Quantification of the Abundance and Charging Levels of Transfer RNAs in <em>Escherichia coli</em>

Thomas S&#248;ndergaard Stenum; Michael A. S&#248;rensen; Sine Lo Svenningsen

doi:10.3791/56212

JoVE Journal
Biochemistry

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JoVE Journal Biochemistry

Quantification of the Abundance and Charging Levels of Transfer RNAs in Escherichia coli

丰度和收费水平的转移 Rna 在大肠杆菌中的量化

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10:34 min

August 22, 2017

DOI: 10.3791/56212-v

Thomas Søndergaard Stenum¹, Michael A. Sørensen¹, Sine Lo Svenningsen¹

¹Department of Biology,University of Copenhagen

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在这里，我们提出一种直接测量转移 RNA 从纯化的大肠杆菌RNA 以及方式比较的转运 RNA 相对水平或任何其他短的 RNA，跨越不同的样本基础，增设的穗状花序在收费水平方法单元格引用基因的表达。

本实验的总体目标是量化大肠杆菌中转移 RNA 的丰度和电荷水平。这种方法可以帮助回答细胞生物学中的关键问题，例如 tRNA 充电水平在不同生长状态下如何变化。这种方法的主要优点是，即使在显着改变细胞中 RNA 组成的生长状态之间，也可以定量比较 RNA 水平。

通过根据文本方案培养实验和加标大肠杆菌培养物来开始此实验。在 37 摄氏度下培养加标培养物，同时以 160 RPM 振荡。当加标培养物达到约 0.1 的 OD436 时，通过添加 IPTG 诱导 tRNA 细胞 C 的表达。

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