Name: 在体内小鼠激光诱导脉络膜新生血管模型的多模态成像与分析 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: 了解激光诱导小鼠脉络膜新生血管模型的多模态成像技术，使用SD-OCT和荧光血管造影进行纵向活体成像。该方法可精确追踪CNV进展与消退，评估视网膜厚度变化，为研究眼部新生血管疾病机制和开发新疗法提供可靠的实验手段。

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作者谨此感谢 Yuliya Naumchuk（芝加哥洛约拉大学）和 Agne Žiniauskaitė（Experimentica 公司）在技术及视频拍摄方面提供的出色支持。Kaja 博士的研究项目得到了芝加哥洛约拉大学眼科 John P. 和 Therese E. Mulcahy 捐赠讲席教授基金的资助。

所有动物均按照《眼科与视觉研究中动物使用 ARVO 声明》以及关于动物实验的欧盟指令 86/609/EEC 的规定进行处理，相关实验方案经芬兰动物实验委员会批准并实施监督。
1. 激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型 5
<ol>
	<li>宏观检查动物眼睛是否存在任何异常。</li>
	<li>称量小鼠体重。</li>
	<li>根据动物体重计算并配制适量的麻醉剂，例如：右美托咪定（1 mg/kg）、氯胺酮（75 mg/kg）和蒸馏水（0.9% NaCl溶液）按1:1.5:2.5的比例混合，或氯胺酮（40–75 mg/kg）、赛拉嗪（5 mg/kg）和蒸馏水（0.9% NaCl溶液）按1:2.5:1的比例混合；对于20 g的小鼠，注射0.1 mL混合液。</li>
	<li>通过腹腔注射麻醉剂。</li>
	<li>将小鼠放回笼中，等待其进入麻醉状态。通过足底反射消失确认小鼠已充分麻醉。</li>
	<li>确保使用激光安全个人防护装备。</li>
	<li>打开裂隙灯和532 nm半导体激光器。</li>
	<li>将小鼠从笼中取出，放置于加热垫上。</li>
	<li>滴加一滴托吡卡胺以扩大瞳孔。等待3–5分钟，直至瞳孔完全散大（约3 mm）。</li>
	<li>将小鼠置于裂隙灯载物台上。</li>
	<li>在盖玻片上滴加一滴眼科用液体凝胶，用于压平角膜。</li>
	<li>调整小鼠眼球位置，使视神经乳头位于中心。</li>
	<li>将激光功率设为100 mW，持续时间设为100 ms，光斑大小设为50 µm。</li>
	<li>将激光束聚焦于视网膜色素上皮（RPE）。</li>
	<li>在避开视网膜血管的前提下，于视神经周围的4点、8点和12点位置分别对单眼进行三次激光照射。完成所有激光照射后检查眼底，确认无视网膜出血。对侧眼作为未激光照射的对照。</li>
	<li>丢弃盖玻片，并将小鼠重新放回加热垫上。</li>
	<li>在双眼各滴加一滴PEG凝胶滴眼液。</li>
</ol>
2. SD-OCT 6,7
<ol>
	<li>将小鼠放入啮齿类动物定位装置中，并固定头部。</li>
	<li>校准 SD-OCT 系统的镜头例如，Bioptigen/Leica Envisu R2200）对准眼睛以 体内 使用X轴和Y轴载物台控制器进行成像。</li>
	<li>进行谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）以确认布鲁赫膜破裂：当SD-OCT完成对整个眼球的扫描后，手动将参考线移至激光照射部位。在激光照射区域，布鲁赫膜的破裂应清晰可见（参见 图1).</li>
</ol>
3. 荧光素眼底血管造影 7,8,9
<ol>
	<li>将小鼠连同固定器一并取出，放置于FA系统上（例如，海德堡Spectralis HRA2）。</li>
	<li>在眼底的激光灼伤区域聚焦，使用红外反射模式，并将视神经乳头置于视野窗口中央。</li>
	<li>为一只20 g的小鼠皮下或腹腔注射0.1 mL的5%荧光素钠盐溶液。</li>
	<li>聚焦于脉络膜层面。</li>
	<li>从脉络膜焦点层面拍摄图像。</li>
	<li>重新对焦至视网膜层面并拍摄图像。</li>
	<li>等待30秒，然后重复步骤3.4-3.6。</li>
	<li>将小鼠从固定器中取出，放置于加热垫上。</li>
	<li>通过给予α2-拮抗剂阿替美唑（0.5 mg/kg，腹腔注射）逆转右美托咪定的麻醉作用，或等待动物自行从麻醉中恢复。</li>
	<li>重复 在 在随访第5、10和14天对麻醉动物进行活体SD-OCT和FA成像。</li>
</ol>
4. CNV 分级
<ol>
	<li>根据激光处理后第0天立即拍摄的OCT图像和脉络膜荧光素血管造影（FA）图像，对Bruch膜的损伤程度进行分级，标准如下： 
	0 - Bruch膜未受损 
	1 - Bruch膜成功损伤</li>
	<li>根据视网膜荧光素血管造影（FA）系列图像中荧光信号动态变化所观察到的激光斑点渗漏情况，对脉络膜新生血管（CNV）的存在进行分级，标准如下： 
	0 - 视网膜外观正常 
	0.5 - 渗漏呈轻微染色 
	1.0 - 存在渗漏性CNV区域 
	注：可使用OCT成像进一步确认CNV的存在，或在FA结果不明确时进行辅助判断；若OCT图像中出现视网膜内液，则提示应进行CNV分级。</li>
</ol>
5. 视网膜厚度测量
<ol>
	<li>使用自动分割软件进行视网膜厚度测量。应考虑总视网膜厚度，即从神经纤维层到RPE的各层厚度（健康测量位点），或到围绕损伤部位（激光处理位点）RPE所连成的假想线的厚度（另见图7）。</li>
</ol>

<ol><li>Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+experimental+choroidal+neovascularization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Ophthalmol.+Chic.+Ill+1960%22%5BJournal%5D)">A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat.</a> Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).</li>
<li>Tobe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+neovascularization+in+mice+with+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).</li>
<li>Seo, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+inhibition+of+retinal+and+choroidal+neovascularization+by+oral+administration+of+a+kinase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor.</a> Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).</li>
<li>Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+choroidal+and+retinal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models of choroidal and retinal neovascularization.</a> Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).</li>
<li>Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+for+Laser-induced+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization.</a> J Vis Exp. (106), e53502(2015).</li>
<li>Giani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+using+spectral-domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).</li>
<li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+an+Image-Guided+Laser-Induced+Choroidal+Neovascularization+Model+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice.</a> PloS One. 10, e0132643(2015).</li>
<li>Sheets, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotectin+D1+attenuates+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse.</a> Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).</li>
<li>Hoerster, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vivo+and+ex-vivo+characterization+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+variability+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol.+Albrecht+Von+Graefes+Arch.+Klin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).</li>
<li>Sulaiman, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Optical+Coherence+Tomography+Quantification+Method+for+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ocul.+Pharmacol.+Ther.+Off.+J.+Assoc.+Ocul.+Pharmacol.+Ther.+Off.+J.+Assoc.+Ocul.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization.</a> J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).</li>
</ol>

作者 Symantas Ragauskas 博士是 Experimentica 公司的雇员（研究科学家）和股东，该公司提供使用本文所述的临床前 CNV 模型的合同研究服务。
作者 Eva Kielczewski 是生产本文所用 SD-OCT 系统的徕卡显微系统公司（Leica Microsystems）的雇员（研究应用工程师，OCT）。
作者 Joseph Vance 是生产本文章所用 SD-OCT 系统的徕卡显微系统公司（Leica Microsystems）的员工（北美 OCT 销售总监）。Joseph Vance 同时也是 Spective, LLC 的总裁兼执行董事。
作者 Simon Kaja 博士是 Experimentica 公司的顾问首席科学官及股东。Experimentica 是一家临床前合同研究组织，提供合同研究服务，包括本文所使用的临床前 CNV 模型。Simon Kaja 博士同时也是 K&amp;#38;P Scientific, LLC 的首席执行官，这是一家生命科学咨询公司；此外，他担任芝加哥洛约拉大学斯特里奇医学院眼科约翰·P·穆尔卡希博士与特蕾丝·E·穆尔卡希捐赠讲席教授。该安排的相关条款已根据芝加哥洛约拉大学的利益冲突政策进行审查并获得批准。
作者 Giedrius Kalesnykas 博士是 Experimentica Ltd. 的雇员（首席执行官）和股东，该公司提供使用本文所述的临床前 CNV 模型的合同研究服务。

多模态成像为脉络膜新生血管（CNV）病理学评估提供了有价值的工具。本文介绍了一种包括荧光素血管造影（FA）、谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）和自动分割技术的成像方案，可用于快速、可重复且可靠的CNV病理学评估。激光处理后，可确认布鲁赫膜出现断裂。此外，该阶段使用SD-OCT还可立即可视化可能存在的视网膜内和视网膜下出血，这些因素可能干扰结果的判读。视网膜渗漏程度根据FA图像中的荧光素信号进行分级。SD-OCT的应用提供了对CNV病理更详细的描述。此外，在随访期间不同时间点进行的纵向SD-OCT分析揭示了仅依靠FA难以发现的病理变化的时间差异。
使用自动分割法测量总视网膜厚度。在脉络膜新生血管（CNV）诱导部位的视网膜厚度通过人工方式进行测量。通过组织学方法评估脉络膜平铺标本，并使用图像分析软件Image J测量新生血管化区域的面积。
视觉轴的适当透明度对于本方案的成功实施至关重要。角膜干燥和白内障形成是主要的干扰因素。因此，小鼠麻醉后，应持续使用人工泪液或凝胶对眼睛进行保湿，以维持角膜的正常水合状态。建议在麻醉诱导后10分...

近三十年前，首次成功尝试利用氪激光在Long-Evans大鼠中模拟人类脉络膜新生血管（CNV）的病理特征1。此后，氪激光被用于破坏最常用的小鼠品系C57BL/6J的Bruch膜2,3,4。CNV诱导的成功率通过荧光素血管造影（FA）和组织学染色得以验证。光学相干断层扫描（OCT）等无创成像技术的快速发展推动了啮齿类动物临床前模型领域的进步。能够在同一只眼睛的多个时间点监测视网膜形态学变化，显著减少了实验动物的使用数量，并提高了实验研究的效率。CNV病灶的组织学评估相对直接，需要对激光照射部位周围的异常血管生长进行标记，获取图像，并使用图像分析软件进行面积/体积估算。相比之下，体内成像技术则引入了对CNV病理及其解释更为复杂的分析方法。
本文介绍了一种简单且相对快速的方法，利用荧光素血管造影（FA）、谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）以及自动化分割方法，在小鼠激光诱导的脉络膜新生血管（CNV）模型中对CNV的诱导、进展和消退进行分级评估。

<table><tbody><tr><td>美托咪定（商品名 Domitor）</td><td>Orion</td><td>Vnr 01 56 02</td><td>麻醉剂</td></tr><tr><td>氯胺酮</td><td>Intervet</td><td>Vnr 51 14 85</td><td>麻醉剂</td></tr><tr><td>0,9% NaCl</td><td>B Braun</td><td>357 0340</td><td>麻醉剂</td></tr><tr><td>赛拉嗪（商品名 Rompun vet）</td><td>Bayer</td><td>vnr 14 89 99</td><td>麻醉剂</td></tr><tr><td>托吡卡胺</td><td>Santen</td><td>Vnr 04 12 36</td><td>散瞳剂</td></tr><tr><td>Viscotears</td><td>Alcon</td><td>Vnr 44 54 81</td><td>润滑剂</td></tr><tr><td>Systane</td><td>Alcon</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>润滑剂</td></tr><tr><td>5% 荧光素钠盐</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F6377-100G</td><td>荧光剂</td></tr><tr><td>阿替美唑（商品名 Antisedan）</td><td>Orion</td><td>Vnr 47 19 53</td><td>麻醉剂</td></tr></tbody></table>

体内 多模态成像与小鼠激光诱导脉络膜新生血管模型分析

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

激光诱导的脉络膜新生血管形成（CNV）是模拟年龄相关性黄斑变性（AMD）湿性形式的一种成熟模型。本方案不仅旨在指导读者了解如何通过激光诱导产生病灶以触发新生血管过程的技术要点，更着重于阐述通过多模态纵向分析所能获取的丰富信息 体内 随访期间的全程成像。
激光诱导的小鼠CNV模型通过半导体激光照射建立。多模态 体内 采用影像学技术监测脉络膜新生血管（CNV）的诱导、进展与消退。首先，在激光照射后立即进行谱域光学相干断层扫描（SD-OCT），以确认布鲁赫膜（Bruch's membrane）的破裂。随后 体内 使用荧光素眼底血管造影（FA）成像，通过脉络膜层面获取的一系列图像确认了Bruch膜损伤成功。在激光处理后的第5、10和14天，采用SD-OCT和FA对脉络膜新生血管（CNV）的增殖与消退进行纵向随访观察。基于FA图像对渗漏性CNV病灶进行简单且可靠的分级评估是&#160;呈现。通过自动分割测量视网膜总厚度，结合在CNV部位手动应用标定测量视网膜厚度，可无偏倚地评估水肿的存在。最后，通过在脉络膜铺片上使用凝集素GS-IB4染色对CNV进行组织学验证。对染色图像进行阈值处理，并使用ImageJ计算凝集素阳性区域面积。
该方案在需要对CNV病理进行高通量式筛选的治疗学研究中尤为有用，因为它能够快速、多模态且可靠地对CNV病理及视网膜水肿进行分类。此外，高分辨率SD-OCT能够记录其他病理特征，例如视网膜下或视网膜内液体的积聚。然而，该方法无法实现从SD-OCT图像中自动分析CNV体积，后者必须通过人工完成。

激光治疗后立即出现的气泡或视网膜下出血并不总是可见的。因此，谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）对于确认布鲁赫膜的损伤尤为重要。 图1 展示了激光给药后不同时间点的OCT成像示例。
<img alt="14天内的视网膜成像；示意图显示病灶进展；眼科研究结果。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图1"> 
图1：眼底OCT en face视图（VIP图像）显示三个由白色、绿色和红色圆圈标出的激光区域。 OCT B-scan图像分别在激光前（基线）、激光后即刻（0天，箭头指向Bruch膜破裂部位）以及激光后5天、10天和14天...

此处，我们展示了纵向研究的实用性 体内 小鼠激光诱导脉络膜新生血管形态学改变随访中的成像

激光诱导的脉络膜新生血管（CNV）是一种成熟的模型，用于模拟年龄相关性黄斑变性（AMD）的湿性类型。在此模型中……

新生血管过程是多种常见眼病的特征性表现，其中最突出的包括渗出性年龄相关性黄斑变性（简称湿性AMD）、增殖性糖尿病视网膜病变以及早产儿视网膜病变。这些疾病共同构成了全球大多数法定盲症病例，并可伴随其他眼部并发症，如玻璃体出血和新生血管性青光眼。然而，尽管眼部新生血管性疾病十分常见，但目前可用的治疗手段却十分有限。针对年龄相关性黄斑变性（AMD）和增殖性糖尿病视网膜病变相关的新生血管，当前的标准治疗方案是玻璃体内注射靶向血管生成和新生血管形成关键介质——血管内皮生长因子（VEGF）的人源化抗体。然而，尽管该疗法在抑制疾病进展和改善视功能方面具有显著疗效，但玻璃体内注射费用高昂，且并非没有风险。并发症可能包括感染、眼内炎、视网膜脱离和眼出血。因此，迫切需要开发出高效、安全且成本较低的新型治疗方案。为了推动血管新生性疾病药物的研发，小型动物模型具有至关重要的意义。此类模型需要具有可重复性，具备已建立并经过验证的检测指标和终点，并且理想情况下应使用具有临床相关性的参照化合物作为阳性对照。在本方案中，我们将介绍小鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）模型，该模型是研究导致CNV的病理生理机制以及开发新型抗新生血管药物最常用的模型之一。在CNV模型中，使用氩激光破坏Bruch膜。从而启动源自脉络膜的新生血管过程。采用谱域光学相干断层扫描（spectral-domain optical coherence tomography，简称SD-OCT）和荧光素血管造影进行纵向活体成像，可用来追踪脉络膜新生血管（CNV）的增殖与消退过程，进而评估新型药物干预措施的有效性及作用时程。图像处理技术的最新进展还实现了视网膜厚度测量的自动分割，从而提供了一种无观察者偏倚的方法来评估水肿的存在。本文将探讨徕卡显微系统公司新推出的InVivoVue Diver软件在小鼠脉络膜新生血管（CNV）模型中对视网膜各层进行自动分割的应用价值。最后，我们将讨论在此模型中，视网膜整体切片的组织学分析如何与纵向活体成像相互补充。每只眼睛滴入一滴托吡卡胺以进行瞳孔扩张。随后，将动物轻柔地放入啮齿类动物定位装置中。调整小鼠位置以暴露眼睛，并使用鼻托及一条轻覆于背部的实验室胶带将其固定。接下来，在眼球表面滴加一滴润滑剂以保持湿润，并使用滤纸条小心吸除多余液体。最后，将动物置于光学相干断层扫描（OCT）设备前方，调整位置以进行基线OCT成像。在激光照射前，需先进行活体谱域光学相干断层扫描（in vivo spectral-domain optical coherence tomography）成像，以确认视网膜无任何异常。轻轻将小鼠从固定装置中取出。在盖玻片上滴加一滴Viscotears凝胶以压平角膜。调整小鼠位置，使视神经乳头位于中心，将激光束聚焦于视网膜色素上皮层。在视神经周围的4点、8点和12点位置，避开视网膜血管，各进行一次激光照射，共三次。完成所有激光照射后，检查眼球的坚固性，并确认无任何视网膜出血。同前，将小鼠固定于载物架上，进行荧光素血管造影和光学相干断层扫描（OCT）成像，以确认Bruch膜受损。进行荧光素血管造影时，首先使用红外反射模式对准激光烧伤区域，该模式可显示激光照射的部位。在不改变小鼠眼部位置的情况下，仔细注射0.1毫升5%荧光素钠盐，剂量约为每20克小鼠体重。从脉络膜层面和视网膜层面开始，每隔约30秒拍摄一次荧光素血管造影图像。按照之前的方法对准眼睛以进行OCT成像，并开始成像。对SD-OCT信号进行平均有助于更清晰地显示视网膜的详细形态，如本序列所示。完成SD-OCT成像后，小心地将小鼠从固定装置中取出。为双眼涂抹润滑剂。此时，可选择通过皮下注射α-2受体拮抗剂（如用于右美托咪定的阿替美唑）来逆转麻醉，或等待动物自行从麻醉中恢复。在术后第5、10和14天，对麻醉状态下的动物重复进行活体SD-OCT和FA成像。使用 InVivoVue Diver 软件的自动分割功能进行视网膜厚度测量。对于健康视网膜，总视网膜厚度定义为从神经纤维层到视网膜色素上皮层（RPE）的所有层次的厚度。在健康视网膜中，自动分割能够准确识别各个视网膜层次，如此例所示。值得注意的是，在存在脉络膜新生血管（CNV）的区域，应对每个CNV病灶部位分别进行视网膜厚度的手动测量，测量范围从神经纤维层至穿过视网膜色素上皮（RPE）层的一条假想线。此序列展示了在CNV病灶部位进行手动厚度测量的工作流程。神经纤维层位于图像顶部，脉络膜位于底部。通过鼠标或触摸板手动确定神经纤维层和脉络膜的边界，软件将根据这些坐标自动计算出视网膜总厚度。该图显示了在脉络膜水平每隔20秒采集的一系列图像。图1以红外反射模式采集，其余图像则在腹腔注射荧光素后采集。图1中的白色箭头指示激光照射位点，这些位点在后续时间点出现荧光素渗漏，如图18中白色箭头所示。该图像显示了在视网膜层面获取的荧光素眼底血管造影（FA）序列成像。图18中的白色箭头指向一个激光处理位点，该位点的荧光素渗漏出现速度较图18中另外两个以圆圈标出的位点更快。该汇总图展示了谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）图像的时间进程。在基线期、激光造模后即刻以及第5天、第10天和第14天的随访时间点进行观察。综上所述，采用SD-OCT和FA成像对CNV病灶进行纵向活体成像的实验方案，可实现对CNV病理特征及视网膜水肿存在的快速、多模态且可靠的分类。感谢您的关注。

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在体内小鼠激光诱导脉络膜新生血管模型的多模态成像与分析

本文介绍了一种优化的多模态成像流程，用于在啮齿类动物脑内对细胞移植物进行多模态成像，包括：（i）活体生物发光成像与磁共振成像，以及（ii）死后组织学分析。在单个动物上联合使用这些成像方式，可实现对细胞移植物的高分辨率、高灵敏度和高特异性的评估。...

小鼠中枢神经系统干细胞移植的多模态成像

来源： Bosco, A., et al. 神经退行性疾病中视网膜小胶质细胞活化的体内动态：小鼠青光眼中的共聚焦眼底成像与细胞形态测量. J. Vis. Exp. (2015)...

在青光眼小鼠模型中对视网膜小胶质细胞的活体成像

本文介绍了小鼠激光诱导脉络膜新生血管（CNV）实验方案，该模型可重现新生血管性年龄相关性黄斑变性（AMD）的血管特征。掌握该技术后，可稳定有效地诱导CNV，作为测试多种实验干预措施的模型系统。...

一种用于激光诱导脉络膜新生血管形成的动物模型

本方案描述了如何利用眼科成像平台系统，在小鼠等小型啮齿类动物中应用谱域光学相干断层扫描和扫描激光检眼镜等高分辨率成像技术，分别获取视网膜厚度和小胶质细胞分布的信息。...

体内成像携带 Cx3cr1gfp/gfp 报告基因小鼠的谱域光学相干断层扫描与扫描激光检眼镜技术

本文展示了一种用于活体小鼠眼表成像的多光子显微成像平台。利用荧光转基因小鼠，可实现对眼表内的细胞核、细胞膜、神经纤维及毛细血管的可视化观察。来源于胶原结构的非线性二次谐波生成信号，可实现对基质结构的无标记成像。...

一种用于小鼠角膜和结膜活体成像的定制多光子显微镜平台

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经瞳孔双光子活体小鼠视网膜成像

本文介绍了一种使用玫瑰红（rose...

视网膜静脉阻塞小鼠模型的优化以减少变异性的研究

光学相干断层扫描在小鼠视网膜病变模型中的应用

本文介绍了视网膜静脉阻塞（RVO）研究中荧光素眼底血管造影（FA）和光学相干断层扫描（OCT）图像的三种数据分析方案。...

体内 小鼠视网膜血管损伤检测指标以促进可重复性

本方案描述了利用光学相干断层扫描技术在小鼠脉络膜中植入并评估黑色素瘤的方法。...

小鼠脉络膜黑色素瘤的植入与评估 通过 光学相干断层扫描

了解激光诱导小鼠脉络膜新生血管模型的多模态成像技术，使用SD-OCT和荧光血管造影进行纵向活体成像。该方法可精确追踪CNV进展与消退，评估视网膜厚度变化，为研究眼部新生血管疾病机制和开发新疗法提供可靠的实验手段。

体内多模态成像与小鼠激光诱导脉络膜新生血管模型分析

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