血小板输注中微颗粒的常规筛查方法

本方法的总体目标是通过在献血中心或医院血库中可常规开展的检测，对血小板输注进行表征，以优化这些血液制品在出血或血液肿瘤患者中的使用。该方法有助于回答输血医学中的关键问题，例如，血小板输注液中所含的是活化血小板还是非活化血小板。该技术的主要优势在于，它能够快速、准确地检测微颗粒含量，而微颗粒含量是血小板活化的可靠指标。

对于刚接触该方法的人员，需要学习如何从血袋的管段中采集样本，因为目前尚未常规开展此项操作。我们最初产生该方法的想法，是由于观察到不同供体的血小板在活化状态上存在较大差异，且这种差异似乎对患者产生了影响。目前有三种方法可从血小板浓缩物中获取样本。

采集袋中样品时，将血小板袋内容物通过轻柔的水平移动充分混匀，持续5秒，并首尾颠倒倾斜5次。打开通向采样袋的夹子，采样袋为负压状态，会自动充满液体。无需将采样袋完全充满，因为动态光散射（DLS）检测仅需100微升样品。

使用管路封口机通过热封将连接管路封口，从而将血袋中的血小板分离袋与主袋断开。若需从空管路中取样，请确认血小板袋的管路已处于排空状态，且管路阻塞块仍处于原位。目视检查管路，确认其中无血小板浓缩物残留。

尽可能靠近导管块的位置，通过按压手柄使滚轮夹紧导管，将导管剥离器夹闭在导管上，并保持剥离器处于闭合状态，然后松开导管块。缓慢将剥离器沿无液导管向下拉动，使导管在剥离器后方逐渐充满液体。持续操作，直至剥离器下方的导管段完全膨胀，或剥离器距离导管末端约2.5厘米时为止。

必须用力捏紧管剥离器的手柄，并缓慢将剥离器沿导管向下拉动。当剥离器到达止停位置时，使用管密封器在剥离器上方一英寸处对导管进行热封。然后，松开手动管剥离器的手柄。

再次热封，在前一个封口上方一到两英寸处进行，以形成测试段。然后，将测试段从血小板单位上剪下。该测试段将用于动态光散射（DLS）测试。

当从非空的管路中取样时，将采样袋垂直悬挂，并松开管路夹（如果存在）。目视检查管路，判断是否存在明显的固体团块。若存在固体团块，应在团块上方进行封口，防止其被挤压进入采样袋中。

接下来，将导管剥离器夹紧在导管上，位置应尽量靠近导管的封闭端。通过按压手柄，使滚轮挤压导管，将导管内的内容物排入袋中。在保持夹紧力的同时，沿导管朝向袋子的方向移动导管剥离器。

将血小板袋从悬挂钩上取下，保持分离器关闭状态，通过将袋子头尾翻转五次，轻柔混匀五秒钟。保持分离器关闭，将袋子垂直悬挂。缓慢向下拉动分离器，使其沿空的管路移动，使管路在分离器后方缓慢充满液体。

继续操作，直到剥离器下方的管段完全膨胀，或剥离器距离管路末端约一英寸时为止。当剥离器到达停止位置后，在剥离器上方一英寸处使用管路封口器进行热封。松开剥离器后，在上一个封口上方一至两英寸处再次进行热封，以形成待测管段。

剪下并丢弃管路的最后一段。然后，从血小板单元上剪下用于检测的管段。该管段将用于动态光散射（DLS）检测。

使用防溅罩和洁净、干燥的剪刀，剪开样品袋管路或测试段的一端。立即使用取样工具将样品从打开的样品袋或管路段直接吸入毛细管中。将装有样品的毛细管轻轻插入毛细管封口剂中，同时施加轻微扭转和压力，以密封毛细管底部。

然后，将100微升固定体积移液器及其吸头从毛细管上断开，确保毛细管仍牢固地嵌入毛细管管封胶中。将毛细管从毛细管管封胶托盘中取出，并用异丙醇擦拭垫擦拭。轻轻弹击毛细管底部，确保无气泡残留。

最后，将毛细管放入DLS系统中。首先，启动控制台，按照触摸屏上的提示登录，并选择微粒或MP检测选项，以启动新的DLS检测，用于测量血小板样本中的微粒含量。使用条形码扫描仪输入样本信息，或手动输入。

根据提示将毛细管放入动态光散射（DLS）系统并开始测试。测试完成后，从毛细管架中取出样品，并根据机构指南妥善处理一次性耗材。根据检测结果，使用对应颜色标记血小板袋。

例如，未活化状态用橙色表示，活化状态用粉色表示。动态光散射通过测量颗粒在悬浮液中由布朗运动引起的速度来表征颗粒大小。根据运动速度的不同，小颗粒移动较快，而大颗粒移动较慢。

该技术可测定样品的粒径分布。基于微粒含量低于15%，动态光散射（DLS）确定该输注液中含有非活化血小板。确实如此。显微镜下可见的主要是盘状血小板，微粒极少。

然而，另一种血小板输注制剂，尽管肉眼观察与第一袋完全相同，但根据其微粒含量超过15%，被判定为含有已活化血小板。在该样本中，显微镜下可见多种血小板形态、少量聚集物以及大量微粒。观看本视频后，您应能够充分理解如何非侵入性地从血小板袋中取样、填充毛细管，并检测样本中的微粒含量，从而实现对血小板库存的优化使用。

在进行该操作时，充分混匀样本袋以获得具有良好代表性的样品非常重要。完成此操作后，可采用其他方法（如流式细胞术）进一步探究微颗粒的细胞来源问题。一旦掌握，该技术可在约两分半钟内完成。

结合五分钟检测，可在不到八分钟内完成血小板输注的表征。该技术问世后，使医院血库能够筛查其血小板库存，仅向血液病/肿瘤科患者输注未活化的血小板，并观察到血小板输注使用量的减少。正如我们所说，最安全的输注就是不进行输注。

尽管该方法可为输注前血小板的表征提供见解，也可用于直接检测供体的富血小板血浆。该技术的应用意义延伸至血液癌症患者的治疗，因为这类患者受益于非活化血小板的输注，从而降低产生难治性的风险。