雄激素依赖性和去势抗性前列腺癌的荧光自体小鼠模型

本协议的目的是证明前列腺癌细胞内注射, 随后阉割。在临床相关的肿瘤微环境和免疫宿主的背景下, 应用雄激素依赖性和抗去势前列腺癌的原位前模型是研究该病的关键。

该程序的总体目标是进行小鼠癌细胞的前列腺内注射，以诱导同基因原位肿瘤的形成，该肿瘤可以模拟雄激素依赖性和去势抵抗性前列腺癌。这种方法可以帮助回答前列腺癌领域的关键问题，例如是什么驱动了前列腺癌的发展以及哪些治疗方法最能消除这些肿瘤。该技术的主要优点是原位肿瘤在遗传上更复杂，它们在具有临床代表性的肿瘤微环境中发育，并且可以在注射前进行基因改造。

这项技术的影响延伸到人类前列腺癌的治疗，因为原位肿瘤对治疗的反应与在人类患者中观察到的方式相似。在确认对脚趾捏没有反应后，在老鼠的眼睛上涂抹药膏并剃掉动物腹部的所有皮毛。使用无菌不粘附垫进行三轮手术擦洗，然后使用无菌酒精湿巾对裸露的皮肤进行消毒。

当皮肤干燥时，将鼠标仰卧位放在加热垫上的干净表面上，直接位于干净的手术显微镜目标下方。并用无菌窗帘盖住动物，在腹部切一个小孔。沿着阴茎和包皮腺上方的腹部中线，在外皮和腹部内侧肌肉组织上做一厘米的切口。

找到一个双侧精囊和附着的前列腺前叶，它们通常位于膀胱的后方、外侧和略上方 请助手将 MIC-CAP 基质胶癌细胞溶液与轻柔移液混合，并将 30 微升细胞缓慢吸入连接到 50 微升注射器的 28 号针头中。然后，使用 Graefe 组织镊子，轻轻抬起一个精囊的尖端，在不刺穿囊泡的情况下在组织上产生张力，并小心地插入平行于前前列腺叶长轴的针头斜面。缓慢地将整个体积的细胞注入肺叶，然后缓慢缩回针头以防止泄漏。

成功的注射将通过前前列腺叶的充血来证明。小心而稳定地将精囊和注射的前列腺叶保持在小鼠外约 30 秒，以使 Matrigel 在叶内部分凝固。使用无菌聚酯尖端涂抹器收集任何渗漏到腹部的细胞溶液，以防止非原位肿瘤发展。

准确的修复体内注射对于非原位肿瘤的发展至关重要。格外小心避免刺穿精囊，缓慢注射癌细胞悬液并收集任何细胞泄漏将增加该程序的成功率。现在，轻轻地将精囊和注射的脑叶放回腹部，不要对脑叶施加压力，并更换任何外化组织。

使用 5-0 vicryl 可吸收反向切割针缝合线，用连续缝合闭合内腹部肌肉组织，然后使用 4-0 尼龙单丝不可吸收反向切割针缝合线用间断缝合闭合外腹部皮肤。然后，进行术后镇痛，将鼠标放在没有床上用品的笼子里，中间放在加热垫上，并进行监测，直到完全恢复。稳定转染萤火虫荧光素酶和 mCherry 表达的 Myc-CaP 细胞可对前列腺肿瘤进行无创体内生物发光和荧光。

在这里，显示了前列腺内注射后第 30 天从腹部解剖的代表性肿瘤。通过适当的技术，可以以相对较小的标准误差记录肿瘤体积和重量，尽管预计小肿瘤块和大肿瘤块之间存在一些差异。前列腺内注射的小鼠癌细胞也可以通过免疫组织化学分析是否存在肿瘤浸润 CD3 阳性 T 细胞或其他感兴趣的免疫细胞。

此外，该模型提供了一个客观的生存终点，因为较大的原发性肿瘤肿块会导致出血性腹水和/或行走梳理和/或竖毛减少。前列腺内注射后 3 天去势导致肿瘤剧烈消退，随后在大约 30 天后最终肿瘤复发，代表去势抵抗性前列腺癌。去势抵抗性前列腺癌肿瘤的解剖和组织学分析显示，由于肿瘤维持较高的雄激素受体水平并且神经内分泌标志物突触素呈阴性，因此没有神经内分泌分化。

一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在 20 到 30 分钟内完成。在尝试此程序时，重要的是要记住使用术前和术后镇痛药，并使用无菌技术和手术助手的帮助下进行所有手术。在此程序之后，可以执行其他方法，如免疫组化、流式细胞术以及肿瘤体积和重量以及动物存活的评估，以回答有关免疫疗法和其他实验性 therapeutas 反应的其他问题。

看完这个视频，你应该对如何将前列腺癌细胞注射到小鼠的前前列腺叶进行最终的手术去势和肿瘤消退复发分析有一个很好的了解。不要忘记，与癌细胞一起工作可能非常危险，并且在执行此程序时应始终采取预防措施，例如佩戴正确的个人防护设备。