血小板输血中微粒的常规筛选方法
2018年1月31日
血小板集中筛查微粒含量是医院血液库质量改善的新举措。目的是区分活化的非活化血小板, 以优化血小板的使用。提供非活化血小板给血液学肿瘤患者可能会降低其高风险成为难治性。
该方法的总体目标是通过在供体中心或医院血库进行的常规检查来表征血小板输注，以优化这些血液制品对出血或血癌患者的使用。这种方法可以帮助回答输血医学中的关键问题，例如，血小板输注是否包含活化血小板或非活化血小板。该技术的主要优点是它提供了快速准确的微粒含量筛选，作为血小板活化的可靠指标。
刚接触这种方法的人需要学习如何从袋子的管道段中采集样本，因为现在没有常规进行。当我们看到来自不同供体的血小板在活化状态上具有高度可变性时，我们首先想到了这种方法，这似乎对患者有影响。有三种方法可以从血小板浓缩物中获取样品。
要从袋子中取样，请轻轻水平移动 5 秒钟，从头到尾倾斜 5 次，将血小板袋的内容物充分混合。打开袋子的夹子，袋子被抽空并自行填充。无需完全装满袋子，因为动态光散射或 DLS 测试只需要 100 微升样品。
用试管封口机热封连接管，断开袋子与袋子的连接。从空管路中采样时，验证血小板袋管路是否已空存放，并且管路块是否仍在原位。目视检查管路，确认管路中没有血小板浓缩物。
关闭管路上的汽提塔，尽可能靠近管路块，通过压缩手柄以挤压辊筒之间的管路，同时保持汽排塔关闭，松开气路管路。慢慢地将剥离剂拉到空管路上，让管路慢慢填充到剥离剂后面。继续作，直到剥离器下方的部分完全充气，或者直到剥离器距离管路末端不到一英寸。
牢牢压缩脱管剂的手柄并慢慢将脱管剂拉下管子至关重要。使用剥离器到达停止点后，使用管道密封器将管道热封在剥离器上方一英寸处。现在，松开手动脱管器的手柄。
再次热封，在前一个密封上方 1 到 2 英寸处形成测试段。然后，从血小板单位上切下测试段。此段将用于 DLS 测试。
当从非空管路中取样时，将袋子垂直悬挂并松开管路块（如果就位）。目视检查管路，以确定是否有任何明显的固体团块。如果确实存在固体团块，请密封其上方，以免它们被剥离到袋子中。
接下来，关闭管路上的剥离管，尽可能靠近管路的密封端。通过压缩手柄以挤压滚轮之间的管道，将管路内容物剥离到袋子中。在保持夹紧力的同时，将剥离管器沿管道移向袋子。
从吊钩上取下血小板袋，轻轻混合袋子 5 秒钟，从头到尾倾斜 5 次，同时保持剥离器关闭。将袋子垂直悬挂，同时保持剥离器关闭。慢慢地将剥离剂拉到空管路上，让管路慢慢填充到剥离剂后面。
继续作，直到剥离器下方的部分完全充气，或者直到剥离器距离管子末端不到一英寸。使用剥离剂到达停止点后，使用管密封机在剥离剂上方 1 英寸处对管道进行热封。松开剥离器后，再次在前一个密封件上方 1 到 2 英寸处热封，以创建测试段。
切断并丢弃管路的最后一部分。然后，从血小板单位上切下测试段。此段将用于 DLS 测试。
使用防溅罩和干净、干燥的剪刀，剪断袋管或测试段的一端。使用采样工具将样品直接从打开的袋子或管段吸入毛细管中，立即填充毛细管。将填充的毛细管轻轻推入毛细管密封剂中，同时轻轻扭转并对托盘施加一些压力，以密封填充的毛细管底部。
然后，断开 100 μL 固定体积移液器和吸头与毛细管的连接，确保毛细管牢固地嵌入毛细管密封剂中。从毛细管密封剂托盘中取出毛细管，并用异丙醇垫擦拭。轻轻轻弹毛细管底部，确保没有气泡被捕获。
最后，将毛细管放入 DLS 系统中。首先，启动控制台，按照触摸屏上的说明登录并选择微粒或 MP 测试选项以启动新的 DLS 测试，以测量血小板样品的微粒含量。使用条形码扫描仪输入样品信息，或手动输入。
按照指示将毛细管放入 DLS 系统并开始测试。测试完成后，从毛细管支架中取出样品，并根据设施指南适当处理耗材。用与结果相对应的颜色标记血小板袋。
例如，orange 表示未激活，pink 表示已激活。动态光散射 通过布朗运动测量粒子在悬浮状态下移动的速度。根据不同的速度，小颗粒移动得快，大颗粒移动得慢。
该技术决定了样品的大小分布。DLS 根据小于 15% 的微粒含量确定这种输注含有未活化的血小板。事实上。显微镜下可以看到大多数具有极少微粒的盘状血小板。
然而，另一种血小板输注，肉眼看来与第一个袋子完全相同，含有基于 15% 以上微粒含量的活化血小板。在该样品中，通过显微镜可以看到各种血小板形态、小聚集体和许多微粒。观看本视频后，您应该很好地了解如何无创地从血小板袋中采集样品，填充毛细管，并检测样品的微粒含量，以优化血小板库存的使用。
在尝试此程序时，请务必将袋子充分混合，以获得良好的、有代表性的样品。按照这个程序，你可以做其他方法，比如流式细胞术，来回答关于微粒细胞起源的问题。一旦掌握，这项技术可以在大约两分半钟内完成。
结合 5 分钟的测试，血小板输注可以在不到 8 分钟的时间内确定特征。开发后，这项技术使医院血库能够筛查其血小板库存，仅使用未活化的血小板治疗血液学/肿瘤学患者，并观察到使用的血小板输注减少。正如我们所说，最安全的输血是不输血的。
虽然这种方法可以深入了解输血前血小板的特征，但它也可以用于直接检测来自供体的富血小板血浆。这项技术对血癌患者治疗的影响更大，因为他们受益于非活化血小板输注，从而降低了难治
性的风险。概述
本文介绍了一种通过筛查血小板浓缩物中的微粒子含量来管理血小板库存的方法。该技术旨在区分活化和未活化的血小板，可能改善血液病-肿瘤学患者的输血结果。
关键研究组成部分
科学领域
- 输血医学
- 血液学
- 血小板生物学
背景
- 血小板输血的活化状态可能存在显著差异。
- 活化的血小板可能导致患者并发症。
- 了解微粒子含量可以指示血小板活化。
- 当前实践不常规评估血小板活化状态。
研究目的
- 优化临床环境中的血小板使用。
- 提供一种评估血小板活化的可靠方法。
- 减少血液病-肿瘤学患者的难治性风险。
使用的方法
- 用于微粒子分析的动态光散射（DLS）。
- 从血小板袋和管路的采样技术。
- 对血小板浓缩物进行视觉检查以查找团块。
- 用于DLS测试中的样本跟踪的条形码扫描。
主要结果
- 未活化的血小板被识别为微粒子含量小于15%。
- 显微镜确认存在具有少量微粒子的盘状血小板。
- 该方法允许快速准确地筛查血小板活化。
- 根据活化状态对血小板袋进行标记已建立。
结论
- 该方法增强了血小板输血的管理。
- 它为改善输血医学中的患者结果提供了一个框架。
- 需要进一步培训工作人员以有效实施该技术。
常见问题
Executive Industry Relevance
Routine screening of platelet concentrates for microparticle content enables blood banks to differentiate activated from non-activated platelets, supporting optimized transfusion strategies for hematology-oncology patients. This approach addresses a critical quality gap in platelet inventory management by providing a rapid, quantitative indicator of platelet activation status. Implementing this method can reduce transfusion-related complications and improve resource allocation in transfusion medicine workflows.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of platelet activation states as a biomarker for transfusion efficacy and patient risk stratification.
- Operational Value: Provides a standardized, rapid assay for assessing platelet quality in preclinical transfusion models.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Delivers quantitative microparticle content measurements via DLS to distinguish platelet activation thresholds.
- Operational Value: Establishes a reproducible, high-throughput screening method for platelet product release testing.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports disease-relevant evaluation of platelet products in transfusion models aligned with hematology-oncology applications.
- Operational Value: Facilitates translational continuity from donor product screening to clinical transfusion outcomes.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the transfusion medicine workflow as a release testing step for platelet concentrates, enabling go/no-go decisions based on activation status prior to clinical use.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing regarding platelet activation pathways and microparticle generation in storage or stress conditions.
- Screening: Delivers assay readiness through standardized sampling and DLS-based quantification of microparticles as a release criterion.
- Analytics: Provides quantitative microparticle content readouts (<15% for non-activated, >15% for activated) to enable objective product classification.
- Translational Research: Connects product quality assessment to clinical outcomes in transfusion settings, particularly for refractory risk mitigation.
- Enterprise Reuse: Offers a reusable platform for platelet quality control across blood bank operations and donor center networks.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in platelet product quality through direct measurement of activation-associated microparticles.
- Operational Value: Standardized sampling and DLS testing enable reproducible, rapid (<8 min) platelet characterization.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions for platelet issuance, reducing biological risk and improving transfusion safety.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of platelet units, supporting conservation of scarce blood products.
Implementation Considerations
- Training in aseptic sampling techniques from platelet bag tubing and pouches.
- Access to Dynamic Light Scattering instrumentation with microparticle detection capability.
- Standard operating procedures for sample preparation, capillary loading, and DLS test execution.
- Integration of results into inventory tagging systems (e.g., color-coded labeling).
- Validation of sampling reproducibility across different platelet storage conditions and donor variability.
