2018年2月23日
我们介绍了一种利用手动晶状体拉伸装置研究晶状体调节的高效方法。该方案通过牵拉连接在晶状体囊膜周围的悬韧带,从而拉伸晶状体,以模拟生理状态下的调节过程。
该技术的总体目标是提供一种更可行且成本较低的方法,以准确研究晶状体的生物力学特性。该方法有助于解答眼生物力学领域中的关键问题,例如晶状体在调节能力丧失及老视发生过程中如何发生变化。该技术的主要优势在于,它能够在材料成本低、操作稳健性强的条件下,准确监测晶状体的调节能力。
获取眼球样本后,牢固地夹住眼球侧面,使用剃须刀片在距离角膜3毫米处的侧边做一个切口,深度需达到玻璃体。使用灭菌剪刀,沿着眼球周缘继续小心剪开,并用镊子将已切除的后部眼组织移除。根据需要使用镊子分离晶状体、悬韧带及附着的玻璃体,断开悬韧带与睫状体同睫状肌的连接,同时保持其与晶状体的连接。
然后去除多余的玻璃体,使晶状体能够平整地放置在手动晶状体拉伸器上。在去除多余玻璃体时,需注意保持晶状体、悬韧带及少量玻璃体的完整性。组装拉伸器时,将10毫米的鞋底及其对应的鞋盖插入拉伸器底板,使鞋槽后壁与鞋体之间保持5毫米的间隙。
使用弯头镊子将取出的晶状体正面朝上放置在底板中央,使鞋状结构支撑晶状体并覆盖中央孔。将对应的上部鞋状结构卡入位置,仅夹住悬韧带和玻璃体。然后将 plates 插入 plate case,并将堵头螺钉插入底板侧面的孔中,再将 plate case 插入底座。
为测量晶状体,将成像系统直接置于装置正上方适当距离处,以获取图像,并在视野中放置一把尺子,以便在后期处理中对图像进行精确的尺寸测量和比例标定。接下来,顺时针方向平稳而牢固地旋转扳手,以拉伸晶状体并获取晶状体图像。为确保样品间的一致性,在拉伸晶状体时必须平稳地旋转扳手。
当所有图像采集完成后,将扳手逆时针旋转,使样品恢复至静息状态,并获取晶状体最终静息状态的图像。为分析数据,将图像上传至相应的图像分析软件,并使用点选工具在晶状体周长上选择至少40个点。在“分析”菜单下选择“测量”,以获得每个选定点的位置,并利用MathLab对这些位置点进行拟合,得到拟合的半径及卡方值。
然后使用拍摄的标尺将像素半径和误差转换为实际度量单位,并进行配对双尾t检验分析,以比较单个晶状体在拉伸前后的变化。在此对10个猪眼样本的代表性分析中,晶状体半径较原始值增加了超过4%,验证了晶状体拉伸方案的有效性,且结果与文献报道一致,具有准确性。当对人眼晶状体进行测试时,观察到晶状体弹性随供体年龄增长而显著下降,这与既往关于晶状体弹性的研究结果相符。
一旦掌握,若操作得当,这种晶状体拉伸技术可在10分钟内完成。在拉伸晶状体过程中,必须持续施加扭转力直至达到限位螺钉位置,以尽量减少样本间的变异性。利用这种手动晶状体拉伸技术,我们能够监测患有多种疾病病理患者的晶状体刚度,包括糖尿病、白内障或老视患者。
该技术问世后,为眼生物力学领域的研究人员探索晶状体在调节能力丧失和/或老视发生过程中的特性开辟了道路。观看本视频后,您应能够充分理解如何使用手动晶状体拉伸装置,以获得有关晶状体的宝贵生物力学信息。请务必注意,操作生物组织可能存在极高风险,因此在执行该实验时,必须采取相应预防措施,例如穿戴适当的实验服,并在使用前对所有器械进行灭菌处理。
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本文介绍了一种使用手动晶状体拉伸装置研究晶状体调节的方法。该技术通过拉伸连接于晶状体囊膜的悬韧带,模拟生理状态下的晶状体调节过程。
使用手动晶状体拉伸装置模拟晶状体调节,可实现对与老视及其他眼部病理相关的生物力学变化进行低成本、可重复的研究。该方法支持针对年龄相关性晶状体硬化疗法的早期靶点验证和作用机制风险评估。该技术简化的样本需求和可靠的定量输出,有助于在转化研究中对晶状体生物力学特性进行全项目范围的评估。
本手动晶状体拉伸方案可融入从发现到临床前研究的眼科生物力学研究流程,支持以假设为导向的研究及转化验证。