动情前期和动情期的大鼠；第二组为生育后期，包括处于动情间期早期和动情间期晚期的大鼠。</li>
	<li>监测并比较第1组和第2组在子宫角峡部中段区域的前后直径。</li>
	<li>监测并比较第1组和第2组的子宫内膜厚度及子宫内膜特征。</li>
	<li>监测并比较第1组和第2组中两侧卵巢的大小（最大直径）及特征，并定位任一侧卵巢中的排卵前卵泡。</li>
	<li>监测并比较第1组和第2组的子宫动脉血流。</li>
	<li>监测并比较不同妊娠阶段（妊娠第9、15和18天）孕鼠子宫动脉的血流情况。</li>
	<li>执行 使用SPSS进行统计分析。数据以均值±标准差（SD）或中位数与四分位间距表示。采用学生t检验分析不同组间的结果。P值小于0.05被认为具有统计学显著性差异。</li>
</ol>

<ol><li>Hunter, R. K. II, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-Derived+Stromal+Vascular+Fraction+Cell+Effects+on+a+Rodent+Model+of+Thin+Endometrium%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cell Effects on a Rodent Model of Thin Endometrium.</a> PLoS ONE. 10 (12), e0144823(2015).</li>
<li>Wang, H., Dey, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roadmap+to+embryo+implantation%3A+clues+from+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Roadmap to embryo implantation: clues from mouse models.</a> Nat Rev Genet. 7 (3), 185-199 (2006).</li>
<li>Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+Echocardiography+and+Ultrasound+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine Echocardiography and Ultrasound Imaging.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li>
<li>Lohmiller, J. J., Swing, S. P. Reproduction and Breeding. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLohmiller%2C+JJ+%22The+Laboratory+Rat%22">The Laboratory Rat</a>. , 2nd, Elsevier Academic Press. 147-164 (2006).</li>
<li>Jaiswal, R. S., Singh, J., Adams, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+ultrasound+biomicroscopy+for+monitoring+ovarian+structures+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">High-resolution ultrasound biomicroscopy for monitoring ovarian structures in mice.</a> Reprod Biol Endocrinol. 7 (69), (2009).</li>
<li>Kim, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+Fetal+Echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine Fetal Echocardiography.</a> J Vis Exp. (72), (2013).</li>
<li>Jing, Z., Qiong, Z., Yonggang, W., Yanping, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+improve+regeneration+of+thin+endometrium+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Rat bone marrow mesenchymal stem cells improve regeneration of thin endometrium in rat.</a> Fertil Steril. 101 (2), 587-594 (2014).</li>
<li>Mu, J., Adamson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+hemodynamics+of+uterine+artery%2C+utero-+and+umbilicoplacental%2C+and+vitelline+circulations+in+mouse+throughout+gestation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in hemodynamics of uterine artery, utero- and umbilicoplacental, and vitelline circulations in mouse throughout gestation.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291 (3), H1421-H1428 (2006).</li>
<li>Anderson, C. M., Lopez, F., Zhang, H. Y., Pavlish, K., Benoit, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+uteroplacental+perfusion+alters+uterine+arcuate+artery+function+in+the+pregnant+Sprague-Dawley+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Reduced uteroplacental perfusion alters uterine arcuate artery function in the pregnant Sprague-Dawley rat.</a> Biol Reprod. 72 (3), 762-766 (2005).</li>
<li>Hongmei, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+Molecular+Imaging+of+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor+2+Expression+for+Endometrial+Receptivity+Evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Ultrasound Molecular Imaging of Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 Expression for Endometrial Receptivity Evaluation.</a> Theranostics. 5 (2), 206-217 (2015).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

由于本研究中需要进行操作步骤的修改和故障排查，尽管我们的目标是利用超声成像识别大鼠动情周期的所有阶段，但仍未能发现任何显著差异。我们推测，这些困难可能源于大鼠的动情周期仅持续数天，与人类女性的周期不同。我们确信所有测量均在准确的时间点完成，足以检测出可能存在的差异。因此，我们将动情周期的各阶段重新归为两个阶段以评估差异，但仍未观察到显著区别。与预期一致，我们发现两侧子宫角的测量值之间无显著差异，这表明今后可任选一侧子宫角进行测量。关于异氟烷对啮齿类动物影响的研究结果存在矛盾。异氟烷可能具有致畸性，但仅在麻醉浓度下持续使用数小时或数天时才会发生。在本实验中，妊娠大鼠的检查时间少于30分钟，因此我们未在任何妊娠大鼠及其子代中发现不良影响。
我们本希望在大鼠生殖道的超声评估中发现更多与女性相似的特征，例如在女性中，卵泡期、排卵期和分泌期之间存在明显的回声差异，但在大鼠模型中并未观察到此类变化。这一现象可能是因为大鼠动情周期的各个阶段仅持续四到五天。短暂的动情周期和妊娠期使大鼠成为生殖研究的理想动物模型5。然而，这一特点也可能解释了为何在动情...

大鼠动物模型已广泛应用于生殖医学领域，包括胚胎和卵巢移植1,2。然而，过去对啮齿类动物生殖系统发育的研究主要依赖于对切除组织的一次性组织学检查，无法实现对大鼠生殖器官日复一日变化的纵向研究3。超声技术在人类辅助生殖技术中已广泛应用超过30年，但这一重要技术直到近期才被应用于大鼠研究。
我们的目标是建立一种超声影像方法，用于评估 Sprague-Dawley 大鼠的生殖器官，以设计适用于生殖与妇科学研究的实验模型，并展示该操作过程，因为据我们所知，目前尚无关于此操作的可视化出版物。本文描述了雌性大鼠生殖系统的超声检查步骤，并利用高分辨率超声技术展示其解剖结构及子宫动脉血流的超声影像结果。我们对非妊娠动物在动情周期不同阶段的子宫内膜特征、卵巢形态及子宫动脉血流情况进行监测，以评估动情周期各阶段子宫内膜厚度、卵巢形态及子宫血流的显著差异，该模式与人类相似。我们采用高质量超声设备，频率为 70 MHz，分辨率达到 30 µm。 我们的另一项目标是评估妊娠大鼠子宫血流阻力的变化。该技术可实现对生殖器官每日变化的无创性研究，而无需处死动物。
在大鼠上使用超声技术存在若干技术难点。这些难点包括：大鼠子宫内膜比人类女性薄得多4。大鼠卵巢成像困难的原因在于其皮肤和腹壁肌肉较厚，导致超声波几乎完全衰减5，此外在未妊娠大鼠中子宫动脉更难定位。我们已解决了该操作中的许多技术问题，对于尚存的问题，本文也展示了如何将其影响降至最低。
无需处死动物即可成功监测大鼠生殖器官的超声影像变化，这将为建立生殖医学及其他外科手术的未来动物模型开辟可能性。

<table><tbody><tr><td>Vevo3100 高分辨率活体微成像系统*</td><td>Visual Sonics, inc.</td><td></td><td>www.visualsonics.com/products</td></tr><tr><td>包含生理监测单元的 Vevo 集成导轨系统</td><td>Visual Sonics, inc.</td><td></td><td>www.visualsonics.com/products</td></tr><tr><td>MX400 换能器</td><td>Visual Sonics, inc.</td><td></td><td>www.visualsonics.com/products</td></tr><tr><td>Vevo Lab 软件</td><td>Visual Sonics, inc.</td><td></td><td>www.visualsonics.com/products</td></tr><tr><td>HSD：Sprague Dawley SD</td><td>Envigo, inc.</td><td></td><td>大鼠品系</td></tr><tr><td>润滑凝胶</td><td>General Supply</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CIBERTEC CA-EAC20 麻醉推车系统</td><td>Cibertec S.A&amp;nbsp;</td><td></td><td>麻醉机</td></tr><tr><td>Ecogel 100 超声耦合剂</td><td>Eco-Med Pharmaceuticals Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>脱毛乳液（Nair）&amp;nbsp;</td><td>General Supply</td><td></td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>Esteve Veterinaria</td><td></td><td>吸入性麻醉剂</td></tr><tr><td>* 所需软件为 Vevo 软件，包括 B 模式成像模块、脉冲波多普勒模块和血管应变分析工具包。</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

超声成像在大鼠实验性生殖研究中的应用

Ultrasonography in Experimental Reproductive Investigations on Rats

随着辅助生殖技术的发展以及人类研究中存在的伦理限制，大鼠动物模型在生殖医学中得到了广泛应用。过去，对啮齿类动物生殖系统发育的研究主要依赖于对离体组织进行一次性组织学检查。近年来，随着高分辨率经腹超声技术的发展，现已可对大鼠生殖器官进行高质量的超声成像，从而为研究生殖系统提供了新方法。本研究采用高分辨率超声成像系统获取图像，对28只8周龄未妊娠的雌性大鼠以及5只妊娠的Sprague-Dawley大鼠进行了妇科超声检查。我们描述了在动情周期不同阶段的典型图像中识别生殖系统器官及相关结构的方法。采用彩色多普勒血流成像技术测量子宫动脉血流，评估妊娠不同阶段子宫血流模式的变化。我们已证实，超声检查是一种评估内生殖器官变化的有效方法。该技术的应用使得在不处死动物的前提下，开展包括药物或手术干预在内的进一步实验成为可能，并能够持续监测内脏器官的超声影像变化。

两侧子宫角的前后径以及子宫内膜厚度之间均无显著差异（表1）。与第2组相比，第1组的平均子宫内膜厚度较大，但两组间差异无统计学意义（P&gt;0.05）（图3）。然而，我们在接近动情周期时发现部分大鼠子宫内存在液体（28只中有8只），并伴有子宫内膜形态的改变（图2）。
多普勒研究还显示，在非妊娠大鼠的子宫角两侧以及动情周期的不同阶段，血流速度波形模式均无显著变化。表1 和 2, 图 4A）。然而，在妊娠大鼠中，随着妊娠进展，收缩期峰值速度和舒张末期速度显著增加，而计算所得的阻力指数显著降低（表3, 图 4B).
卵巢的平均直径无显著差异（表1<...

本文描述了在雌性大鼠中进行超声检查以建立生殖与妇科研究实验模型的应用价值。文中展示了如何进行超声影像评估的逐步操作说明。

随着辅助生殖技术的发展以及人类研究中存在的伦理限制，大鼠动物模型已被广泛用于……

超声成像在大鼠实验性生殖研究中的应用。本研究旨在建立一种在Sprague-Dawley大鼠中应用的超声成像方法，以设计用于生殖与妇科研究的实验模型。超声技术简介。采用高分辨率超声生物显微镜获取图像，并使用40兆赫兹换能器。准备大鼠进行成像。Ah-nas-ah 将其固定在诱导室中。将动物从诱导室中取出，并立即将其口鼻部置于连接至麻醉系统的鼻罩下。使用毛发剪和脱毛膏去除从肋缘至尾侧腹部的毛发。将麻醉后的大鼠置于仰卧位，放在加热垫上。轻轻插入直肠探头以监测体温。输注装置置于一个固定的支架中，并可沿垂直轴移动。将大鼠放置在检查台上，并沿水平轴移动。可通过手动操作的操纵杆移动输注装置。或由你的手完成。大鼠生殖器官解剖结构。阴道也与膀胱相连。它分为两个子宫角，延伸至肾脏。卵巢通过输卵管与子宫相连。子宫及子宫内膜的识别。以膀胱作为解剖标志，可观察到宫颈。沿宫颈向上追踪，可见左侧和右侧子宫角的分支。通过选择 b 模式切换到二维视图。找到子宫后，应在菜单栏中选择“测量”，然后点击“线性”以开始测量。我们可以测量每个子宫角的前后直径，并评估其形态学特征。子宫内膜厚度的测量应从回声边界至回声边界，在矢状中位图像上的子宫腔范围内进行。使用彩色多普勒。我们可以观察到子宫和子宫内膜的血流情况。结果来自28只大鼠，获得了子宫角前后径的直径数据。以及每个子宫角的子宫内膜厚度。两侧子宫角之间无显著差异。非妊娠大鼠的子宫动脉血流。这是多普勒模式的五线谱。应注意使血流与多普勒声束对齐，以尽量减小多普勒角度。在子宫动脉处获取了多普勒波形。靠近输尿管宫颈交界处的外侧下缘。接近两侧的子宫颈动脉。以下是非妊娠大鼠双侧子宫动脉血流的多普勒研究结果。我们发现不同侧之间无显著差异。妊娠大鼠子宫动脉血流。此为妊娠13天的波形图。这是15天妊娠的波形。当大鼠妊娠时，更容易找到子宫动脉，以比较妊娠不同阶段之间的差异。随着妊娠进展，收缩期峰值流速和舒张末期流速显著增加。计算所得的阻力指数在妊娠大鼠中显著降低。卵巢的识别：卵巢位于大鼠双侧肾脏外侧。并存在于子宫角末端的脂肪垫中。我们可以通过子宫寻找卵巢，因为卵巢位于子宫角的末端。并通过输卵管与子宫角相连。绿色轮廓标出了卵巢和卵泡的外部边界。以下是双侧卵巢主直径及排卵前卵泡大小的测量结果。无显著差异。卵巢动脉血流。彩色多普勒模式和能量多普勒模式成像有助于识别卵巢血流强度。以及血流方向。我们还比较了不同动情周期阶段之间的差异。尽管动情期组的主要子宫内膜厚度大于非动情期组，但两组之间差异无统计学意义。相比之下，当我们比较子宫内膜的形态时，发现五只大鼠体内存在需要额外空间的液体。在比较卵巢形态时，我们可以在排卵后观察到排卵前卵泡以及卵巢周围的液体。我们还发现，不同动情周期阶段的子宫动脉血流之间无显著差异。本研究得出结论：大鼠是利用经皮超声生物显微镜研究生殖器官动态变化的合适模型

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医学

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在本视频中，我们展示了利用高频超声成像技术对妊娠小鼠模型中的胚胎着床部位进行成像。该成像技术可成功检测出可存活的妊娠，并在小鼠早期妊娠期间对胚胎着床部位进行表征。...

基于高频超声成像的早期妊娠表征技术：用于研究妊娠小鼠模型中胚胎着床及妊娠进展的方法

来源：Giustetto, P., et. al., 非侵入性实质、血管与代谢性高频超声及光声大鼠深部脑成像。J. Vis. Exp.

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可通过在 E16 时期对大鼠的皮层或海马体进行子宫内电穿孔（IUE），在发育过程中操控基因，从而实现对成年动物神经元连接的快速且靶向的修饰，以用于后续的行为学或神经病理学研究。通过共转染的荧光素酶的生物发光，对 IUE...

通过局部转基因技术制备转基因大鼠 在子宫内 电穿孔和 在体 生物发光筛选

早期血流动力学功能障碍对肾脏疾病的发展至关重要，然而目前的检测方法仍存在局限性。近年来超声技术的进步为肾脏损伤的早期检测提供了一种无创且准确的选择。本研究详细阐述了一种利用药物诱导的肾毒性大鼠模型，通过超声成像逐步检测肾功能障碍的方法学流程。...

利用超声技术在大鼠中早期检测药物诱导的肾血流动力学功能障碍

小鼠被广泛用于妊娠生物学的研究。然而，此类研究需要终止妊娠，从而无法进行纵向观察，并且需要使用大量动物。因此，我们描述了一种无创的高频超声成像技术，用于在妊娠小鼠中早期检测和监测着床后的事件。...

一种利用三维高频超声成像对小鼠早期妊娠进行表征的新方法

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本方案描述了一种低成本显微注射系统的构建方法，将其立体定位植入大鼠深部脑结构的操作步骤，以及在清醒且自由活动的大鼠中进行定时四乙基氯化铵微注射的流程。该研究的目的是通过抑制下丘脑结构的神经活动，揭示其在排卵调控中的参与作用。...

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用于疼痛研究的早产大鼠模型

排卵前期卵巢血流的变化对排卵至关重要。多普勒超声已用于人类和大型动物评估卵巢血流动力学和灌注情况。本文介绍了一种在小鼠排卵前期和围排卵期应用多普勒超声评估卵巢血流动力学的实验方案。...

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