Visualization and Live Imaging of Oligodendrocyte Organelles in Organotypic Brain Slices Using Adeno-associated Virus and Confocal Microscopy

Lauritz Hagen Kennedy; Johanne Egge Rinholm

doi:10.3791/56237

JoVE Journal
Neuroscience

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JoVE Journal Neuroscience

Visualization and Live Imaging of Oligodendrocyte Organelles in Organotypic Brain Slices Using Adeno-associated Virus and Confocal Microscopy

腺相关病毒和共聚焦显微镜对器官脑切片胶质细胞器的可视化和实时成像

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08:38 min

October 23, 2017

DOI: 10.3791/56237-v

Lauritz Hagen Kennedy¹, Johanne Egge Rinholm^1,2

¹Division of Anatomy, Institute of Basic Medical Sciences,University of Oslo, ²Department of Microbiology,Oslo University Hospital

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

形成突促进了快速动作电位的传播和神经元的存活。这里描述的是一个协议的胶质特异表达荧光蛋白在器官脑切片与后续的延时成像。此外, 一个简单的程序, 可视化不髓鞘提出。

这种病毒转导和延时记录的总体目标是可视化器官型脑切片中少突胶质细胞线粒体的运动。这种方法可以帮助回答少突胶质细胞领域的关键问题。例如少突胶质细胞及其细胞器如何响应局部环境的变化。该技术的主要优点是，它提供了有关少突胶质细胞结构和细胞器动力学的详细信息，其中存在所有不同的脑细胞并且少突胶质细胞产生致密的髓鞘。在体外第 7 天在切片培养物中转导少突胶质细胞。首先，每片提取 1.3 微升稀释的 AAV。确保移液器吸头的外部干燥，尽可能靠近移液器皮质上方，不要用移液器吸头接触切片，然后慢慢将溶液从移液器中推出。当溶液接触切片时，将移液器尖端移动到皮层上，将溶液涂抹在整个皮层区域。转导一个培养皿中的所有切片后，将培养皿放回培养箱，然后在其他培养皿上重复该过程。检查切片中荧光标志物的表达，并在荧光标志物的表达水平足够且切片看起来健康时对切片进行成像。通过使用造型粘土连接弯曲为 45 的注射器针头来开始设置成像槽

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