成年大鼠脊髓侧方半切术及不对称行为学评估

本方案提供了一种可靠的脊髓侧方半切动物模型，可模拟人类布朗-塞卡尔综合征，并提供了一种新的联合行为评分量表，用于评估不对称的行为功能缺损。该小鼠半切模型有助于进一步理解人类布朗-塞卡尔综合征中出现的神经功能障碍。与您提到的其他评估方法不同，我们新开发的联合行为评分量表可适用于任何需要评估不对称性、运动能力及实验室内功能缺损的模型。

利用这一稳定且符合自然解剖特征的半横断模型，有助于在基础研究与转化研究之间对实验结果进行比较。然而，对于初学者而言，使用该模型获得一致的结果可能存在困难。其中关键步骤是将针头垂直置于中线位置，以此作为诱导损伤的引导。

观看本视频后，您应充分了解如何实施手术和行为学实验操作。在实验当天，使用70%乙醇清洁手术台，并将预热的加热垫放置于台面上。用无菌手术单覆盖手术区域后，确认麻醉大鼠对脚趾夹捏无反应。

涂抹眼膏以防止动物角膜干燥，并剃除覆盖胸椎区域的毛发。随后，使用碘伏和乙醇交替擦拭三次，清洁暴露的皮肤。当动物准备就绪后，定位第十三根肋骨，并沿肋骨向背侧追踪，确定其与第13胸椎（T-13）的连接处。

向上计数以确定第9胸椎（T-9），使用15号手术刀片在第8至第11节椎体棘突上方做一条3至4厘米长的正中皮肤切口。将大鼠移至手术显微镜下，钝性分离两侧椎旁肌，使其从棘突向外侧分离至T-9和T-10椎体的关节突部位。使用改良的固定支架稳定脊柱，在两侧椎骨外侧壁上切开小口，将支架的不锈钢臂插入暴露的横突关节面下方。

拧紧螺丝以固定支架，并使用量角器暴露第8至第11胸椎椎板及棘突。使用咬骨钳剪除第9胸椎棘突，切除椎板中线左侧的一小部分以及整个右侧椎板，尽可能向外侧扩展。然后将咬骨钳轻轻插入椎板下方，每次咬除一小块骨质，直至完成所需范围的椎板切除术。

接下来，确定脊髓的背侧中线，将一支30号针头垂直刺入中线，进入脊髓，直至椎管腹侧壁，针头斜面朝向右侧。用一小块无菌明胶海绵止血，将一对虹膜显微手术剪的一侧刀尖沿针道中线插入，另一侧刀尖沿右侧半脊髓的外侧面插入，对右侧半脊髓进行完全切断。利用同一针头的侧缘作为刀具，切开损伤间隙，以确认右侧半横断完全。

观察椎管底部，以确认右侧半横断的完整性。使用水泥混合物在海绵上方以及第8和第10胸椎棘突之间构建狭窄的桥状结构。随后，用4/0丝线分别缝合肌肉层和皮肤层，并皮下注射0.9%无菌生理盐水以维持水合状态。

术后第一周内每日按压膀胱两到三次，随后几周每日一到两次，直至自发排尿恢复。在手术后适当的时间点，将成年大鼠放入开放场实验装置中，观察动物四分钟内的运动情况。根据表格，对每种行为类别分别记为“是”得1分，“否”得0分，各项得分相加，得到最终单侧半横断步态评分为0-8分。

对于步态协调性分析，记录实验动物在狭窄跑道装置上行走的过程，并针对每种协调类别分别评分为：0分（无协调）、1分（规律性差或笨拙）、2分（正常）。对于接触放置评估，将动物保持垂直体位，使其双侧后肢均可产生放置反应，然后将其中一侧后肢的足背轻轻向前刷过表面边缘。观察足部是否放置到表面上，并对后肢接触放置反应进行评分：0分（无放置动作），1分（有放置动作）。对于网格行走评估，将大鼠置于一个高架的塑料包被金属丝网网格上，网格尺寸为36厘米×38厘米，孔径为3厘米见方，录像记录大鼠在平台上自由行走30步的过程，以便量化各肢体踩空的次数，从而评估运动功能缺损的严重程度。

在损伤中心处的横截面上进行氨基酸荧光染色，显示右侧半脊髓完全缺失，而对侧左侧半脊髓得以保留。个体步态评估指标的评分可单独分析，也可合并为半横断后综合行为评分。

损伤后前三天，大鼠失去迈步能力，约在损伤后7至10天，同侧开始重新出现类似迈步的动作，且多数为足背部着地的步态。到T-9节段半横断损伤后28天，大鼠可实现几乎正常协调的足底迈步。

相比之下，对侧后肢的功能受单侧半横断损伤的影响较小，其评分在损伤后前五天内下降，到损伤后第10天即恢复至基线水平。在整体步态协调性测试中，半横断损伤后的协调稳定性与适应能力在损伤后前五天均显著降低。同侧后肢的接触放置和网格行走能力也受到影响，通常在动物开始出现足底行走步态时逐渐恢复。

要制造一个切口整齐的损伤可能比较困难。将一根针放在中间位置可作为有用的参考，以确保组织被完全分离。