小鼠涎腺功能的测定方法

该程序的总体目标是准确且可重复地收集和测量毛果芸香碱刺激后的小鼠唾液。测量啮齿动物的唾液分泌是一项具有挑战性的过程，并且容易出现高度可变性。这种方法很简单，可以在整个研究的多个时间点对同一只动物重复。

这种方法不仅可以测量产生的唾液量，还可以用来收集唾液，以进一步分析唾液中可能分泌的生物活性分子。最终，这在研究干燥综合征、唾液腺纤维化或啮齿动物模型系统中的唾液腺再生时将非常有用。对于此程序，请准备盐酸毛果芸香碱等分试样并冷冻，不超过三个月。

不要重新冷冻任何解冻的等分试样。首先制备 0.6 mL 微量离心管。用加热的 18 号针头小心地在试管底部打一个小孔。

每只鼠标制作一根管。然后，将这些试管放入 2 mL 试管中。无菌不是一个问题。

接下来，使用无菌方法，将圆柱形吸收拭子切成两厘米长。然后，将每块 2 厘米的棉签对角线切成两个圆锥形的棉签。将一根锥形棉签放入每个准备好的微量离心管中。

然后，用干棉签称量每根 0.6 mL 试管。现在，将用于研究的小鼠转移到一个新的干净笼子中。它们可以放在一起。

在接下来的两个小时内，给它们冰水，但不给它们食物。在两小时结束之前，将等分试样的 100 倍原液在无菌盐水中稀释至 1 倍，以制备有效的毛果芸香碱溶液。涡旋试管，并将溶液保持在冰上。

首先，称量每只小鼠以计算剂量。然后，通过腹膜内注射氯胺酮加甲苯噻嗪麻醉小鼠。如果四分钟后小鼠没有被麻醉，则调整剂量。

现在，在双眼涂抹丘脑软膏以防止干燥。接下来，使用腹膜内途径将计算出的毛果芸香碱剂量输送给小鼠，并将计时器设置为两分钟。在这两分钟的间隔内，将鼠标插入 50 mL 限制管中，这样只有头部和耳朵伸出。

将管子以 45 度角放置，鼠标头朝下，腹面朝上。然后，用胶带固定管子。两分钟后，抬起下颌张开嘴巴，然后轻轻地将闭合的解剖钳插入口腔 1 到 2 毫米。

确保舌头靠在镊子的顶部臂上。另一只手用一把细镊子将预先称重的干棉签靠近其锥形尖端。然后，轻轻地将拭子的锥形尖端滑入口腔，取出镊子，同时将拭子尖端留在口腔中。

现在，握住并旋转棉签，直到它与嘴巴的最大接触，这样它就不会掉出来。棉签的宽端必须保持在口腔外。将棉签保持在这个位置 15 分钟。

15 分钟后，轻轻旋转拭子以收集任何未被吸收的唾液。然后，将浸泡过唾液的拭子转移到 0.6 mL 微量离心管中。盖上试管并将其放入 2 mL 试管中，置于冰上。

现在，将鼠标放回恢复笼。在笼子里提供减肥凝胶或湿润的食物颗粒，以帮助它重新补充水分。也可皮下注射 0.2 mL 等渗盐水以加速恢复。

收集所有唾液样本后，称重以确定收集的唾液质量。从装有较小唾液样品管的 2 mL 试管上切下盖子，然后将它们加载到冷冻离心机中，并在 7， 500 g 和 4 摄氏度下离心 2 分钟。唾液将汇集到 2 mL 试管中。

然后，使用微量移液器测量样品的体积。使用所述方法测量 11 周龄 C57 黑色 6 只雌性小鼠的唾液产生。在每克体重 1 微克毛果芸香碱的剂量下，一些小鼠开始表现出痛苦的迹象。

毛果芸香碱与唾液产生之间存在良好的剂量反应关系。唾液重量和体积之间也存在显着的一致性。使用所描述的技术，发现唾液中的菌株差异。

小鼠的 129 个 S6 品系产生的唾液量最少。在检测唾液腺功能减退的实验中，注射脂多糖以激活先天免疫反应。在反应过程中，小鼠产生的唾液较少。

另一种诱导唾液腺功能减退的策略是给小鼠注射辅助明矾加抗 Ro52 抗体。载体对照仅用 Lum 处理。这也可以通过所描述的技术检测到。

观看此视频后，您应该对如何准确且可重现地测量小鼠的唾液分泌有很好的了解。一旦掌握，可以在大约两个半小时内评估 10 只小鼠。在尝试此程序时，重要的是要记住在每一步都要非常一致，从腹膜内注射到放置拭子，以及管理每个步骤的时间间隔。

不要忘记盐酸毛果芸香碱作用于心血管系统，引起心动过缓和低血压。因此，在小鼠中注射毛果芸香碱应小心进行。