一个简单的神经元机械损伤方法学研究果蝇运动神经元变性

在这里，我们描述了一种简单且广泛可及的方法来伤害果蝇幼虫的节段性神经，可视化和量化三龄幼虫神经肌肉接头（NMJ）运动神经元的神经变性。

该程序的总体目标是诱导果蝇幼虫运动神经元的机械损伤。这种方法可以帮助回答神经退行性研究领域的关键问题，例如导致神经退行性变的细胞事件的时间顺序。这种技术的主要优点是价格低廉，并且使用大多数果蝇实验室已经拥有的设备。

这项技术的影响延伸到理解驱动神经退行性的分子机制。要开始该方案，请从含有已在 25 摄氏度下培养的游荡第三龄幼虫的小瓶或瓶中选择 10 只二龄或三龄幼虫。使用镊子用镊子或画笔小心地拾取单个幼虫，不要压缩它们。

直接将 10 只幼虫放入含有冷 1x PBS 的玻璃皿中，以去除任何食物残渣并减慢幼虫的运动。通过前枝气孔识别第三龄幼虫，通过较小的尺寸和棒状的前气孔识别第二龄幼虫。将每个幼虫放在 CO2 麻醉装置上。

在解剖显微镜下，小心地将每个幼虫滚动到其背侧，以观察整个角质层的节段神经。必须小心地将每只幼虫滚动到它们的背侧，以便在受伤前通过角质层看到节段性神经。从口钩开始，位置 5 将镊子沿着幼虫长度向下移动大约二分之一到三分之二。

定位后，捏住大约三分之一的腹侧角质层，其中包含前 5 大小的节段神经。为确保幼虫节段神经受伤，施加足够的力压碎节段神经，但保持角质层完好无损。为了确定正确的力度，压碎 10 只幼虫并确保 5 小时后的死亡率低于 50%受伤后，小心地将幼虫转移到含有约 0.5 克酵母酱的果汁琼脂盘中。

放置每个幼虫，使其前端位于酵母糊上，以便继续喂养。将含有酵母糊和 10 只受伤幼虫的琼脂平板放在空的 100 x 15 毫米培养皿的底部。用湿纸巾盖住培养皿，确保纸巾不接触幼虫或琼脂板。

然后将培养皿放入室温下的密封容器中。最后，在受伤后指定时间后取回幼虫进行解剖。在损伤之前，野生型神经肌肉接头 （NMJ） 显示突触前活性区标志物 Brp 与整个 NMJ 中的突触后标志物 Dlg 并列。

节段神经的机械损伤可诱导中度至重度神经变性，其中用 Dlg 染色的巴顿现在缺乏突触前活性区蛋白 Brp。开发后，这项技术为研究神经元损伤的研究人员探索导致果蝇神经肌肉接头神经退化的细胞事件的时间序列铺平了道路。