Name: 肝硬化大鼠门脉高压综合征的侵袭性血流动力学特征 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: 学习肝硬化大鼠门脉高压综合征的侵袭性血流动力学检测方法，直接测量门静脉压力及多项血流参数。该技术可评估血管张力与内皮功能障碍的药理学干预策略，为晚期肝纤维化机制研究提供可靠数据。

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我们感谢生物医学研究中心的兽医、护士和动物饲养员在我们的研究项目期间提供的持续支持。作者们感谢本方案所有评审人员的重要意见。部分研究由奥地利胃肠病与肝病学会（ÖGGH）授予PS的“青年科学奖”以及奥地利内科学会授予TR的“斯科达奖”资助。

本文所述所有方法均已获得维也纳医科大学伦理委员会以及奥地利科学、研究和经济部（BMWFW）的批准。由于血流动力学测量属于外科干预操作，必须在手术室或类似的洁净工作区域进行无菌操作。通常建议在无菌条件下操作。若使用吸入麻醉，应考虑对手术室进行充分通风以确保操作安全。若需完成本方案中所述全部血流动力学参数的测量，每只动物所需时间约为40–50分钟。
1. 术前准备
<ol>
	<li>打开电子多通道记录仪，并根据制造商的说明校准压力传感器。</li>
	<li>将超声血流探头（1 mm 和 2 mm）连接至桥式放大器。</li>
	<li>准备一壶无菌的生理盐水溶液，并加热至体温37℃ &#176;C，用于湿润组织或纱布敷料。</li>
	<li>记录动物体重，以根据体重调整麻醉剂量，并对血流动力学参数进行体重归一化处理。</li>
	<li>准备吸入麻醉所需的所有设备。 
	注意：如果吸入麻醉和/或必要设备无法在现场实施，则可使用氯胺酮和赛拉嗪进行注射麻醉（氯胺酮80–100 mg/kg，赛拉嗪5–10 mg/kg，溶于生理盐水中，腹腔内注射（i.p.））。为维持持续的手术麻醉深度，需在30–45分钟后追加氯胺酮（剂量减至20–30 mg/kg，肌肉注射（i.m.））。</li>
	<li>使用诱导箱进行吸入麻醉（5分钟，5% v/v 异氟烷，3–4 L/min 氧气），使动物进入短期异氟烷麻醉状态。2-血流）。小心倾斜盒子，通过观察动物的不动状态来检查麻醉深度。</li>
	<li>使用合适的自制气管插管对大鼠进行插管。 
	注意：对于初次接触插管技术的操作人员，可在短时间吸入麻醉后立即给予镇痛/麻醉（步骤1.10），以延长插管操作时间。另一种选择是使用适用于动物的专用面罩进行吸入麻醉。
	<ol>
		<li>使用自制的气管插管，该插管由改良的外周静脉导管（14 G）制成。剪除操作翼，用胶带制作环形固定结构，将其固定在大鼠颊部以防止气管插管移位图1A).</li>
		<li>使用自制的导丝装置（由改良的动脉插管制成）作为导丝夹持器，并配以合适的钝头导丝（图1B).</li>
		<li>使用合适的插管操作台以正确固定动物体位。将动物置于仰卧位，头部呈倾斜姿势。 
		注意：若无专用插管台，可将动物仰卧放置，颈部小心地伸展于实验台边缘。然而，由于存在较高的损伤风险，不推荐采用此方法。</li>
		<li>在大鼠一侧门齿后方固定缝线，并通过将缝线系至另一侧以轻柔拉伸动物颈部图1C).</li>
		<li>用聚焦光束照射气管前腹侧颈部区域。尤其在白化动物中，应确保声带透过皮肤被照亮，以改善视野并实现快速插管。 
		注意：对有色动物进行插管时，应使用动物专用喉镜。</li>
		<li>用两根手指抓住舌头并轻轻拉出。</li>
		<li>使用经利多卡因（喷雾剂）处理的棉签仔细麻醉喉部区域。</li>
		<li>使用导丝装置辅助，将气管导管插入声门之间并进入气管，对动物进行插管。图1D).</li>
		<li>移除导丝装置。</li>
		<li>将管路连接至呼吸机。</li>
		<li>使用适合动物的参数启动呼吸机（1 L/min 氧气）2- 流量，自动流量 = 90/分钟；吸气压：18 mmHg；PEEP：3 mmHg，吸呼比 = 1:2），并检查插管是否到位。 
		注意：如果观察到胃部膨胀，请拔出导管并重新尝试。此外，将呼吸活动与呼吸机节律进行对比，或在腹壁上胃部位置放置两根手指，以评估胃部是否可能膨胀。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>以 0.5–1.0%（v/v）异氟烷和 1 L/min 氧气开始麻醉2-成功插管后的即刻血流（图2A).</li>
	<li>通过脸颊处的经口缝线以及气管插管上固定的胶带环来固定气管插管。</li>
	<li>使用两支1 mL注射器追加麻醉剂和镇痛剂，&#160;例如，腹腔注射（23 G 套管针）氯胺酮（100 mg/kg）[或通过双侧大腿后部肌肉注射（30 G 套管针）进行肌内注射，分配注射体积（剂量）]，以及皮下注射（s.c.）匹替拉明（2 mg/kg）（23 G 套管针）。注意每个肌内注射部位的最大注射体积图2B).</li>
	<li>涂抹眼膏。剪除腹部区域及双侧大腿内侧的体毛。对皮肤进行消毒。 
	注意：应剃除双侧大腿内侧毛发，以便在单侧股动脉插管失败时可使用对侧股动脉进行心率（HR）和平均动脉压（MAP）的测量。若在后续时间点进行剃毛，可能导致毛发污染手术区域。</li>
	<li>将动物仰卧位固定于加热垫（38 ℃）上 &#176;C）用胶带固定（图2C).</li>
	<li>持续监测动物的体温， 例如，使用直肠温度探针（图2D).</li>
	<li>在任何干预或手术前，通过眼睑闭合反射和夹趾试验评估麻醉深度。</li>
</ol>
2. 心率和平均动脉压的测量
<ol>
	<li>使用组织镊提起大腿内侧（选择一侧）股动脉预计位置上方的皮肤，用梅奥剪刀切开约2 cm长的皮肤切口（图3A）。</li>
	<li>通过沿血管神经束反复张开止血钳，钝性分离股动脉及其伴行的静脉和神经复合体与周围结缔组织（外膜）。</li>
	<li>沿约1–1.5 cm长度将股动脉-静脉-神经复合体从周围组织中进一步游离（图3B）。</li>
	<li>如有必要，清除皮下/血管周围脂肪以获得更好的视野和操作空间。 
	注意：使用甲皮剪清除皮下或血管周围脂肪时应格外小心，以免损伤血管导致出血。若出现出血，应用小块纱布压迫出血部位，或使用止血钳止血。</li>
	<li>使用两把高精度45°角宽头镊子将股动脉与股静脉及神经分离（注意股静脉位于最内侧，股动脉位置相对更外侧）（图3C-F）。</li>
	<li>在尽可能远端的位置于股动脉上放置一根结扎线，并用弯钳夹住缝线，对股动脉施加轻柔的纵向牵引。</li>
	<li>在尽可能近端的位置于股动脉上放置第二根预打结（但暂不收紧）的缝线（图3G）。</li>
	<li>准备合适的导管（大鼠股动脉使用PE-50导管），将其尖端斜切（约45°），并用肝素化无菌生理盐水冲洗（使用5 mL注射器和23 G钝头套管）。确保导管内无气泡，以免影响动脉压和心率读数（图3H）。</li>
	<li>使用微型夹闭钳夹闭暴露段近端的股动脉，暂时阻断动脉血流（图3I）。</li>
	<li>将支撑用的微型金属刮匙置于股动脉下方，在游离段远端位置使用弯曲套管（23 G）穿刺动脉壁（图3J）。</li>
	<li>将导管斜面朝上，经穿刺口小心插入股动脉，并推进导管直至接近微型夹闭钳位置（图3K）。 
	注意：若首次尝试股动脉插管失败，可进行更近端的第二次尝试（从步骤2.8重新开始）。若发生动脉破裂或严重出血，应尽可能近端结扎或夹闭动脉以防止进一步失血。若失血量极少，可尝试对侧股动脉插管（从步骤2.1开始）。</li>
	<li>松开微型夹闭钳，观察是否有搏动性动脉血流入导管（图3L）。</li>
	<li>通过阻断导管出口防止血液进一步流入导管。</li>
	<li>收紧预先放置的近端结扎线，将导管固定于股动脉内的管腔位置（图3M）。</li>
	<li>反复冲洗并抽吸导管，确认其正确位于血管内。抽吸出的血液柱中应能清晰观察到动脉搏动。</li>
	<li>利用远端结扎线的线头将导管沿血管走向固定，防止移位，确保导管保持纵向位置（图3N）。</li>
	<li>此外，将导管在靠近动物体表处用胶带固定于手术台上，以加强固定，防止意外脱出。</li>
	<li>将充满生理盐水的导管连接至压力传感器，注意避免产生气泡。</li>
	<li>通过数字接口开始记录心率（HR）和平均动脉压（MAP）（图3O）。</li>
	<li>用一小块湿润纱布覆盖大腿内侧暴露区域（图3P）。</li>
	<li>计算高动力循环（HD）指数：HD = MAP/HR。 
	注意：与非门脉高压动物相比，晚期门脉高压（PHT）动物的HD指数升高。然而，术中HD指数升高也可能提示出血、低血容量或疼痛。若记录到的MAP值极低，但信号质量良好且导管内可见搏动性血流，应检查麻醉深度，必要时适当降低麻醉水平。切勿完全停止异氟烷麻醉，以免因麻醉深度不足而违反动物福利和良好科研规范。</li>
</ol>
3. 肠系膜上动脉血流量（SMABF）
<ol>
	<li>进行正中腹切口（图4A-C）
	<ol>
		<li>用组织镊在剑突下方5–6 cm处提起皮肤层，并用梅奥剪刀沿腹白线向上剪除一条细长的皮肤，直至剑突。</li>
		<li>在皮肤切口的中点，沿腹白线用组织镊提起肌层，使腹壁与内脏器官之间产生一定距离。</li>
		<li>用手术刀沿腹白线切开腹壁以打开腹膜腔。用梅森鲍姆剪刀沿腹白线继续扩大切口，同时用组织镊提起腹壁，切口长度与皮肤切口相同。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用湿润的棉签小心分离肠道，从盲肠开始，将其放置在切口旁一块浸有无菌生理盐水的大纱布敷料上（图4D-F）。</li>
	<li>将肠道包裹在纱布敷料中，并确保其持续用无菌生理盐水保持湿润（图4G）。</li>
	<li>定位并暴露肠系膜上动脉。</li>
	<li>使用两个自制的钝头“Schwabl”钩分离肠系膜上动脉：用第一把钩提起动脉，并尝试将第二把钩穿过相同的组织通道。沿约5 mm的长度暴露肠系膜上动脉，以确保能够在其周围放置流量探头（1 mm）（图4H-K）。 
	注意：如有需要，也可使用45°角宽头精密镊子提起动脉。“Schwabl”钩由30 G针头制成，针尖钝化后弯成钩状。若侧支动脉较丰富，使用“Schwabl”钩可能更安全，可避免在分离肠系膜上动脉时损伤侧支引起出血。若在分离肠系膜上动脉过程中发生出血，可在出血部位放置一小块纱布敷料，轻压1–2分钟。小量出血通常可迅速停止；务必定期用生理盐水湿润组织（见步骤1.12）。若肠系膜上动脉本身受损，则必须终止血流动力学评估。</li>
	<li>在超声流量探头的传感器上涂抹超声耦合剂，并将其套置于肠系膜动脉上，使其方向与肠系膜上动脉的自然走行一致（图4L-M）。</li>
	<li>闭合流量探头（1 mm），如有需要，可轻轻在多普勒传感器上额外添加超声耦合剂以提高信号质量。可使用装有超声耦合剂的20 mL注射器连接钝头针管（18 G）进行操作（图4N-O）。 
	注意：若流量探头未沿血管自然走行正确对齐，可能因张力导致血管收缩，从而产生湍流，影响血流测量的准确性。应尝试重新调整探头方向，使其与血管自然走行一致，并将其牢固固定在适当位置。</li>
	<li>测量肠系膜上动脉血流量（SMABF），并评估其脉动血流信号是否与股动脉记录的收缩峰同步。 
	注意：若记录的平均动脉压（MAP）值极低，但导管内信号良好且检测到脉动血流，应检查麻醉深度，必要时适当降低麻醉水平。切勿完全停止异氟烷麻醉，以免因麻醉过浅而违反动物福利及良好科研实践要求。</li>
	<li>找到流量探头（1 mm）的稳定位置，并固定探头电缆。在不再移动探头（1 mm）的情况下开始记录SMABF（图4P）。</li>
</ol>
4. 门静脉血流量
<ol>
	<li>在靠近肝门的肠系膜背侧定位并暴露门静脉（图5A）。</li>
	<li>使用高精度45°角宽头镊子轻轻分离门静脉周围组织：通过将镊子轻柔且反复地从门静脉下方穿过，形成一个组织隧道，从而游离门静脉（图5B）。 
	注意：若在准备门静脉过程中门周组织发生出血，可用棉签对出血部位施加轻柔压力1–2分钟；通常可止血。</li>
	<li>缓慢张开高精度45°角宽头镊子以扩大隧道，并沿门静脉暴露5–6 mm的长度，以便放置血管周围多普勒流量探头（2 mm）（图5C、D）。</li>
	<li>在超声流量探头的传感器上涂抹超声耦合剂，并将其沿门静脉自然走行方向贴附于门静脉上（图5E）。</li>
	<li>闭合流量探头（2 mm），并根据需要补充超声耦合剂，操作方法同前（步骤3.7）（图5F）。</li>
	<li>确保流量探头以非缩窄方式环绕门静脉（图5G）。 
	注意：若流量探头未沿血管自然走行方向良好对齐，张力可能导致血管收缩，从而引起湍流，降低血流测量的准确性。应尝试重新调整流量探头方向，使其与血管自然路径一致，然后将其充分固定在适当位置。</li>
	<li>找到流量探头（2 mm）的稳定位置并固定探头电缆，随后开始记录门静脉血流量（PVBF）（图5H）。 
	注意：若记录的平均动脉压（MAP）值过低，但信号良好且导管中检测到脉动性血流，应检查麻醉深度，并酌情降低麻醉水平。切勿完全停止异氟烷麻醉，以免因麻醉深度不足而违反动物福利及良好科研实践要求。</li>
</ol>
5. 门静脉压（PP）
<ol>
	<li>准备一根导管（大鼠肠系膜静脉使用 PE-50 导管），将其尖端斜切约 45°，并用无菌生理盐水冲洗（使用 5 mL 注射器和钝头 23 G 套管）。注意导管内不得有气泡，否则会阻碍门静脉压（PP）的读数（图 6A）。</li>
	<li>使用湿润手套操作肠道，并将其分散放置于手指上（图 6B）。</li>
	<li>优化小肠附近肠系膜血管床的视野（图 6C）。</li>
	<li>辨认通向门静脉的主要肠系膜静脉血管（回结肠静脉 — 肠系膜上静脉 — 门静脉）。</li>
	<li>寻找一个适合且易于插管的回结肠静脉分支连接处。</li>
	<li>首先将导管刺入肠系膜组织，穿透选定插管位置附近的肠系膜脏层腹膜。</li>
	<li>小心地将导管斜切尖端靠近回结肠静脉的分支连接处，直至在血管连接处产生轻微压痕（图 6D）。</li>
	<li>最后沿汇合血管的走向，以血管交叉角度穿破血管壁，进入静脉系统（图 6E）。 
	注意：若回结肠静脉插管时发生出血，可用拇指压住出血区域，并使用小块纱布压迫。应持续压迫 1–2 分钟以止血。之后可尝试在回结肠静脉更近端的分支进行插管。</li>
	<li>小心沿主静脉路径继续推进导管至门静脉，避免穿破静脉壁（图 6F）。 
	注意：导管应与套在门静脉主干上的血流探头保持足够距离，以避免血流信号产生伪影，并防止门静脉穿孔。</li>
	<li>将充满生理盐水的导管连接至压力传感器，连接过程中避免产生气泡。</li>
	<li>开始记录门静脉压（PP）。</li>
	<li>在稳定条件下同时记录所有血流动力学参数数分钟（图 6G、H）。可选操作：可使用组织胶固定门静脉导管，并将肠道复位回腹腔内。 
	注意：若记录到的平均动脉压（MAP）数值极低，但信号良好且导管内可检测到脉动血流，则应检查麻醉深度，必要时适当降低麻醉水平。切勿完全停止异氟烷麻醉，以免因麻醉深度不足而违反动物福利及良好科研实践要求。</li>
</ol>
6. 肝内血管阻力（IHVR）
<ol>
	<li>处死动物后，测量肝脏重量。计算肝内血管阻力（IHVR）：IHVR = PVBF/PP。将PVBF值按肝脏重量进行标准化。</li>
</ol>

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作者无任何利益冲突需要披露。

PP 是评估门静脉高压综合征的主要结局参数，反映基础肝硬化的严重程度。两者均涉及基质沉积（即，纤维化）以及窦状隙血管收缩（由于肝脏内血管收缩因子表达增加及对血管舒张因子反应性降低）导致肝内血管阻力（IHVR）升高。门静脉压力（PP）的重要性及其对慢性肝病的影响已在多项临床前研究中得到证实11,12,13,14 和临床研究15,16,17,18因此，在肝硬化患者中，门静脉压力（PP）是一个明确的结局指标，治疗指南推荐将其降低作为治疗目标19,<s...

门静脉高压（PHT）是指门静脉系统内病理性升高的血压，在肝硬化患者中可导致严重的并发症，如静脉曲张出血和腹水1。尽管肝前性（例如，门静脉血栓形成）和肝后性（例如，布加综合征）门静脉高压较为罕见，但由肝硬化引起的肝内型门静脉高压是门静脉高压最常见的病因2。
在肝硬化中，门静脉压力（PP）的升高主要是由于肝内血管阻力（IHVR）增高所致3在疾病晚期，由于心输出量增加以及全身和内脏血管阻力降低，门静脉血流量（PVBF）随之增加，从而加重门静脉高压（PHT），此即门静脉高压综合征的特征。4. 欧姆定律（&#916;P = Q * R 表明，肝内血管阻力（IHVR）和血流量与门静脉压力（PP）成正比5在患者中，直接测量门静脉压力（PP）具有较高风险，且不作为常规操作；因此，通常采用肝静脉压力梯度（HVPG）作为门静脉压力的间接评估指标。6,7肝静脉压力梯度（HVPG）通过将球囊导管置于肝静脉内，测量楔入肝静脉压（WHVP）与游离肝静脉压（FHVP）之差计算得出。8生理状态下HVPG范围为1–5 mmHg，而HVPG ≥10 mmHg则定义为临床显著性门静脉高压（CSPH），提示门静脉高压相关并发症（如静脉曲张出血、腹水和肝性脑病）的风险增加9尽管PP（即肝静脉压力梯度（HVPG）是评估门静脉高压（PHT）严重程度的最重要参数，但要全面理解PHT的不同潜在机制，还需获取有关PHT其他组成部分的信息，包括高动力循环的严重程度（心率、平均动脉压）、肠系膜/内脏动脉血流以及肝内血管阻力（IHVR）。
因此，与对人体门静脉压力（PP）的间接测量相比，本研究所介绍的大鼠门静脉压力直接测量方法具有优势，不仅能够直接测量PP，还可记录其他表征门静脉高压综合征的血流动力学参数。此外，PP的直接测量是反映肝纤维化程度（肝内血管阻力IHVR的主要决定因素）的一个极佳综合性指标，且克服了因肝组织取样误差所致纤维化定量方法的某些局限性。
最常用的肝硬化性门静脉高压（PHT）啮齿类动物模型包括手术性胆管结扎（BDL）、毒素诱导的肝损伤（i.e.，通过四氯化碳、硫代乙酰胺或二甲基亚硝胺给药）以及饮食诱导的代谢性肝病模型。门静脉前性（非肝硬化性）PHT可通过部分门静脉结扎（PPVL）诱导10。
小型啮齿动物非常适合本方法，包括小鼠、仓鼠、大鼠或兔子，且其维持成本相对较低。尽管所有血流动力学评估均可在小鼠中进行，但由于体型上的明显优势，使用大鼠或其他较大的啮齿动物可获得更准确且可重复性更高的结果。此外，在小鼠中获取相似血流动力学参数需要特定的微型仪器和设备。最后，大鼠的耐受性更强，相关发病率和死亡率较低，因此与小鼠相比，大鼠的实验脱落率可能更低。
该方法适用于评估针对肝病的特定治疗（即抗纤维化或抗炎药物）或影响血管张力和/或内皮生物学功能的新型药理学方法；因此，可能对门静脉高压（PHT）的血流动力学参数产生影响。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;仪器&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7 Pro 软件</td><td>ADInstruments，科罗拉多斯普林斯，科罗拉多州，美国</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;软件&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>ML870 PowerLab 8/30</td><td>ADInstruments，科罗拉多斯普林斯，科罗拉多州，美国</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;电子多通道记录仪&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>MLT0380/D</td><td>ADInstruments，科罗拉多斯普林斯，科罗拉多州，美国</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;压力传感器（x2：用于门静脉压和动脉压）&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>ML112 四通道桥式放大器</td><td>ADInstruments，科罗拉多斯普林斯，科罗拉多州，美国</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;桥式放大器&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>TS420</td><td>Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;流量计模块&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>生物研究设备 7025</td><td>UGO BASILE S.R.L.，意大利科梅里奥</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;呼吸机&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Vapor 2000</td><td>Dr&amp;auml;ger Medical AG &amp;amp; Co. KG, L&amp;uuml;贝克，德国</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;异氟烷蒸发器&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>用于Transonic系统的血管周围探头（大鼠）（肠系膜上动脉）</td><td>Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA</td><td>#MA1PRB</td><td>&lt;em&gt;超声血流探针（1 mm）&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>用于Transonic系统的血管周围探头（大鼠）（门静脉）</td><td>Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA</td><td>#MA2PSB</td><td>&lt;em&gt;超声血流探针（2 mm）&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>首次插管 &amp;以及用于清洁皮肤切口的第二把剪刀</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;梅奥剪刀 [x2]&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;梅岑鲍姆剪刀&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;角质剪&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>例如：Adson Brown 组织镊</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;组织镊&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;高精度 45&amp;deg; 宽头角度镊 [x2]&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;止血钳 [x4]&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>例如，Mikulicz 腹腔钳</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;弯钳&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如：Dieffenbach 止血钳</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;微型夹钳&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如，两端扁平的微型刮勺，宽度 4 mm，</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;微型金属解剖刀&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>用于插管时的经颊缝合</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;持针器&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;手术刀握持法&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>自制</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;插管操作台&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>血液，具有柔韧性，且具有适用于动脉插管和静脉血流的合适直径</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;钝头钢丝&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>20G 改良动脉导管，带 Flowstich</td><td>Becton Dickinson，Farady路，斯温顿，英国</td><td>#682245</td><td>&lt;em&gt;动脉导管&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;加热垫&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;直肠温度探针&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;生理盐水加热器&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;喉镜（适用于动物体型，例如大鼠）&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;吸入麻醉诱导箱&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;天平（可测量毫克）&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;毛发剪&lt;/em&gt;</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&amp;nbsp;-</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;名称 &lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;公司 &lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;目录编号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;评论&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;耗材 &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>例如，改良的 BD Venflon Pro Safety 14GA</td><td>Becton Dickinson Infusion Therapy, AB, SE251 06 Helsingborg, Sweden</td><td>#393230</td><td>&lt;em&gt;外周静脉导管（14G）&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>细孔聚乙烯导管，内径 0.58 mm，外径 0.96 mm，Portex</td><td>Smiths Medical International Ltd., Kent, 英国</td><td>#800/100/200</td><td>&lt;em&gt;导管管（PE-50）&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如 Omnifix-F Solo</td><td>B. Braun Melsungen AG，德国美尔森</td><td>#9161406V</td><td>&lt;em&gt;1 mL 注射器&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如：Injekt Solo</td><td>B. Braun Melsungen AG，德国美尔森</td><td>#4606051V</td><td>&lt;em&gt;5 mL 注射器&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如 Injekt Solo</td><td>B. Braun Melsungen AG，德国美尔森</td><td>#4606205V</td><td>&lt;em&gt;20 mL 注射器&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如 BD Microlance 3，18G - 1 1/2&quot;</td><td>Becton Dickinson S.A.，Fraga，西班牙</td><td>#304622</td><td>&lt;em&gt;导管（18G）&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如 BD Microlance 3，23G - 1&quot;</td><td>Becton Dickinson S.A.，Fraga，西班牙</td><td>#300800</td><td>&lt;em&gt;套管（23G）&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如 BD Microlance 3，30G - 1/2&quot;</td><td>Becton Dickinson S.A.，Fraga，西班牙</td><td>#304000</td><td>&lt;em&gt;导管（30G） &lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如：Leukoplast S</td><td>BSN medical GmbH，汉堡&amp;nbsp; 德国</td><td>#47619-00</td><td>&lt;em&gt;胶带&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如：Gazin RK Mullkompressen（18×8 cm）</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher，奥地利维也纳</td><td>#10972</td><td>&lt;em&gt;小号纱布垫&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如：Gazin RK Mullkompressen (5x5cm)</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher，奥地利维也纳</td><td>#10961</td><td>&lt;em&gt;大号纱布垫&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>丝线编织黑色，USP 4/0，EP 1.5</td><td>SMI AG，比利时圣维特</td><td>#2021-04</td><td>&lt;em&gt;缝合线（丝线 4/0，EP 1.5）&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如：Mersilk，2-0（3 Ph. Eur.），PS-1 Prime</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, 德国</td><td>#EH7552</td><td>&lt;em&gt;经颊缝合&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如：棉签（2.2 mm，15 cm）</td><td>Paul Hartmann AG，德国海登海姆</td><td>#967936</td><td>&lt;em&gt;棉签&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如：Vue 超声耦合剂</td><td>Optimum Medical Limited，英国</td><td>#1157</td><td>&lt;em&gt;超声耦合剂&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如 Glubran 2</td><td>Gem srl，意大利维亚雷焦</td><td>#G-NB2-50</td><td>&lt;em&gt;组织胶&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>例如，手术刀刀片编号10——碳钢</td><td>Swann-Morton，英格兰，B.S.</td><td>#202</td><td>&lt;em&gt;手术刀&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>肝素，5000 i.E./mL（钠盐肝素）</td><td>Medicamentum Pharma GmbH, Allerheiligen im M&amp;uuml;奥地利，rztal</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;肝素&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>氟烷</td><td>Aesica Queenborough Ltd.，英国昆伯勒</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;异氟烷&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>OeloVital (5g)</td><td>Fresenius Kabi Austira Gmbh，奥地利格拉茨</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;眼用凝胶&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Ketasol</td><td>aniMedica GmbH, 塞登-贝&amp;ouml;德国 sensell</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;氯胺酮&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>隆朋</td><td>Bayer Austria Ges.m.b.H.，奥地利维也纳</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;赛拉嗪&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Xylocain 10% 喷雾剂</td><td>阿斯利康 &amp;Ouml;奥地利维也纳的奥地利有限公司</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;利多卡因喷雾泵&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Dipidolor</td><td>Jansen-Cilag Pharma GmbH，奥地利维也纳</td><td>&amp;nbsp;-</td><td>&lt;em&gt;哌替啶&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>0.9% 氯化钠 Fresenius，1L</td><td>Fresenius Kabi Austira GmbH，奥地利格拉茨</td><td>#13LIP132</td><td>&lt;em&gt;生理盐水溶液&lt;/em&gt;</td></tr></tbody></table>

肝硬化大鼠门静脉高压综合征的侵入性血流动力学表征

Invasive Hemodynamic Characterization of the Portal-hypertensive Syndrome in Cirrhotic Rats

本研究详细描述了一种用于表征门静脉高压综合征的肝硬化大鼠侵入性血流动力学测量方案。由肝硬化引起的门静脉高压（PHT）是导致肝病患者出现最严重并发症的主要原因。门静脉高压综合征的完整特征表现为：由于肝内血管阻力（IHVR）增加而导致门静脉压力（PP）升高、高动力循环以及内脏血流量增加。进行性内脏动脉血管扩张、心输出量增加、心率（HR）升高但动脉压降低，是门静脉高压综合征的典型表现。
目前，一些新型疗法正在研发中，旨在通过靶向肝内血管阻力（IHVR）或增加内脏血流量来降低门静脉压（PP），但这可能对全身血流动力学产生副作用。因此，为了对治疗门静脉高压症（PHT）的新疗法进行临床前疗效评估，有必要对门静脉、内脏及全身血流动力学参数进行详细表征，包括测量门静脉压（PP）、门静脉血流量（PVBF）、肠系膜动脉血流量、平均动脉压（MAP）和心率（HR）。我们的视频文章为读者提供了在肝硬化大鼠中实施有创血流动力学测量的系统化操作方案。具体而言，我们描述了经由回结肠静脉进行股动脉和门静脉插管的技术，以及利用血管周围多普勒超声流量探头测量门静脉和内脏血流量的方法。文中展示了不同PHT大鼠模型的代表性实验结果。

根据动物模型和肝病严重程度的不同，门静脉高压（PHT）的程度以及门静脉高压综合征的严重性也有所不同（图7）。
BDL 模型因胆汁淤积导致胆汁性肝硬化。因此，PP 随时间推移而升高，并出现高动力循环状态，表现为 HR 增加和 MAP 降低。在肝硬化动物中，SMABF、PVBF 和 IHVR 也随着肝脏及血流动力学改变而相应升高（图 7A-F）。
相比之下，门静脉前性门静脉高压（PPVL）引起的是肝前性、非肝硬化性门静脉高压（PHT），其特征是门静脉压力（PP）立即升高，并伴随全身血流动力学的相应变化。图7G-I然而，...

本文介绍了一种详细的实验方案，用于测量大鼠门静脉压力、内脏血流和全身血流动力学参数，以表征门静脉高压综合征。

这是一份详细的实验方案，描述了在肝硬化大鼠中进行有创血流动力学测量以表征门静脉高压综合征的方法。由肝硬化引起的门静脉高压（PHT）是肝病患者出现最严重并发症的主要原因。门静脉高压综合征的完整特征包括由于肝内血管阻力（IHVR）增加导致的门静脉压力（PP）升高、高动力循环以及内脏血流量增加。进行性内脏动脉血管扩张、心输出量增加、心率（HR）升高但动脉压降低，是门静脉高压综合征的典型表现。目前正开发一些新型疗法，旨在通过靶向降低IHVR或减少内脏血流量来降低PP，但可能伴随对全身血流动力学的不良影响。因此，在临床前评估新型PHT治疗手段的有效性时，需要对门静脉、内脏及全身血流动力学参数进行详细表征，包括PP、门静脉血流量（PVBF）、肠系膜动脉血流量、平均动脉压（MAP）和HR的测量。本视频文章为读者提供了在肝硬化大鼠中实施有创血流动力学测量的系统化操作流程。具体而言，我们描述了经股动脉和经回结肠静脉穿刺插管至门静脉的操作，以及利用血管周围多普勒超声流量探头测量门静脉和内脏血流量的方法。文中展示了不同PHT大鼠模型的代表性实验结果。

该方法有助于解答晚期肝纤维化和门静脉高压领域的关键问题。它为评估针对门静脉高压综合征大鼠的血管张力、纤维化生成或内皮功能障碍的药理学干预手段提供了独特的机会。该技术的主要优势包括可直接测量门静脉压力，并能够获取其他血流动力学参数，而相比之下，临床患者中常通过肝静脉压力梯度（HVPG）进行门静脉压力的间接测量。首先使用短效异氟烷麻醉对大鼠进行镇静，可选择性地辅以其他麻醉剂。迅速进行气管插管，使用合适的自制气管导管。用两根手指夹住舌头并轻轻牵拉。然后，用浸有利多卡因喷雾的棉签仔细湿润喉部区域。接着，轻柔地将气管插管插入声门之间并进入气管。通过穿过脸颊和气管插管上粘贴胶带环的经颊缝线固定气管插管环。给予镇痛剂和注射麻醉剂后，涂抹眼膏。随后，剃除腹部区域及两侧大腿内侧的体毛，并对皮肤进行消毒。在任何干预或手术操作前，通过眼睑闭合反射和夹趾试验评估麻醉深度。使用组织镊提起剃毛后的大腿一侧皮肤，位置位于股动脉预计走行处上方。使用梅奥剪刀去除约两厘米的皮肤区域。然后，使用止血钳钝性分离动脉-静脉-神经束与周围结缔组织。为了更清晰地暴露动脉-静脉-神经复合体，可使用角膜剪去除部分脂肪组织。接着，使用两把高精度、45度角、宽头镊子将股动脉与股静脉及神经分离。股静脉位于最内侧，而股动脉位置更偏外侧。尽可能远端位置在股动脉上结扎，使用弯钳夹住缝线，对股动脉施加轻柔的纵向牵引。然后，在股动脉上尽可能近端位置放置第二个预先松松打结的缝线。使用微型钳夹在暴露段的近端压迫股动脉，暂时阻断动脉血流。然后，在股动脉下方放置一个支撑用的微型金属刮勺，使用弯曲的23号套管针穿刺闭塞段远端的动脉前壁。将导管斜面向上，通过穿刺孔仔细插入股动脉内。推进导管，直至其到达微型夹钳处。通过结扎预先准备好的股动脉近端及其插入的导管，将导管固定在其管腔内位置。然后打开微型夹，检查是否有搏动性动脉血流入导管。利用远端结扎线的两端将导管沿血管固定，以防止移位，并确保导管处于纵向位置。使用数字界面开始记录心率和平均动脉压。首先进行正中腹切口。先用组织镊在剑突下方五到六厘米处提起皮肤层，并使用梅奥剪刀沿腹白线上方剪除一条细长的皮肤，直至剑突。然后，使用组织镊在腹白线中心提起肌层，以增加腹壁与内脏器官之间的距离。用手术刀在腹白线处切开腹壁，打开腹腔。沿腹白线切开，切口长度与皮肤层切口相同。接下来，使用湿润的棉签小心地分离肠管。从盲肠开始，将其放置在切口旁浸有无菌生理盐水的大块纱布垫上。用纱布包裹肠管，并确保其用无菌生理盐水保持湿润。此时应可见肝硬化肝脏。随后，使用两个自制的钝性施瓦布钩分离肠系膜上动脉，用第一把钩提起动脉，并将第二把钩穿过组织隧道。沿约五毫米的长度暴露肠系膜上动脉，以确保血流探头可顺利放置于动脉周围。接下来，将超声耦合剂涂抹于超声血流探头传感器上。将传感器固定于肠系膜动脉，使其与肠系膜上动脉的自然走向对齐。测量肠系膜上动脉血流量，并评估脉动血流信号与股动脉记录中的收缩期峰值是否一致。为测量门静脉血流，首先定位并暴露靠近肝门处肠系膜背侧的门静脉。然后使用高精度、45度角、宽头镊子轻轻分离门静脉周围的组织。扩大组织通道，并暴露长约5至6毫米的门静脉，以便放置血管周围血流探头。将超声耦合剂涂抹于超声血流探头传感器上，将其沿门静脉自然走行方向贴附于门静脉。然后闭合血流探头，开始记录门静脉血流量。测量门静脉压力时，用生理盐水润湿手套，并用手指将肠管展开。优化靠近小肠的肠系膜血管床的视野。通过穿刺选定用于插管的血管分支附近的肠系膜脏层腹膜，将导管插入肠系膜组织。然后，小心地将导管的斜面尖端向回结肠静脉的分支处推进，直至观察到血管分支处出现轻微的压痕。最后，沿汇合血管的走行方向穿刺血管壁，在血管交叉角度处穿刺静脉系统。在处死动物前，于稳定条件下连续记录数分钟内的所有血流动力学参数。胆管结扎模型因胆汁淤积导致胆汁性肝硬化。因此，门静脉压力随时间逐渐升高，并出现高动力循环状态，表现为心率加快和平均动脉压下降。在肝硬化动物中，肝内血管阻力和肠系膜上动脉血流量增加，随后门静脉血流量随之上升，其程度取决于门体侧支循环的形成情况。相比之下，部分门静脉结扎可导致肝前性、非肝硬化性门静脉高压，其特征是门静脉压力立即升高。然而，在病程发展过程中，门体侧支循环会逐渐形成，可能导致门静脉压力降低。此外，我们观察到平均动脉压和心率出现相应的变化。对于健康的假手术动物，其血流动力学参数保持在生理水平，且随时间推移无明显变化。健康SO动物的门静脉压最高为五到六毫米汞柱。一旦掌握，这些技术可在40至50分钟内完成，具体时间取决于动物模型、是否需要故障排除以及术前准备的充分程度。在进行手术操作时，必须密切监测动物的体温、心率和动脉压，以评估麻醉水平。观看本视频后，您应能够充分掌握如何安全地进行股动脉和门静脉插管，以及如何将超声血流探头连接至肠系膜血管，从而确保获得准确且可重复的实验结果。

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