Name: 小鼠颞叶癫痫的 Radiotelemetry 模型及脑电图监测 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: 学习使用匹罗卡品诱导小鼠癫痫持续状态并通过无线遥测系统监测自发性复发性癫痫发作的方法。该技术为研究癫痫发病机制和慢性癫痫病理生理学提供了高存活率的活体动物模型。

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本工作由韩国国家研究基金会（NRF）资助，该基金会由韩国政府资助（NRF-2014R1A1A3049456），并获得韩国健康技术研究与发展基金的资助&amp;通过韩国保健产业振兴院（KHIDI）由韩国保健福祉部资助的D项目 &amp; 韩国福祉部（HI15C2854）

所有实验程序均经韩国天主教大学伦理委员会批准，并依照美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》（NIH出版物第80-23号）进行。
1. SE 诱导
<ol>
	<li>购买8周龄的雄性C57BL/6NHsd小鼠，并称量每只小鼠的体重。然后使用记号笔标记所有小鼠的尾巴，以便在诱发癫痫持续状态（SE）期间进行快速识别。</li>
	<li>根据小鼠体重计算溴甲基东莨菪碱（scopolamine；2 mg/kg）、硫酸特布他林（terbutaline；2 mg/kg）和盐酸匹罗卡品（pilocarpine；280 mg/kg）的用量，并加入生理盐水（0.9% NaCl，10 mL/kg）配制成溶液。 
	注意：例如，若小鼠体重为25 g，则各试剂用量如下：东莨菪碱和特布他林：2 mg/kg × (25 g/1,000 g) = 0.05 mg；生理盐水：10 mL/kg × (25 g/1,000 g) = 0.25 mL；匹罗卡品：280 mg/kg × (25 g/1,000 g) = 7 mg；生理盐水：10 mL/kg × (25 g/1,000 g) = 0.25 mL。</li>
	<li>将东莨菪碱与特布他林的混合液装入带有30 G针头的1 mL注射器中，对每只小鼠进行腹腔注射，随后将小鼠放回笼中。在给予东莨菪碱和特布他林30分钟后，向每只小鼠腹腔注射匹罗卡品溶液（i.p.；1 mL注射器；30 G针头）。匹罗卡品注射后，立即将小鼠放入孵育箱（28–30°C）中进行观察。</li>
	<li>密切监测小鼠行为，直至癫痫持续状态（SE）被诱发。若观察到符合Racine分级3级或以上水平的边缘系统运动性癫痫发作，记录发作时间，并继续监测以判断发作是否更加频繁。一旦出现持续超过2分钟的运动性癫痫发作，即将小鼠转移至室温下的新笼中，并持续监测3小时，以确认其惊厥性发作是否持续以及SE是否成功诱发。对于在匹罗卡品注射约2小时后仍未进入SE的小鼠，实施安乐死。 
	注意：Racine分级标准：1级，口面部运动；2级，点头；3级，前肢阵挛；4级，直立伴前肢阵挛；5级，直立跌倒伴前肢阵挛16。若在SE诱发后未立即将小鼠转移至室温笼中，小鼠可能因高热而死亡。</li>
	<li>在SE发作3小时后，通过腹腔注射地西泮溶液（i.p.；10 mg/kg；1 mL注射器；30 G针头）终止行为学急性癫痫发作。地西泮溶液的配制方法为：将5 mg/mL的地西泮用10%聚氧乙烯35氢化蓖麻油稀释，并加入生理盐水（i.p.；10 mL/kg；1 mL注射器；30 G针头）配制而成。&#160; 
	注意：10%聚氧乙烯35氢化蓖麻油溶液的配制：1 mL聚氧乙烯35氢化蓖麻油溶液 + 9 mL生理盐水。该溶液于室温保存。例如，若小鼠体重为25 g，则注射250 µL地西泮溶液：50 µL 5 mg/mL地西泮 + 200 µL 10%聚氧乙烯35氢化蓖麻油溶液 = 250 µL 1 mg/mL地西泮。</li>
	<li>对于假手术组（sham）小鼠，进行腹腔注射东莨菪碱溴甲基化物与硫酸特布他林的混合液（i.p.；两者均为2 mg/kg，10 mL/kg；1 mL注射器；30 G针头）。30分钟后，进行生理盐水腹腔注射（i.p.；10 mL/kg；1 mL注射器；30 G针头）。 
	注意：若小鼠体重为25 g，则用250 µL生理盐水代替匹罗卡品进行注射。</li>
	<li>在腹腔注射地西泮后（i.p.；1 mL注射器；30 G针头），为每只小鼠腹腔注射1 mL 5%葡萄糖溶液（i.p.；1 mL注射器；26 G针头）。 
	注意：1 mL 5%葡萄糖注射液可提供能量来源和水分补充，有助于提高存活率。</li>
	<li>在孵育箱（28–30 °C）中进行术后护理期间，及时清除唾液、泪液和粪便等过多分泌物。</li>
	<li>在SE诱发后的第1天，称量小鼠体重，并将其继续留在孵育箱（28–30 °C）中额外饲养一天。在SE诱发后的第2天再次称重，并将小鼠放回原笼。提供湿润饲料以促进其恢复。 
	注意：本实验中，C57BL/6NHsd小鼠在SE终止后的平均死亡率为8.57%（共检测35只小鼠，死亡3只）。</li>
	<li>持续每日测量小鼠体重直至匹罗卡品注射后第7天，若发现体重未增加，则给予5%葡萄糖腹腔注射（i.p.；1 mL注射器；26 G针头）。当小鼠在匹罗卡品注射后第2天开始恢复体重增长并能无障碍摄食湿润饲料时，停止体重监测。 
	注意：若某只小鼠在SE后7天内体重仍未增加，则将其排除实验并采用二氧化碳实施安乐死。根据小鼠品系背景不同，偶有死亡发生；但在C57BL/6NHsd小鼠中，此类实验的死亡率低于1%。若小鼠在SE诱发后存活超过7天，则在潜伏期内极少发生死亡。</li>
</ol>
2. 视频脑电图监测的植入手术
<ol>
	<li>准备12周龄的小鼠（在癫痫持续状态诱导后4周），进行遥测仪植入以实现脑电图（EEG）监测。 
	注意： 植入时间可根据实验目的和小鼠品系进行调整。</li>
	<li>术前使用氯胺酮（50 mg/mL）和赛拉嗪（23.3 mg/mL）的混合溶液（比例为4:0.5），以生理盐水稀释，按每克体重2.5 µL的剂量腹腔注射进行麻醉（1 mL注射器；26 G针头）。定期监测小鼠的呼吸频率和呼吸努力（最长间隔15分钟），并通过足底回缩反射评估麻醉深度。</li>
	<li>将小鼠固定于立体定位仪上，使用耳杆和咬合板固定头部，并在双眼涂抹兽用眼膏以防止角膜干燥导致失明。</li>
	<li>为维持手术过程中的无菌条件，使用刀片剃除手术区域的毛发。注意避免毛发污染手术区域。剃毛后，用70%乙醇和碘溶液对皮肤进行消毒。 
	注意： 手术应在无菌条件下进行，操作者需佩戴无菌手套和口罩，使用灭菌器械并遵循无菌技术。</li>
	<li>确认麻醉深度后，沿中线切开皮肤以暴露颅骨。使用立体定位仪附带的钻头，在前囟（Bregma）为参考坐标的前后轴（AP）：+0.1 mm，内外侧轴（ML）：+0.1 mm（参考电极位置），以及AP：−0.2 mm，ML：+0.22 mm（左侧顶叶皮层）处钻出两个小孔13。
	<ol>
		<li>用PBS浸湿的棉签擦拭皮肤，随后使用70%乙醇和碘溶液消毒。用剪刀在头部正中做纵向切口，暴露人字缝与矢状缝交汇点（Lambda）、冠状缝与矢状缝交汇点（Bregma）以及目标位置。</li>
		<li>识别Lambda和Bregma等解剖标志。将钻头置于Bregma处，并记录该点的X、Y坐标。</li>
		<li>参考脑图谱书籍或已发表文献，确定用于脑电记录的脑区合适坐标。然后，根据步骤2.5.2中测得的Bregma坐标，计算参考电极和记录电极螺钉的植入坐标。</li>
		<li>缓慢下放钻头钻孔，当颅骨变薄时需格外小心，避免钻入过深。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将单通道无线脑电发射器主体皮下植入颈背部后方，并将柔性导线引至颅骨附近。</li>
	<li>使用镊子将不锈钢螺钉（长度2 mm）插入每个钻孔中，并用螺丝刀顺时针旋转拧紧。调整螺钉旋转程度，确保其未过度深入，以避免损伤硬脑膜或脑组织。&#160;</li>
	<li>剥离导线末端2 mm的绝缘层，将导线拉长并缠绕在螺钉轴上，以确保导线与螺钉之间良好接触。将参考电极导线连接至前方螺钉，记录电极导线连接至顶叶皮层上方的螺钉。随后涂抹牙科水泥，固定整个装置，确保金属部分不外露。</li>
	<li>目视确认牙科水泥完全干燥后，缝合皮肤并局部涂抹莫匹罗星软膏。将小鼠单独置于30 °C培养箱中直至从手术中恢复（约30分钟），之后将其放回饲养笼，直至开始连续视频-脑电监测。 
	注意： 术后每只小鼠需腹腔注射（1 mL注射器；30 G针头）庆大霉素（抗生素）5 mg/kg和酮洛芬（镇痛药）5 mg/kg。应持续监测动物直至其完全恢复自主活动能力。植入发射器的小鼠通常需要约1周的恢复期。</li>
</ol>
3. 视频与脑电图监测及分析
<ol>
	<li>将一只小鼠放入单独的笼子中，并将笼子放置在无线接收板上方，接收板所在位置应装有法拉第笼，以避免来自计算机、交流电源线及相邻接收器等任何来源的电信号干扰。 
	注意：请参考设备制造商提供的使用手册。操作时需注意避免信号盲区。</li>
	<li>使用无线视频脑电图（EEG）遥测系统记录电活动。
	<ol>
		<li>打开视频-EEG记录软件。点击 &#34;Hardware&#34;，选择 &#34;Edit configuration&#34;。将每只小鼠体内植入的接收器与发射器进行匹配。点击 &#34;Channel configuration&#34;，确认所有通道均处于激活状态。点击 &#34;Video configuration&#34; 以同步视频与EEG数据（分辨率为40 × 480，帧率为30.00）。 
		注意：若需在夜间清晰捕捉小鼠细微行为变化的高质量图像，建议安装高灵敏度IP摄像头。</li>
		<li>点击 &#34;Setup&#34; 和 &#34;P3 setup&#34;，输入每只动物的个体信息、对应的摄像头及图表设置。</li>
		<li>点击 &#34;Acquisition&#34; 和 &#34;A/D sampling rate&#34; 设置采样率。点击 &#34;Data set name&#34; 为每次实验命名。 
		注意： EEG的采样率需高于500 Hz。由于视频和EEG数据量较大，建议每次会话处理不超过24小时的数据，而非将连续两周的记录保存为单个文件。为防止RAM内存不足，可每隔8小时或12小时分别保存数据。</li>
		<li>使用磁棒激活发射器，然后点击 &#34;Start acquisition&#34; 开始采集视频-EEG记录。通过视频-EEG系统对小鼠进行至少连续两周的持续监测。 
		注意： 对于C57BL/6小鼠，自发性癫痫发作（SRS）往往成簇出现，持续约5.2天，无发作期持续时间约为6.7天17。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用分析软件通过人工检查确定癫痫发作频率和持续时间。
	<ol>
		<li>标记显示SRS的区域，并导出数据用于统计分析。需谨慎排除由抓头或咀嚼动作引起的EEG伪迹；这些伪迹可通过查看视频数据予以剔除。 
		注意： SRS定义为突然出现的重复性癫痫样尖波活动（≥ 3 Hz），持续时间超过10秒。痉挛性行为常伴随尖波活动的爆发。非痉挛性发作也可能表现为脑电图上的尖波活动而无明显痉挛行为。癫痫终止定义为放电尖波恢复至基线水平。</li>
		<li>分析癫痫发作频率时，将每只动物在两周内检测到的SRS总次数除以总记录天数。</li>
		<li>分析癫痫发作持续时间时，测量从癫痫样尖波活动起始到结束的时间。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>完成视频-EEG记录后，通过心脏灌注4%多聚甲醛固定脑组织。&#160;为麻醉小鼠，按10 μL/g体重剂量腹腔注射氯胺酮（50 mg/mL）与赛拉嗪（23.3 mg/mL）的生理盐水溶液（比例为4:0.5）（使用1 mL注射器，26 G针头）。确认小鼠已深度麻醉后，进行心脏灌注。</li>
	<li>在分离小鼠脑组织前，从小鼠体内取出发射器，经清洁后可重复使用。
	<ol>
		<li>使用镊子去除导线周围的牙科水泥。</li>
		<li>将带有牙科水泥的导线末端浸入100%丙酮中，直至牙科水泥完全溶解。</li>
		<li>用蒸馏水冲洗发射器，去除其周围的组织污染物。</li>
		<li>用70%乙醇冲洗发射器3小时，晾干后储存。下次使用前，先用70%乙醇冲洗螺钉和发射器，再用蒸馏水冲洗，最后置于生理盐水中。 
		注意： 在处死小鼠时需小心避免剪断柔性导线，因为若柔性导线过短，可能导致下次植入及视频-EEG记录过程中噪声增加。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本研究描述了癫痫持续状态诱导及慢性癫痫发作评估的实验步骤。
多种因素可影响癫痫持续状态（SE）诱导的成功率。根据Racine评分标准进行准确的行为学监测，对于自发性癫痫发作（SRS）的形成至关重要。头部点动、前肢阵挛、直立和跌倒，是急性癫痫发作进展至SE阶段的行为学特征4,16。一旦检测到首次运动性癫痫发作，随后惊厥性发作之间的间隔时间会逐渐缩短，直至进入SE状态。此外，除非使用地西泮终止行为性癫痫发作，否则SE应至少持续6小时5。值得注意的是，即使地西泮注射后行为性癫痫发作看似缓解，仍有可能通过皮层脑电图检测到持续的癫痫样电活动，研究人员应意识到这一可能性。在匹罗卡品注射后至SE诱导期间提高环境温度，可显著增加成功诱导SE的动物数量。此外，提供强化的发作后护理也至关重要，包括充分补水、营养支持和体重监测，以实现平均70-80%以上的存活率5,<su...

颞叶癫痫（TLE）是最常见的获得性癫痫之一1。癫痫患者由于大脑中神经元活动异常而反复出现癫痫发作2,3。鉴于TLE常难以治疗，了解癫痫发生发展的基本机制至关重要。
能够重现人类颞叶癫痫（TLE）关键特征的动物模型有助于更深入理解TLE的病理生理机制，使我们能够便捷地监测和调控癫痫发生过程中的关键因素。其中，化学致痫剂诱导的癫痫持续状态（SE）已被广泛应用4,5与其他癫痫模型（如电刺激模型）不同，后者无海马硬化且自发性癫痫发作（SRS）显著6,7,8全身注射化学致痫剂可模拟人类颞叶癫痫的临床发病过程， 即，初始脑损伤、潜伏期和表现为SRS的慢性癫痫阶段5,9,10因此，该技术可用于多种研究，以阐明急性脑损伤、癫痫发生或癫痫发作抑制的机制。此外，化学致痫剂诱导的组织病理学改变与人类颞叶癫痫（TLE）中观察到的改变相似，这进一步支持了使用TLE啮齿类动物模型的合理性。10,11,12值得注意的是，海马区的结构损伤在红藻氨酸和匹罗卡品诱导的持续性癫痫（SE）模型中均能稳定重现。然而，与红藻氨酸注射相比，匹罗卡品模型在小鼠中可产生更显著的自发性癫痫发作（SRS），鉴于目前转基因小鼠品系资源丰富，该模型在研究慢性癫痫时具有明显优势。5,13,14,15此外，注射匹罗卡品后癫痫发作的进展通常比红藻氨酸模型更快，进一步证明了匹罗卡品癫痫模型的有效性。
在此，我们演示了一种通过腹腔注射匹鲁卡品诱导癫痫持续状态（SE），并进行慢性癫痫的视频和脑电图（EEG）监测的方法。

<table><tbody><tr><td>C57BL/6</td><td>Envigo</td><td>C57BL/6NHsd</td><td></td></tr><tr><td>硝酸甲基东莨菪碱</td><td>Sigma</td><td>S2250</td><td>配制10倍储存液</td></tr><tr><td>硫酸特布他林盐</td><td>Sigma</td><td>T2528</td><td>配制10倍储存液</td></tr><tr><td>盐酸匹鲁卡品</td><td>Sigma</td><td>P6503</td><td></td></tr><tr><td>盐酸氯胺酮</td><td>Yuhan corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>盐酸赛拉嗪</td><td>Bayer Korea</td><td></td><td></td></tr><tr><td>地西泮</td><td>SAMJIN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蓖麻油（Kolliphor EL）</td><td>Sigma</td><td>C5135</td><td>聚氧乙烯35氢化蓖麻油</td></tr><tr><td>生理盐水</td><td>Daihan pharm. Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5%葡萄糖</td><td>Daihan pharm. Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>碘溶液（聚维酮碘）</td><td>Firson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>兽用软膏（Terramycin）</td><td>Pfizer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蓝色尼龙线</td><td>AILEE</td><td>NB617</td><td></td></tr><tr><td>莫匹罗星（Bearoban）</td><td>Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>酮洛芬</td><td>Samchundang Pharm. Co., Ltd</td><td></td><td>5 mg/kg</td></tr><tr><td>庆大霉素</td><td>Huons, Ltd.</td><td></td><td>5 mg/kg</td></tr><tr><td>1 mL注射器</td><td>Sung shim medial Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>26号针头</td><td>Sung shim medial Co., Ltd.</td><td></td><td>26 G * 13 mm (1/2&quot;)</td></tr><tr><td>30号针头</td><td>Sung shim medial Co., Ltd.</td><td></td><td>30 G * 13 mm (1/2&quot;)</td></tr><tr><td>剃须刀片</td><td>Dorco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>钻机</td><td>Saeshin precision Co., Ltd.</td><td></td><td>207A, 35K（转速）</td></tr><tr><td>遥测视频/脑电图系统</td><td>Data sciences International. Inc.</td><td>Version 5.20-SP6</td><td></td></tr><tr><td>可植入式发射器</td><td>Data sciences International. Inc.</td><td>ETA-F10</td><td></td></tr><tr><td>螺钉</td><td>Sungho Steel</td><td></td><td>M1.4，2 mm长，不锈钢</td></tr><tr><td>牙科水泥材料&amp;nbsp;</td><td>Dentimex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>丙酮</td><td>Duksan pure chemicals Co., Ltd.</td><td></td><td>CAS 67-64-1</td></tr><tr><td>多聚甲醛（PFA）</td><td>millipore</td><td>1.04005.1000</td><td>4 %&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>蔗糖</td><td>Sigma</td><td>S9378</td><td>0.01 M PBS中的30%溶液</td></tr><tr><td>乙酸焦油紫</td><td>Sigma</td><td>C5042</td><td></td></tr><tr><td>乙醇</td><td>EMD Millipore Co.</td><td>UN1170</td><td></td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>Duksan pure chemicals Co., Ltd.</td><td>UN1307</td><td></td></tr><tr><td>冰乙酸</td><td>Junsei chemical</td><td>31010-0350</td><td></td></tr><tr><td>FSC33 透明剂&amp;nbsp;</td><td>Leica biosystems</td><td></td><td>用于组织冷冻的OCT包埋剂</td></tr><tr><td>组织学用DPX封片剂</td><td>Sigma</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>Fine science tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>剪刀</td><td>Solco biomedical</td><td>02-2445</td><td></td></tr><tr><td>立体定位仪</td><td>David Kopf Instruments</td><td>E51070012</td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠匹罗卡品颞叶癫痫模型及基于无线遥测系统的脑电图监测

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

颞叶癫痫（TLE）是成年期常见的神经系统疾病。在慢性癫痫的转化研究中，通常选用匹罗卡品诱导的癫痫持续状态（SE）来模拟自发性反复发作的癫痫（SRS）。本文介绍了一种通过腹腔（i.p.）注射匹罗卡品诱导SE，并利用无线遥测视频与脑电图（EEG）系统在活体动物中监测慢性反复性癫痫发作的实验方案。我们展示了匹罗卡品注射后需密切关注的显著行为学变化，并分析了这些变化与注射后7天及6周时海马神经元丢失之间的相关性。此外，我们还描述了用于视频和脑电图记录的电极植入实验步骤，以及对慢性反复性癫痫发作频率和持续时间的分析方法。最后，我们讨论了在不同情况下未能获得预期结果的可能原因。本研究为小鼠慢性癫痫建模提供了基本概述，并给出了相应的故障排查指南。我们认为该方案可作为构建合适的慢性癫痫及癫痫发生模型的基础参考。

成功的癫痫持续状态（SE）可诱导海马细胞死亡和自发性癫痫发作（SRS）（图1 和 图2）。我们在SE发作后3小时通过注射地西泮终止行为学上的急性癫痫发作，并在7天或6周后处死小鼠。
进行视频脑电图（video-EEG）监测时，小鼠在癫痫持续状态（SE）发生4周后接受植入手术，并在SE发作后5至7周期间连续评估自发性癫痫发作（SRS）情况，评估持续2周。
图1 显示通过焦油紫染色评估的海马区细胞死亡情况。在诱发癫痫持续状态（SE）后7天，齿状回的门区（图1Ad）以及...

本文描述了一种通过全身注射匹鲁卡品诱导癫痫持续状态的方法，以及利用无线遥测视频和脑电图系统在活体动物中监测自发性复发性癫痫发作的方法。该方案可用于研究慢性癫痫、癫痫发生以及急性癫痫发作的病理生理机制。

颞叶癫痫（TLE）是成人常见的神经系统疾病。对于慢性癫痫的转化研究，通常采用匹罗卡品诱导的持续性...

本实验的总体目标是使用匹鲁卡品诱导小鼠癫痫持续状态，并利用遥测系统监测自发性复发性癫痫发作。该方案可用于研究急性癫痫发作、癫痫发生及慢性癫痫的病理生理机制。该技术的主要优势在于提供一种慢性癫痫小鼠模型，该模型在急性癫痫发作后具有较高的存活率，并表现出自发性复发性癫痫发作。本实验操作将由我实验室的博士后 Ji-Eun Kim 博士进行演示。首先称量每只八周龄雄性小鼠的体重。配制每千克体重2毫克的东莨菪碱和特布他林，以及每千克体重280毫克的匹鲁卡品溶液。然后，将溶液腹腔注射到每只小鼠体内，并将小鼠放回笼中。在给予东莨菪碱和特布他林30分钟后，向每只小鼠注射匹鲁卡品溶液。匹鲁卡品注射后立即把小鼠置于28至30摄氏度的培养箱中进行观察。接下来，观察小鼠的行为，直至诱导出癫痫持续状态（SE）。如果检测到符合Racine分级标准三级或更高级别的边缘系统运动性癫痫发作，请记录时间并持续监测小鼠。一旦连续运动性癫痫发作持续超过两分钟，即将小鼠放入室温下的新笼子中，并继续监测三小时，以确定其惊厥性癫痫发作是否持续以及是否已成功诱导出癫痫持续状态。然后，在状态性癫痫发作（SE）开始后3小时，通过注射10毫克/千克的地西泮溶液终止行为性急性癫痫发作。注射地西泮后，为每只小鼠给予1毫升5%葡萄糖溶液，以帮助其恢复。在SE诱导后的第1天，称量小鼠体重，并将其继续置于培养箱中额外饲养一天。在诱导癫痫（SE）后的第2天，称量小鼠体重并将其放回原饲养笼中。提供湿润食物以促进恢复。最后，持续监测动物每日体重，直至匹罗卡品处理后第7天。如果体重未增加，则向小鼠注射5%葡萄糖。在癫痫持续状态（SE）诱导四周后，准备12周龄的小鼠，进行遥测仪植入以监测脑电图（EEG）。将小鼠置于带有耳杆和咬合板的立体定位仪中，并在双眼上涂抹兽用眼膏，以避免失明。然后，为了在手术过程中保持无菌条件，使用刀片剃除手术区域的毛发，并注意防止毛发污染手术区域。剃毛后，用70%乙醇和碘溶液对皮肤进行消毒。接着，用PBS浸湿的棉签擦拭皮肤，随后再用70%乙醇和碘溶液处理。使用剪刀在头部正中做一纵向切口，暴露人字缝（lambda）、冠状缝（bregma）及目标位置。然后将钻头置于冠状缝处，记录该点的 X、Y 坐标，用于计算固定螺钉的坐标。接着缓慢下放钻头，钻出骨孔，注意在颅骨较薄的区域操作时，避免钻头插入过深。将单通道无线脑电发射器的主体皮下植入颈后部，并将柔性导线放置在颅骨附近。接着，使用镊子将不锈钢螺钉放入每个钻孔中，并用螺丝刀顺时针旋转将其拧紧。确保螺钉不要拧入过深，以免损伤硬脑膜或脑组织。从导线末端剥去两毫米的绝缘层，并将导线拉长至足以绕紧螺钉轴的程度，以确保导线与螺钉之间形成良好的连接。将参考电极连接到前部的螺钉，记录电极连接到顶叶皮层的螺钉。然后，使用牙科水泥固定整个装置，确保金属部分不外露。最后，待牙科水泥干燥

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小鼠颞叶癫痫的 Radiotelemetry 模型及脑电图监测

本视频介绍了通过全身给予匹鲁卡品在小鼠中诱导癫痫持续状态（SE）以模拟颞叶癫痫的实验操作流程。...

系统性匹罗卡品治疗：颞叶癫痫小鼠模型

该视频展示了利用无线发射系统对幼年啮齿类动物进行长期连续脑电图（EEG）监测的技术。发射器包含两个记录电极和一个参考电极，可延伸至大脑表面。将幼鼠放入记录舱后，可对其从发育期至成年期的脑电活动进行持续监测。...

幼年啮齿类动物的长期连续脑电图监测

本文展示了在人类疾病新生啮齿类动物模型中，使用无线技术实现脑电图（EEG）监测的方法。通过遥测技术，无需繁琐的连接线，从而允许动物表现出自然行为。...

使用Epoch无线发射器系统在人类疾病的小型啮齿动物模型中进行长期连续脑电图监测

非束缚式脑电遥测技术是一种有价值的实验方法，可用于在自由活动的啮齿类动物中长期记录体内脑电图。本详细方案描述了立体定位下在不同脑区进行硬膜外和深部脑内电极植入的操作步骤，以实现对中枢神经系统节律性活动及相关行为阶段的可靠记录。...

非束缚式脑电遥测：硬膜外与深部脑内立体定位脑电电极植入

本文展示了针灸操作、癫痫模型的建立以及啮齿类动物睡眠分析的方法。文中描述了针灸操作过程及穴位的定位。采用匹罗卡品或戊四氮（PTZ）诱导癫痫发作。通过皮层脑电图（ECoG）、肌电图（EMG）、脑温及运动活动记录来进行睡眠分析。...

通过针灸调控大鼠和小鼠的癫痫样皮层脑电图（ECoG）及睡眠

本文介绍了一种利用同步视频、脑电图（EEG）和心电图（ECG）记录小鼠脑部和心脏生物信号的实验方案。同时，我们还描述了分析所得EEG-ECG记录数据的方法，用于检测癫痫发作、EEG频谱功率、心脏功能及心率变异性。...

同步视频-脑电图-心电图监测用于识别癫痫小鼠模型中的神经心脏功能障碍

本文介绍了一种在成年雄性Wistar大鼠中使用侧向液体打击损伤（FPI）模型诱导重度创伤性脑损伤（TBI）的实验方案。同时，我们还展示了如何利用无线遥测系统进行连续的视频脑电图（video-EEG）记录，并监测符合创伤后癫痫发生特征的癫痫样放电活动。...

使用无线视频脑电图系统监测侧向液体打击致创伤性脑损伤后癫痫样放电

本文介绍了评估匹罗卡品诱导的癫痫小鼠记忆障碍的实验方法。该方案可用于研究与癫痫相关的认知功能下降的病理生理机制，这是癫痫最常见的共病之一。...

匹罗卡品诱导癫痫小鼠的记忆功能评估

本报告描述了基于转基因VGAT-Cre小鼠电点燃建立颞叶癫痫模型的方法。点燃后的VGAT-Cre小鼠可能有助于确定癫痫的病因，并可用于新型疗法的筛选。...

制备并植入电极以电点燃VGAT-Cre小鼠，建立颞叶癫痫模型

杏仁核在颞叶癫痫的发生和传播中起着关键作用，该癫痫起源于此结构并由此扩散。本文详细描述了兼具记录和刺激功能的深部脑电极的制备方法，并介绍了一种起源于杏仁核的内侧颞叶癫痫模型。...

利用双极电极通过杏仁核电点燃建立颞叶癫痫小鼠模型

本方案旨在建立一种可靠且易于操作的系统，用于记录自由活动啮齿类动物的脑电图（EEG）。...

一种经济高效且微创的自由活动小鼠多部位慢性脑电图记录方案

学习使用匹罗卡品诱导小鼠癫痫持续状态并通过无线遥测系统监测自发性复发性癫痫发作的方法。该技术为研究癫痫发病机制和慢性癫痫病理生理学提供了高存活率的活体动物模型。

小鼠匹罗卡品颞叶癫痫模型及基于无线遥测系统的脑电图监测

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