透析是生物化学中用于根据扩散分离分子的常用技术。在此过程中，半透膜允许某些分子根据大小移动。该方法可应用于去除缓冲液，称为脱盐，或从蛋白质溶液中交换缓冲液分子或离子。
该视频介绍了透析的原理以及一般程序。本文综述了透析的几种应用，包括超速离心后去除梯度试剂、膜蛋白提取后去除去污剂以及通过改变溶液环境重建蛋白质。
透析是生物化学中用于分离分子扩散的常用技术。在这个过程中, 透膜允许某些分子基于大小的运动。这种方法可以用于去除缓冲, 称为脱盐, 或交换缓冲分子或离子从蛋白质溶液.
本视频介绍了透析的原理和一般程序. 和 #160; 综述了几种透析方法的应用, 包括去除离心后的梯度试剂, 去除膜蛋白后的洗涤剂通过改变溶液环境来提取和重组蛋白质.
生物化学样本通常具有较高的缓冲浓度, 可以破坏下游的处理和分析。透析是一种常见的, 廉价的技术用于分离分子的基础上扩散。该方法利用半膜, 允许基于大小的某些成分的移动。这个视频将显示透析的概念, 一个一般的程序, 以及它在生物化学中的一些用途.
透析的最重要的方面是半膜, 它的毛孔会施加分子量的限制, 使分子低于一定的大小才能通过。例如, 10k 膜通常会保留大于 10 kilodaltons 的分子。然而, 分子量的截止不是一个离散或精确的边界。该膜通常含有广泛的孔隙大小, 所以在截止距离附近的一小部分分子可能会丢失.
由于分子量的分界是使用球状蛋白质定义的, 类似质量的线性分子, 如 DNA 或 RNA, 可能会滑过。膜通常选择一个半到三分之一的分子量的期望分子.
执行过程中, 将一个样本放入膜中, 这反过来又增加了大量的溶液, 称为透析液。随着时间的推移, 较小的分子将在样品和透析液之间自由扩散, 而更大的生物大分子则被保存在体内。透析是一个缓慢的过程。这是常见的, 让它运行过夜, 甚至跨越多天.
如果透析液是纯净水, 总的缓冲浓度会降低, 这一过程称为脱盐。如果解决方案包含其他小粒子, 一些将进入样本, 导致缓冲交换。因为透析是一个平衡过程, 所以透析液可以被多次刷新以进一步取代小分子。完成该过程后, 示例将 re-collected 以进行进一步处理.
现在, 您和 #39; 我已经看到了透析的基本知识, 让我们 #39; 我们来看看一般的程序.
在开始操作前, 膜在透析液中碳纤维。这使得它更容易使用, 并删除任何防腐剂。一旦准备好, 样品收集, 通常与注射器, 然后添加到透析容器。这可以是裸油管, 或包含在一个卡带。过量的空气从透析装置中除去, 以使样品和 #39 的表面积最大化。然后将设置放入透析液中, 搅拌以最大限度地扩散。它应该漂浮不抑制搅动.
透析液在相应的时间间隔内改变, 以达到样品与透析液的平衡。在最后的变化后, 反应通常会在一夜之间运行。在足够的时间段后, 将从卡带中取出无缓冲或交换的样品。一旦收集, 根据实验的性质, 可以对样品进行分析或进一步处理.
现在我们和 #39; 我看了一个一般的透析程序, 让和 #39; 我们看到了这种技术用于生物化学的一些方法.
密度梯度是分离复杂生物样品的常用方法。这个概念依赖于小颗粒的分布, 通常是蔗糖或氯化铯离子。一旦完成, 这些试剂通常需要删除之前, 收集的样本可以处理。透析可以利用纯化的样品进行未来的分析.
在细胞和 #39 的脂质双层中发现某些蛋白质, 通常通过散脂质囊的方法研究它们。首先用洗涤剂提取蛋白质和脂质。透析可以用来慢慢去除洗涤剂, 形成 proteoliposomes.
纯化后, 某些蛋白质错误或变性, 导致功能丧失。导致结构变化的化合物可以通过透析去除, 导致功能性分析的改革.
您和 #39; 我刚刚看过朱庇特和 #39 的透析视频。您现在应该了解这种扩散方法, 一个简单的实验过程, 以及使用此技术.
感谢收看!
透析是生物化学中用于根据扩散分离分子的常用技术。在此过程中，半透膜允许某些分子根据大小移动。该方法可应用于去除缓冲液，称为脱盐，或从蛋白质溶液中交换缓冲液分子或离子。
该视频介绍了透析的原理以及一般程序。本文综述了透析的几种应用，包括超速离心后去除梯度试剂、膜蛋白提取后去除去污剂以及通过改变溶液环境重建蛋白质。
生化样品通常具有较高的缓冲液浓度，可能会干扰下游处理和分析。透析是一种常见且廉价的技术，用于根据扩散分离分子。该方法利用半透膜，允许某些组件根据尺寸移动。本视频将展示透析的概念、一般程序及其在生物化学中的一些用途。
透析最重要的方面是半透膜，其孔隙可施加分子量截止，允许小于一定大小的分子通过。例如，10k 的膜通常会保留大于 10 道尔顿的分子。然而，截留分子量不是一个离散或精确的边界。该膜通常包含广泛的孔径，因此临界值附近的一小部分分子可能会丢失。
由于临界分子量是使用球状蛋白质定义的，因此质量相似的线性分子（如 DNA 或 RNA）可能会漏过。通常选择所需分子分子量的一半到三分之一的膜。
为了执行该程序，将样品放入膜中，然后将其添加到大量溶液中，称为透析液。随着时间的推移，较小的分子将自由扩散穿过样品和透析液之间的膜，而较大的生物分子则被保留在其中。透析是一个缓慢的过程。通常允许它在一夜之间运行，甚至跨越多天。
如果透析液是纯水，则总缓冲液浓度会降低，这一过程称为脱盐。如果溶液中含有其他小颗粒，则一些颗粒会进入样品中，导致缓冲液交换。由于透析是一个平衡过程，因此透析液可以多次刷新以进一步置换小分子。该过程完成后，将重新收集样品以进行进一步处理。
现在您已经了解了透析的基础知识，让我们来看看一般程序。
在开始程序之前，将膜预先浸泡在透析液中。这使得它更易于使用，并去除了任何防腐剂。准备好后，通常使用注射器收集样品，然后添加到透析容器中。这可以是裸管，也可以包含在包埋盒中。从透析装置中去除多余的空气，以最大限度地提高样品与膜的表面积。然后将设置物放入透析液中，搅拌以最大限度地提高扩散。它应该漂浮起来，以免抑制搅拌。
当样品和透析液之间达到平衡时，透析液会以相应的时间间隔更换。在最后一次更改后，反应通常会运行一整夜。足够的时间后，从包埋盒中取出无缓冲液或交换的样品。收集后，可以根据实验的性质对样品进行分析或进一步处理。
现在我们已经了解了一般的透析程序，让我们看看这项技术在生物化学中的一些使用方式。
密度梯度是分离复杂生物样品的常用方法。这个概念依赖于小颗粒（通常是蔗糖或氯化铯离子）上的分布。完成后，通常需要在处理收集的样品之前去除这些试剂。透析可以利用纯化的样品进行未来的分析。
某些蛋白质存在于细胞的脂质双层中，通常通过将它们散布到称为脂质体的球形脂质囊泡中进行研究。首先用去污剂提取蛋白质和脂质。透析可用于缓慢去除去污剂，形成蛋白脂质体。
纯化后，一些蛋白质错误折叠或变性，导致功能丧失。导致这些结构变化的化合物可以通过透析去除，从而导致功能分析物的重组。
您刚刚观看了 JoVE 关于透析的视频。您现在应该了解这种基于扩散的方法、一个简单的实验程序以及这种技术的使用。
感谢观看！
Videos from this collection: