利用果蝇作为无脊椎动物毒性试验模型系统的实验协议

该协议可用于了解毒物对不同发展阶段健康状况的影响，并检查几代人接触污染物的影响。演示该程序的是我研究实验室的两名本科生，他们是科罗拉多州立大学普韦布洛分校建立积极 STEM 参与的社区的一部分，Hugh Long 和 Tyler Harvey。要开始处理感兴趣的环境污染物，首先要确定化合物果蝇的 50% 致死剂量。

使用已建立的方法创建剂量反应曲线。接下来，用所需浓度的化合物制备生长培养基。例如，在制备速溶培养基时，将化合物加入水等分试样中。

同时，制备不含添加化合物的对照培养基。为了建立收集实验动物的培养物，使用标准方法将生殖成虫转移到生长培养基中。标准化每瓶苍蝇的数量，避免成虫过度拥挤。

然后，在标准条件下将果蝇孵育 1 到 4 天。孵化后，丢弃成虫，留下受精卵成熟以供检测。然后，将样品瓶放回培养箱中。

可以在任何发展阶段设置曝光。此外，根据实验目标，可以在任何发育阶段收集实验对象。每天检查发育中的动物，以确定感兴趣阶段的第一个迹象，例如徘徊的第三龄幼虫。

为了测试暴露对游荡的第三龄幼虫阶段的影响，请在开灯后一小时内收集幼虫，当它们开始从食物基质中出来时。接下来，倒出水，将幼虫移到实验室组织中，轻轻去除多余的水。干燥后，将幼虫转移到适当的试管中进行收集。

为了测试暴露对成虫的影响，收集新封闭的成虫;二氧化碳麻醉是可以的。请务必在苍蝇繁殖成熟并开始交配之前收集它们。将果蝇分成性别特异性组，并将它们转移到装有对照或实验污染培养基的小瓶中，以匹配预先存在的暴露。

之后，在测量成蝇体内的污染物前 24 小时，将对照和受污染培养基中的成虫转移到装有对照培养基的小瓶中，以便成虫清除体内多余的培养基。梳理 24 小时后，可以使用适当的方法对果蝇进行测试。例如，可以使用交配选择测定来测试行为变化。

使用这些方法，研究污染物暴露的跨代影响非常容易。只需在对照培养基上设置暴露成虫之间的杂交，并研究 Fnot 暴露对其后代的影响。该方案用于评估铅在同一代后代中的积累、消除和封存。

果蝇在不同剂量、发育阶段和进化规模下很容易积累铅。使用多代暴露，发现父母暴露不会传递给第一代成年后代。因此，使用该协议，可以在不同的进化规模上测试适应性反应，以及暴露的跨代影响。

接下来，将果蝇从卵期饲养到成年，用对照或含铅培养基饲养，净化 24 小时后进行测试，测试配偶偏好。雌性在含铅培养基上饲养，优先与铅暴露的雄配，而不是对照暴露的雄性。另一方面，男性没有表现出相同的偏见。

看完这个视频，你应该对如何饲养和收集果蝇来回答各种问题和毒理学有一个很好的了解。一旦掌握，如果执行得当，该协议可以在一到两个月内完成。在尝试此程序时，重要的是要记住轻柔地处理苍蝇，以免引起不必要的压力。

按照此程序，可以测试其他问题，如行为、遗传和神经问题。不要忘记，与污染物打交道可能非常危险，在执行此程序时应始终采取预防措施，例如佩戴个人防护装备和在头罩中准备污染物。