生物化学

透析是生物化学中用于分离分子扩散的常用技术。在这个过程中, 透膜允许某些分子基于大小的运动。这种方法可以用于去除缓冲, 称为脱盐, 或交换缓冲分子或离子从蛋白质溶液. 本视频介绍了透析的原理和一般程序. 和 #160; 综述了几种透析方法的应用, 包括去除离心后的梯度试剂, 去除膜蛋白后的洗涤剂通过改变溶液环境来提取和重组蛋白质. 生物化学样本通常具有较高的缓冲浓度, 可以破坏下游的处理和分析。透析是一种常见的, 廉价的技术用于分离分子的基础上扩散。该方法利用半膜, 允许基于大小的某些成分的移动。这个视频将显示透析的概念, 一个一般的程序, 以及它在生物化学中的一些用途. 透析的最重要的方面是半膜, 它的毛孔会施加分子量的限制, 使分子低于一定的大小才能通过。例如, 10k 膜通常会保留大于 10 kilodaltons 的分子。然而, 分子量的截止不是一个离散或精确的边界。该膜通常含有广泛的孔隙大小, 所以在截止距离附近的一小部分分子可能会丢失. 由于分子量的分界是使用球状蛋白质定义的, 类似质量的线性分子, 如 DNA 或 RNA,...

酶动力学描述的催化作用的酶，是促进化学反应生物体所需的生物分子。酶的作用，对分子，简称为底物，以形式的产品。通过直接或间接测量基板或产品浓度随着时间的推移变化的测定，确定酶动力学参数。 这个视频将覆盖 （包括速率方程） 的酶动力学和动力学模型的基本原则。此外讨论了关于酶测定结果的概念，其次是典型的比色法测定。应用程序部分论述了福斯特共振能量转移 (FRET) 分析，表征胞外酶活性在环境中，通过酶法和调查 DNA 修复动力学使用分子探针。 酶是生命来说是必不可少的生化催化剂。酶检测方法用于研究阐明酶的催化作用的酶促反应的动力学特性。这个视频将涉及酶动力学和化验，复习一般的程序，并显示一些应用程序. 酶是蛋白质分子作用于反应物分子，称为基底。酶降低生化反应的活化能。这允许反应发生在更快的速率，与降低能源需求。 酶促反应可以分为三个基本组件。第一是酶-底物的成因复杂，形成由基质酶活性位点的绑定。复合体可以分解成其原始的成分。这是二个基元反应。或者，复杂可以形成产品并恢复酶，第三个基元反应。

基质辅助激光解吸电离 (MALDI) 是理想的生物分子分析中的质谱离子源。而不是电离气体状态的化合物，样品嵌入在一个矩阵，由激光触击。矩阵吸收的大部分能源;一些这种能量然后转移到样品，由于电离。然后可确定样品离子分析仪飞行时间 (TOF)。 这部影片讲述了 MALDI TOF，包括矩阵的选择和如何使用 TOF 来澄清质量电荷比原则。此过程显示 MALDI 板，样品在盘子里，装卸操作的飞行时间质谱仪的制备。在最后一节，应用程序和变化显示，包括全细胞分析、 表征复杂的生物样品和电喷雾电离。 基质辅助激光解吸电离或 MALDI，是理想的生物分子分析中的质谱离子源。大多数离子源删除大、 脆弱的生物分子的结构信息。MALDI 维护结构的完整性，并因此信息，同时加速分子质量分析器，分离化合物基于大小和电荷。最常见耦合与 MALDI 是飞行或质量分析器 TOF 的时间。本视频将显示在生化的 MALDI 电离，一般的程序，和一些它的用途的概念。 对函数的质谱，必须到气态电离分子。在 MALDI，样品被嵌入在一个矩阵，通常有机复合含芳香和共轭双键。

串联质谱感兴趣的生物分子分离生物样本，然后分裂成多个亚基，帮助澄清其组成和序列。这被通过质谱仪在系列。第一次的光谱仪电离荷比特定质量取样和过滤离子。过滤的离子是支离破碎，然后传递给第二个的质谱仪分析碎片了。 此视频介绍了串联质谱，包括质比选择和分离方法的原理。此外显示分析生化化合物的一般程序使用串联质谱与碰撞诱导解离。应用程序部分包括选择反应监测，测定蛋白质翻译后修饰和他克莫司血浓度的检测。 串联质谱联结在一起的多级质谱对第一次分离的生物分子，，然后确定其化学组成方面。生物分子有大型、 复杂的结构，因此很难确定其分子组成。串联质谱选择分子后分裂成多个亚基，可以帮助澄清识别及其序列的兴趣。本视频将显示在生化的串联质谱的概念、 一般的程序，和一些它的用途。 串联质谱开始作为一种典型的质谱文书: 与离子源，转换成离子和质量分析器的样品，其中分离基于其质量电荷比离子。常见的质量分析器，四极，只允许离子与特定的比例通过，而其他人撞杆装置。允许通过，这个物种被称为前体离子，是感兴趣的生物大分子。离子进入碰撞单元格，通常是另一极，在哪里能量用于片段离子在可预测的模式。

蛋白质结晶，获得一个坚实的格子的生物分子，阐明了蛋白质的结构，并使蛋白功能的研究。结晶涉及干燥组合的许多因素，包括 ph 值、 温度、 离子强度、 蛋白质浓度下的纯化的蛋白。一旦获得晶体，可以通过 x 射线衍射和电子密度模型计算阐明蛋白质结构。 本视频介绍了蛋白质结晶和显示的一般程序。的过程中，涵盖了蛋白的表达和纯化、 结晶和 x-射线衍射。蛋白质结晶的应用包括在硅片药物设计、 绑定现场测定和膜蛋白结构分析。 蛋白质结晶是获得格构式固体形式的一种蛋白质的过程。这些水晶是结构生物学家，协助蛋白功能的研究尤为重要。其他技术，如质谱法或 SDS-PAGE，只能提供信息的一维结构的蛋白质。蛋白质结晶被辅的重组蛋白的表达和 x 射线衍射技术。本视频将显示在生化领域的蛋白质结晶，一般实验室程序，和几个及其应用原则。 在过程中所需的第一步是蛋白的获得毫克量的很纯，通常使用重组蛋白的表达。对应于感兴趣的蛋白质的基因表达载体，克隆并表达的蛋白融合到亲和标记，例如聚-组氨酸，协助亲和层析纯化。要了解更多信息，见此集合的视频上亲和层析。 纯化蛋白形成晶体是依赖于许多因素，包括 ph 值、 离子强度、...

在生物化学领域，基于色谱的分离纯化方法来隔离从复杂混合物的化合物。两个常用的生物化学家这种方法有尺寸排阻色谱法及亲和层析。在尺寸排阻色谱中，挤满了多孔珠列分隔组件基于的混合料大小。另一方面，亲和层析可允许更具体分离的生物分子所使用的固定相，其中包含特定于目标的配体组成的列。 这个视频被作为导论尺寸排阻以及亲和层析，并管理他们的概念。所述的组氨酸标签的蛋白质固定化金属离子亲和色谱纯化的分步过程。这两种色谱方法在生物化学和生物医学研究中的应用也被异形。 "色谱"指的是广泛的方法用来隔离组件从一个复杂的混合物之前可以确定生物分子的性质和活动, 的一个重要步骤。每个色谱技术具有分离，根据样本矩阵和目标化合物的不同机制。这个视频将集中原则和操作的两种方法共同的生物化学: 和亲和尺寸排阻色谱法。 尺寸排阻色谱法或 SEC 基于样品中的化合物的大小。向与多孔材料的列添加包含样品流动相: 固定相。样品中的分子可分为三个类别 1。

二维凝胶电泳 (2DGE) 是一种技术，可以解决数以千计的生物分子混合物。这种技术涉及被耦合在一起的两种不同分离方法: 等电聚焦 (IEF) 和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)。这身体分离化合物横跨两轴间的一种凝胶由其等电点 （电化学性能） 和其分子量。 在这个视频程序包括 2DGE 和表征复杂蛋白质溶液组成的一般程序的主要概念。在应用程序部分，包括生物标志物检测疾病的启动和进展，监测治疗的患者和蛋白后翻译后修饰 (PTM) 的研究显示了这种技术的三个示例。 二维，或 2D，凝胶电泳是一种技术，利用两种不同分离方法可以从单一的混合物分离数千种蛋白质。一个技术，SDS — PAGE 或钠十二烷基硫酸聚丙烯酰胺凝胶电泳，完全不能分开单独的复杂混合物。二维凝胶电泳夫妇 SDS — PAGE 对第二个方法、 等电聚焦或等电聚焦分离基于等电点，允许该决议可能所有蛋白质在细胞裂解液。本视频将显示原则的二维凝胶电泳、 一般的程序，和一些及其生物医学应用。 二维凝胶电泳始 IEF 作为第一个维度。每个蛋白质有 pH 值，称为等电点或...

代谢标记用来探测生化转换和修改发生在一个单元格中。这被通过使用模拟天然生物分子的结构的化学类似物。细胞利用其内源性的生化过程，生产标有的化合物的类似物。该标签允许成立为法团的检测及亲和标签，然后可以用来阐明使用其他生化分析技术，如 SDS — PAGE 和核磁共振的代谢途径。 该视频介绍代谢标记和显示两个一般程序的概念。 第一个使用同位素标记法，来表征的一种蛋白质磷酸化。第二封面感光的标签来表征蛋白质-蛋白质相互作用的代谢标记也三个应用程序内介绍: 植物材料贴标 RNA 来衡量动力学，标签在胚胎发育中的糖。 代谢标记用来探讨机械的一个单元格。这被通过使用化学类似物探测的生化变化和发生的修改。本视频将显示代谢标记，典型的原则，同位素和感光贴标过程和一些应用程序。 可以使用一系列的战略进行代谢标记。在这里，我们将描述同位素、 感光，和生物正交标记。 同位素标记法使用执行的结构类似物与对应的天然，化学完全相同，但有罕见同位素纳入他们的结构。在这 L-赖氨酸模拟碳和氮原子所取代碳 13...

电泳迁移分析法 (EMSA) 是用来阐明蛋白质与核酸之间的绑定的生化过程。在这种测定方法中混合了放射性标记的核酸和蛋白质测试。绑定通过凝胶电泳分离组件基于质量、 电荷和构象。 该视频演示 EMSA 和一般的程序，包括凝胶和蛋白质的制备、 绑定、 电泳，检测的概念。覆盖在此视频的应用程序包括的染色质重塑的酶，包含 biontinylation，改性 EMSA 的分析与研究结合部位的细菌响应监管机构。 EMSA，电泳迁移分析法，也被称为凝胶转移检测，是一个多才多艺和敏感的生化过程。EMSA 通过检测转移乐队在凝胶电泳中阐明了蛋白质和核酸之间的绑定。 这个视频描述了 EMSA 的原则，所提供的一般过程，并探讨了一些应用程序。 DNA 复制、 转录、 和维修，以及 RNA 加工是所有关键的生化过程。他们都涉及到蛋白质与核酸之间的绑定。许多严重的疾病和障碍都与此绑定中修改。EMSA 是定性地确定是否某一特定蛋白绑定到特定的核酸技术。首先，核酸标记，通常与放射性磷-32，以创建探测器。然后测试蛋白质和核酸探针混合。当蛋白质与核酸探针结合时，由此产生的复杂有更大的质量和不同的构象比独自核酸。

测量浓度是许多生化检测方法的基本步骤。光度法蛋白质测定利用这一事实，越样品含有吸光物质，少光将传送通过它。由于浓度与吸收之间的关系是线性的这种现象可以用于测量样品中的浓度在哪里是未知。 这个视频的光度蛋白测定基础知识，介绍了布拉德福德测定和洛瑞法。视频中的过程将涵盖典型的布拉德福德测定。应用程序覆盖包括直接测量很小卷的核酸浓度和纯度进行了表征，耦合效率的一种仿生材料和另一种变异的光度蛋白测定使用雷染料的测定。 样品中的蛋白质浓度测定的是在许多不同的生化分析的基本步骤。光度法测定可以用样本量太小。越多样本含有吸光物质，少光将传送通过它。这提供了吸收物质的定量测定。这些概念是如此根本的科学的文章，介绍的两种技术是在三个最常被引用文件中的所有时间。本视频将显示背后一些最常见的光度蛋白质的概念，测定技术、 执行的方式和如何对收集的数据进行分析。 光度法蛋白测定基于浓度与光吸收能力之间的关系。这就是所谓的啤酒 — 朗伯定律，其中指出，吸光物质的浓度是成正比的吸光度。 这一原则是所有光度蛋白质测定方法的基础。

密度梯度超速离心法是一种常用的技术，用来分离和纯化生物大分子和细胞的结构。这项技术利用这一事实，悬浮稳定性高，是比溶剂密度的颗粒将泥沙，而那些不那么密集会浮起。为了分离生物分子内密度梯度，可以通过降低密度离心管分层液体建立情况下，高速离心用来加速这一进程。 该视频将覆盖密度梯度超速离心法，包括演示、 创作以及蔗糖梯度超速离心法，分馏物收集样品制备过程的原则。应用程序部分讨论隔离多蛋白复合物核酸合成物，和使用氯化铯密度梯度分离的隔离。 密度梯度超速离心法是常用的方法进行分离纯化生物化学实验的细胞结构。该技术使用高速、 或超，离心机无损分离密度梯度中的细胞成分。这个视频描述了密度梯度超速离心法的原则，提供的一般过程使用蔗糖梯度，并探讨了一些应用程序。 让我们开始通过检查超速和密度梯度的原则。悬浮液含有颗粒液体溶剂中。由于重力，粒子密度比溶剂沉淀出来而那些比溶剂浮密度较低。差额越大，密度之间的粒子和溶剂，越快的分离。 离心包含称为转子，在高度控制的速度旋转，模拟强引力场的单元。在这一领域内颗粒和溶剂密度的差异被放大。

联合沉淀 (CoIP) 和下拉法是密切相关的方法, 以确定稳定的蛋白质-蛋白质相互作用。这些方法与沉淀有关, 这是一种将靶蛋白与游离蛋白抗体结合的方法。在 CoIP, 抗体结合蛋白本身绑定到另一个不与抗体结合的蛋白质, 这是一个分离过程, 保存蛋白质-蛋白质复合物。下拉法的区别是, 亲和标记的诱饵蛋白取代抗体, 亲和层析是用来分离蛋白蛋白复合物。 这个视频解释 CoIP, 下拉化验, 并在实验室的实施。包括用于纯化和分析束缚蛋白的试剂、仪器和仪器, 涵盖了每种技术的 step-by 步骤协议。此外, 该视频的应用部分描述了一个研究 myxovirus 蛋白如何抑制流感核的过程, 通过下拉法对钙调素的作用进行了调查, 并对表征瞬态蛋白相互作用。 蛋白质-蛋白质相互作用在多种生物功能中起着重要作用。大多数蛋白质-蛋白质相互作用和它们的生物效应尚待确定。联合沉淀, 或 CoIP, 和下拉法是两个密切相关的方法, 以确定稳定的蛋白质-蛋白质相互作用。这段视频将介绍这两种化验方法的原理、它们的一般实验室程序以及这些技术的应用。 CoIP 和下拉法是沉淀的变种,...

重组是孤立的生物分子回到其原来的窗体或函数的过程。这是研究膜蛋白，使重要的细胞功能，并影响行为的附近血脂尤其有用。为了研究原位纯化的膜蛋白的功能，他们必须重组的将它们集成到人工脂质膜。 该视频介绍膜蛋白重组概念和相关的手续，如使用洗涤剂，形成的人工泡使用脂类，纳入到人工的囊泡，分离蛋白和洗涤剂溶液中分离的蛋白质分离。最后，介绍了两个应用程序: 膜转运蛋白和重组的捕光色素蛋白的重组。 重组是将孤立的生物分子还原到其原始的窗体或功能的过程。在研究膜蛋白，使许多重要的细胞过程，并影响周边脂类的行为时，通常使用此方法。然而，细胞环境的复杂性使得膜蛋白的功能难以研究原位。这种蛋白质可以提取和纯化，但不膜不能评估其实际的功能。因此，孤立的膜蛋白是重组的人工脂质膜，如脂质体的融入。这个视频将介绍膜蛋白重组，一般重组过程中和在生物化学中的几个应用的原则。 细胞膜主要由磷脂和膜蛋白组成。磷脂形成的亲水磷酸元首时与交互水溶液的内部和外部的单元格，疏水的脂肪酸尾巴彼此交互在双层双层。 一些膜蛋白只有通过静电或非共价相互作用与膜进行交互。其他人，被称为 '积分蛋白质'，嵌入在脂双层中。

Förster 共振能量转移 (苦恼) 是一种用于研究近距离生化相互作用的现象。在烦恼, 一个施主发光分子可以 non-radiatively 转移能量的受体分子, 如果其各自的发射和吸收谱重叠。能量转移和 #8212 的量; 因此, 样品和 #8212 的总体排放;d epends 在一个受体-施主对发光分子附近。焦虑分析与其他生物化学技术相结合, 获得了这一 #8220 的生物分子结构和相互作用的详细信息; 光谱尺. #8221; 此视频介绍了烦恼分析的原则和概念。该程序的重点是准备样本的烦恼和方式来介绍和解释数据。最后, 应用包括通过标记细胞或蛋白质的部分来监测构象和细胞过程, 监测改变蛋白质结构的酶反应, 并利用焦虑来监测细胞表达的单体聚合. Förster 共振能量转移, 或烦恼, 是在发光分子之间的辐射能量转移, 并经常用于研究近距离的生物化学相互作用。只有当荧光分子间隔在10纳米之间时, 才会产生烦恼。烦恼分析可以与其他技术相结合, 获得详细的结构信息。该视频将介绍烦恼的基本原理, 总结一个协议和数据介绍, 并讨论一些生物化学的应用. ...

表面等离子体共振 (SPR) 是无标签生物传感器背后的基本光学现象, 用来评估生物分子的亲和性、动力学、特异性和浓度。在 SPR 中, 生物分子之间的相互作用发生在一个由薄薄的金属层在棱镜上。生物分子的实时相互作用可以通过测量反射在金属下侧的光的变化来监测. 该视频描述了 SPR 的基本概念, 以及它是如何用于分析和可视化生物分子相互作用的。接下来是一个样品制备和实验协议, 用于调查结合率利用 SPR。在应用部分, 对 spr 成像、局部 spr 和量子点增强 spr 进行了探讨. 表面等离子体共振 (或 SPR) 是某些无标签生物传感器背后的基本现象, 用于评估生物分子的结合和吸附作用。需要标记的结合化验, 例如 ELISA, 可能是一个费时的过程, 并且也许改变分析物的功能。在 SPR 中, 生物分子之间的相互作用发生在一个特殊的传感器, 由薄薄的金属层在一个棱镜的表面。通过监测金属底部反射光的变化, SPR 仪器可以在不使用标签的情况下 real-time 这些相互作用的可视化。本视频将介绍 spr 的基本原理, spr 成像的一般程序, 以及在生物化学中的一些应用.