Name: 影像引导切除治疗干细胞种子支架的胶质母细胞瘤和颅内植入术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: 学习影像引导切除胶质母细胞瘤并植入间充质干细胞种子支架的技术。该方法利用小鼠模型研究术后细胞治疗与支架递送系统对神经肿瘤学疗效的影响，为临床脑癌干预提供重要参考。

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作者感谢 Kathryn Pietrosimone 博士在编辑方面的贡献。PLA 支架由北卡罗来纳州立大学 Elizabeth Loboa 博士实验室制备。本研究得到北卡罗来纳大学莱恩伯格综合癌症中心的大学癌症研究基金以及北卡罗来纳大学转化与临床科学研究所（KL2TR001109，UL1TR001111）的支持。

本文所述所有方法均已获得北卡罗来纳大学教堂山分校机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准。
注意：本实验在已进行开颅手术的小鼠上进行，为 Mostany 和 Portera-Cailliau19 所述方案的改良版本，其中手术切除的骨组织被弃去，使脑组织暴露，便于建立并最终切除胶质母细胞瘤（GBM）肿瘤。开颅后，通过立体定位植入法建立肿瘤，具体方法如 Ozawa 和 James20 所述。我们以以下立体定位坐标（以 bregma 为参考点，单位为 mm）植入 1 × 105 个 U87 mCh-Fl 细胞：(2.5, 0, -0.5)。
1. 细胞培养与支架制备
注意：支架应在小鼠植入前 48 小时制备。以下体积均为单个支架的用量。根据需要制备额外支架时，请相应增加试剂用量。
<ol>
	<li>将PLA支架切割成与切除腔大小相近的片状（约2 mm × 2 mm）。可使用剪刀手动切割，或使用打孔器以保证重复性。</li>
	<li>将支架浸入70%乙醇中15分钟进行灭菌，随后浸入磷酸盐缓冲液（PBS）中。在准备细胞接种期间，将支架置于含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的杜氏改良伊格尔培养基（DMEM）中。</li>
	<li>使用0.05%胰蛋白酶（T75培养瓶加3–5 mL）消化贴壁的MSCs，37 °C孵育5分钟。确认细胞完全脱落之后，向培养瓶中加入7–10 mL DMEM以中和胰蛋白酶活性。</li>
	<li>将培养瓶内容物转移至15 mL离心管中，用血细胞计数板计数细胞。每块支架接种前，取5 × 105个MSCs，以100 × g离心5分钟形成细胞沉淀。</li>
	<li>吸除上清液，将每5 × 105个细胞重悬于5 µL DMEM中。</li>
	<li>通过轻拍使支架干燥，为接种做准备。
	<ol>
		<li>用镊子将支架从DMEM中取出，暂时放置于6孔板盖上。提起支架，使多余的DMEM液滴留在盖上。</li>
		<li>将支架再次放置于盖上新的干燥位置。重复此操作3–5次，然后将部分干燥的支架转移至新的6孔板中用于接种。每块支架均需重复此步骤。 
		注意：部分干燥的支架可获得最佳的细胞接种效果。若支架过湿，细胞会从支架表面滑落并黏附于孔板底部；若支架过干，细胞悬液无法均匀铺展，导致初始细胞分布不均。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用移液器轻轻吹打干细胞管，使细胞悬液混匀，以防部分细胞沉降至管底。</li>
	<li>缓慢将2.5 µL新鲜混匀的MSC悬液直接滴加在支架表面，在支架上方形成一小滴液滴。</li>
	<li>向每孔边缘加入300 µL DMEM，以防止细胞液滴过快蒸发。37 °C孵育30分钟，使细胞充分黏附于支架上。</li>
	<li>用镊子轻轻将孔板中的支架翻转。在支架另一面接种2.5 µL新鲜混匀的MSC悬液（每块支架总接种量为5 × 105个细胞）。37 °C孵育30分钟，使细胞黏附。</li>
	<li>向每孔加入2 mL DMEM完全覆盖支架。轻轻抬起支架，使培养基能够流至其下方。在植入手术前，于37 °C继续孵育48小时。</li>
	<li>24小时后检查支架，若观察到过度蒸发或因pH失衡导致培养基变色，应及时补充或更换培养基。</li>
</ol>
2. 荧光引导切除与支架植入
注意：手术开始前对所有工具进行灭菌。按照你方规定的方案给予预防性镇痛处理。&#160;机构动物护理和使用委员会（IACUC）方案
<ol>
	<li>将立体定位仪放置在荧光解剖显微镜的载物台上。</li>
	<li>在诱导室中使用吸入式异氟烷对小鼠进行麻醉。麻醉后，通过异氟烷鼻罩适配器持续供给吸入麻醉气体，将小鼠固定于立体定位仪中。使用加热垫和/或体温探头维持小鼠体温。 
	注意：4-5% 异氟烷适用于诱导麻醉，2-3% 适用于维持麻醉，但需根据每只小鼠的具体情况调整并密切监测。</li>
	<li>在眼睛上涂抹眼用软膏，防止角膜干燥。使用三轮酒精棉片和三轮聚维酮碘棉片交替擦拭消毒头皮切口部位。</li>
	<li>对每条肢体进行足趾夹捏反射测试，确认无反应以确保麻醉充分。维持稳定的呼吸频率，约为 55–65 次/分钟。</li>
	<li>使用镊子夹起并轻轻提起头皮，用手术剪沿中线做前后方向的直线切口。用 PBS 冲洗切口部位，并以棉签头以环形刷拭动作清除皮下脂肪。调整皮肤位置，使先前建立的颅窗完全暴露可见。</li>
	<li>使用 18 号针头在颅窗边界内侧轻轻穿刺硬脑膜。重复操作，直至切口完整沿颅窗内缘走行。</li>
	<li>用精细镊子将硬脑膜剥离移除，暴露出下方的脑实质和肿瘤组织。</li>
	<li>关闭室内光源，打开体视显微镜的荧光模式，定位 U87 mCh-Fl 肿瘤。准备切除时，将 1–200 µL 移液器吸头插入真空泵管路末端。</li>
	<li>开启真空泵，通过轻柔抽吸荧光组织进行肿瘤切除，直至无荧光信号残留。关闭真空泵，丢弃移液器吸头。关闭荧光模式，恢复室内照明。 
	注意：如需控制出血，可用冷 PBS 冲洗，并以棉签头持续施加压力。在出血较严重的情况下，可暂时用止血剂&#160;填塞切除腔，但必须在止血后将其完全清除，并再次用 PBS 冲洗。</li>
	<li>在植入前立即缓慢将接种了间充质干细胞（MSC）的 PLA 支架浸入 PBS 中，以去除不需要的培养基及相关成分。将支架植入肿瘤切除腔内。如需要，可加入 1 µL 纤维蛋白原（67–106 mg/mL），随后加入 1 µL 凝血酶（400–625 U/mL），以固定支架位置。</li>
	<li>由于硬脑膜已去除，且颅窗的骨瓣已被丢弃，可直接缝合皮肤并涂抹外科粘合胶封闭伤口。将动物脱离吸入麻醉，置于加热表面使其恢复。</li>
	<li>待小鼠能够自主活动后，将其放回笼中。按照 IACUC 批准的方案给予镇痛处理。对每只小鼠重复上述操作。</li>
</ol>
3. 术后影像学检查
<ol>
	<li>使用28-G胰岛素注射器，按150 mg/kg剂量经腹腔注射D-荧光素酶底物（D-luciferin）至小鼠体内。</li>
	<li>等待10分钟，使荧光素在体内充分循环，并与脑内表达荧光素酶的癌细胞发生反应，以达到最强信号表达。</li>
	<li>在异氟烷麻醉下（如前所述），将小鼠置于生物发光成像（BLI）系统中进行成像，以可视化肿瘤。根据肿瘤大小，按需调整曝光时间（数秒至数分钟）。</li>
	<li>根据需要重复成像操作，以确定肿瘤生长动力学。持续监测动物健康状况。 
	注意：治疗性间充质干细胞（MSCs）将持续表达TRAIL，从而杀伤癌细胞并抑制肿瘤整体生长。每2至5天进行一次成像可满足此目的。</li>
	<li>当达到IACUC方案中预先规定的实验终点时，通过心脏灌注法处死小鼠，并采集组织用于后续分析。</li>
</ol>

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<li>Bagó, J., Pegna, G., Okolie, O., Mohiti-Asli, M., Loboa, E., Hingtgen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospun+nanofibrous+scaffolds+increase+the+efficacy+of+stem+cell-mediated+therapy+of+surgically+resected+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Electrospun nanofibrous scaffolds increase the efficacy of stem cell-mediated therapy of surgically resected glioblastoma.</a> Biomaterials. 90, 116-125 (2016).</li>
<li>Loebinger, M., Eddaoudi, A., Davies, D., Janes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+Stem+Cell+Delivery+of+TRAIL+Can+Eliminate+Metastatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal Stem Cell Delivery of TRAIL Can Eliminate Metastatic Cancer.</a> Cancer Research. 69 (10), 4134-4142 (2009).</li>
<li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Craniotomy+Surgery+Procedure+for+Chronic+Brain+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging.</a> J. Vis. Exp. (12), e680(2008).</li>
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</ol>

Sheets、Bagó 和 Hingtgen 博士在 Falcon Therapeutics 拥有股权，该公司已从北卡罗来纳大学教堂山分校获得了干细胞与支架技术部分权益的授权。

只要注意以下要点以最大限度地提高精确性并避免耗时的错误，通常每只小鼠的手术可在30分钟内完成。首先，在开始手术前，确保小鼠在立体定位仪中位置正确。头部的不必要移动会影响开颅、肿瘤植入位置以及肿瘤切除程度的手术精度。在切除肿瘤前，应完全去除覆盖在肿瘤上的硬脑膜部分。坚韧的纤维性硬脑膜在抽吸过程中脱水后会变硬。如果未完全去除，硬化后的硬脑膜可能限制吸引器尖端的移动性，从而妨碍肿瘤的完全切除。在切除过程中，血管常会随肿瘤被意外切除，导致明显出血。过多的血液会减弱荧光信号强度并遮蔽肿瘤。在切除过程中保持肿瘤的可见性，有助于确保切除范围恰当，并减少健康组织的损伤和过度出血。对于较小的出血，可用冷生理盐水冲洗受损血管，并用棉签轻轻加压止血&#160;。如果出血持续，可将止血剂填塞入腔内2-3分钟，然后用镊子取出。在植入细胞接种的支架前，需用PBS冲洗以恢复生理pH值。当肿瘤切除完成&#160;且出血停止后，最后一个常见问题是皮肤切口闭合不充分。这通常是由于残留过多液体（PBS或血液）导致手术胶水无法有效粘合切开的皮肤。为避免此问题，可在涂抹胶水前用棉签轻轻擦干皮肤。此外，若在使用胶水前未先用镊子将伤口缝隙夹闭固定，还可能意外将皮肤直接粘附到颅骨上。...

胶质母细胞瘤（GBM）是成人中最常见的原发性脑癌，其中位生存期仅有12-15个月，预后极差1,2,3,4,5。自2005年确立目前的临床标准治疗方案以来，患者生存率未见显著改善，该方案为最大限度地手术切除肿瘤，随后进行放疗，并联合使用替莫唑胺化疗及辅助化疗6,7。尽管该治疗方案可暂时缓解患者症状，但标准治疗后几乎不可避免地出现肿瘤复发，其原因是侵袭性癌灶常超出手术切除范围，且血脑屏障（BBB）限制了全身性治疗药物的渗透。因此，迫切需要开发能够靶向侵袭性肿瘤病灶并克服血脑屏障限制的新策略，以有效应对这种侵袭性强且致残率高的疾病。
人源间充质干细胞（MSCs）因其固有的肿瘤趋向性，有望成为胶质母细胞瘤（GBM）的药物递送载体8,9。MSCs 表达多种受体，可趋向肿瘤分泌的可溶性因子迁移，这些因子包括基质细胞衍生因子1α（SDF-1α）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）等10,11,12,13。通过基因工程改造 MSCs 使其表达并分泌细胞毒性药物，可将其用作靶向肿瘤的药物递送载体。经改造的 MSCs 能够迁移至侵袭性肿瘤病灶，并递送治疗性蛋白。该策略已在多种GBM临床前模型中证明具有可行性9,14。然而，尽管手术切除在临床上具有重要意义，但绝大多数现有模型并未纳入该环节。近期采用新型切除模型的研究发现，手术切除肿瘤会降低直接注射至手术腔内干细胞的存留时间15。细胞活力的丧失导致治疗效果下降，可能原因是递送至侵袭性肿瘤病灶的药物剂量和作用时间减少。
为了提高干细胞的存活率和药物递送效率，可在植入前将间充质干细胞（MSCs）接种于支架材料上。在本方案中，采用生物相容性好且可生物降解的静电纺聚乳酸（PLA）纳米纤维作为MSCs的支架。PLA支架在植入后能够弯曲并贴合切除腔的形状，从而最大化治疗覆盖范围，并缩短MSCs到达肿瘤细胞所需迁移的距离。MSCs在植入过程中保留在支架上，植入后则从支架上迁移并向肿瘤细胞移动16,17。携带细胞毒性药物的MSCs随后在肿瘤病灶处聚集。将细胞毒性药物递送至肿瘤部位依赖于MSCs的存活及其持续存在，而支架的使用有助于提升这两项特性。
在此实验中，使用慢病毒载体诱导荧光蛋白的稳定表达（体外 追踪）和生物发光（体内 在癌症和干细胞系中使用示踪标记物。人胶质母细胞瘤细胞系 U87 被感染表达 mCherry 和萤火虫荧光素酶（U87 mCh-Fl），非治疗性间充质干细胞则被感染表达 GFP 和海肾荧光素酶（MSC GFP-Rluc）。治疗性间充质干细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（MSC-TRAIL）。TRAIL 是一种持续分泌的蛋白，可结合邻近癌细胞上的死亡受体，启动半胱天冬酶介导的凋亡过程18.
本文提供了一种用于临床前影像引导下胶质母细胞瘤（GBM）手术切除及负载间充质干细胞（MSC）支架植入的实验方案。简言之，首先对裸鼠实施开颅手术，三天后通过立体定位法原位注射U87 mCh-Fl细胞以建立原发性肿瘤模型。移植后的肿瘤生长约一周时间。在切除手术前48小时，将PLA支架接种MSC细胞。随后在荧光引导下切除肿瘤，并将负载MSC的支架植入切除腔内。术后通过生物发光成像（BLI）监测肿瘤负荷及小鼠生存情况。以下为该实验流程的时间线示意图（图1）。
<img alt="显示颅窗、种植支架、切除及术后成像的肿瘤植入时间线示意图" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57452/57452fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Figure 1"> 
图1：操作时间线。 小鼠首先接受颅窗手术（第0天）。经过三天恢复期后，植入肿瘤（第3天），肿瘤生长约一周时间。在肿瘤切除及植入手术（第10天）前两天，将MSCs接种至支架上（第8天）。术后通过影像学手段持续评估肿瘤进展及治疗效果（第10天之后）。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57452/57452fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>

<table><tbody><tr><td>仅适用于小鼠立体定位仪</td><td>Stoelting</td><td>51730</td><td>在手术期间保持头部稳定定位</td></tr><tr><td>荧光解剖体视显微镜</td><td>Leica</td><td>M165 FC&amp;nbsp;</td><td>可在肿瘤切除过程中实现实时成像</td></tr><tr><td>电动一体化立体定位注射系统（ISI）</td><td>Stoelting</td><td>53315</td><td>可精确控制肿瘤细胞注射体积与速率</td></tr><tr><td>Vetbond 组织粘合剂</td><td>3M</td><td>1469</td><td>用于闭合皮肤切口的外科胶水</td></tr><tr><td>人工泪液</td><td>Akorn</td><td>664268</td><td>防止手术期间眼睛干涩</td></tr><tr><td>Webcol 酒精消毒棉片</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td>消毒手术切口部位</td></tr><tr><td>聚维酮碘外科 scrub</td><td>Purdue Fredick Company</td><td>6761815117</td><td>消毒手术切口部位</td></tr><tr><td>棉签</td><td>Fisherbrand</td><td>23-400-115</td><td>手术工具</td></tr><tr><td>E-vac 吸引系统</td><td>Argos</td><td>EV310</td><td>用于切除肿瘤的真空泵</td></tr><tr><td>从即用型 TISSEEL 中提取的纤维蛋白原和凝血酶</td><td>Baxter</td><td></td><td>用于暂时固定切除腔内的支架</td></tr><tr><td>IVIS Kinetic 活体光学成像系统</td><td>Caliper Life Science</td><td></td><td>生物发光成像仪</td></tr><tr><td>D-荧光素钾盐</td><td>PerkinElmer</td><td>122799</td><td>活体成像试剂</td></tr></tbody></table>

图像引导下胶质母细胞瘤切除及治疗性干细胞接种支架的颅内植入

Image-Guided Resection of Glioblastoma and Intracranial Implantation of Therapeutic Stem Cell-seeded Scaffolds

胶质母细胞瘤（GBM）是最常见且最具侵袭性的原发性脑癌，患者预期寿命仅为12至15个月。这一短暂的生存期部分归因于现有治疗手段的局限性——即手术切除后辅以放疗和化疗——难以清除具有侵袭性的肿瘤病灶。利用具有杀瘤活性的人源间充质干细胞（MSCs）可能改善对这些病灶的治疗。MSCs具有强大的向肿瘤迁移能力，并可被基因工程改造以表达可杀伤肿瘤细胞的治疗性蛋白。临床前模型的进展表明，手术切除会引发MSC的过早丢失，从而降低治疗效果。通过将MSC接种于可生物降解的聚乳酸（PLA）支架上，可提高MSC治疗的疗效。将携带MSC的PLA支架植入手术切除腔内，可恢复细胞的滞留能力、持续存在性及杀瘤作用。为研究接种MSC的PLA支架植入对GBM的影响，需要建立精确的临床前模型。本文提供了一种临床前手术方案，用于在免疫缺陷小鼠中进行影像引导下的GBM肿瘤切除，随后植入携带MSC的支架。MSC通过慢病毒载体进行基因改造，以持续表达并分泌具有治疗作用的肿瘤坏死因子α相关凋亡诱导配体（TRAIL），同时表达绿色荧光蛋白（GFP），以便进行荧光追踪。同样，U87肿瘤细胞也被改造为表达mCherry和萤火虫荧光素酶，实现双模态荧光/生物发光追踪。尽管该方案目前用于研究干细胞介导的药物递送，但也可经修改后用于探究手术切除对其他GBM干预措施的影响。

在注射前，U87 肿瘤细胞经基因工程改造以表达 mCherry 和萤火虫荧光素酶（U87 mCh-Fl），以便进行影像引导切除和生物发光追踪（图 2A-C）。干细胞同样经基因工程改造，分别表达诊断用 GFP-Rluc（MSC-GFP）或治疗用 GFP-TRIAL（MSC-TRAIL），并接种于 PLA 支架上，以确认细胞的黏附与增殖情况（图 2D-F）。
<img alt="显示不同荧光染料下细胞培养物的显微镜图像，用于细胞分析。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57452/57452fig2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图 2"> 
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具有肿瘤趋向性的治疗用间充质干细胞（MSCs）在治疗侵袭性胶质母细胞瘤方面展现出良好前景。最佳移植策略涉及将MSCs接种于支架材料后递送至肿瘤切除腔内。本文提供了用于研究MSC治疗胶质母细胞瘤的临床前技术，包括：影像引导下的肿瘤切除；接种MSC的支架植入；以及术后治疗监测。

胶质母细胞瘤（GBM）是最常见且最具侵袭性的原发性脑癌，患者预期寿命为12至15个月。较短的预期寿命主要归因于……

本实验方案的总体目标是通过手术切除小鼠脑部肿瘤，并将接种有肿瘤趋向性治疗性干细胞的支架植入术后切除腔内。该方法有助于回答细胞治疗和神经肿瘤学领域的关键问题，例如：手术切除如何影响细胞向手术腔内的植入，新型治疗药物对术后脑肿瘤的疗效如何，以及基于支架的递送系统如何影响治疗效果。该技术的主要优势在于，可以在小鼠中开展脑肿瘤干预研究，且研究方式能够高度模拟人类患者临床诊疗的标准方案。尽管该方法可用于研究在支架上递送的干细胞治疗，也可应用于其他干预手段，如纳米颗粒、小分子、溶瘤病毒或其他新兴疗法。在小鼠植入前48小时准备支架，首先将PLA支架切割成约2×2毫米、大小与切除腔相当的片状。通过将支架浸入70%乙醇中15分钟进行灭菌。孵育15分钟后，将支架浸入磷酸盐缓冲液（PBS）中。随后在准备细胞接种的同时，将支架置于含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的杜氏改良伊格尔培养基（Dulbecco's modified Eagle's medium）中。细胞制备时，首先使用0.05%胰蛋白酶消化贴壁培养的间充质干细胞（MSCs）使其脱落。在37摄氏度下孵育5分钟。孵育结束后，确保细胞已脱落。然后向培养瓶中加入DMEM以灭活胰蛋白酶。接下来，将烧瓶中的内容物转移至15毫升离心管中。使用血细胞计数板对细胞进行计数。然后，通过在100 × g条件下离心5分钟，每份支架分别收集5 × 10⁵个间充质干细胞（MSCs）。离心后，吸除上清液，并将间充质干细胞（MSCs）重悬于每5 × 10⁵个细胞5 µL的DMEM培养基中。然后用镊子从DMEM浸泡液中取出一个支架，将其放置于六孔板的盖子上。将支架从盖子上提起，留下多余的DMEM液滴。将支架再次放回盖子上，置于一个新的干燥位置。重复三到五次。然后将部分干燥的支架放入一个新的六孔板中用于接种。部分干燥的支架可提供最佳的细胞接种效果。如果支架过于湿润，细胞会从支架上滑落并黏附到下方的培养板上。如果支架过于干燥，液滴将无法在整个支架表面铺展，导致初始细胞分布不均。使用移液器轻轻吹打MSC细胞管，以混匀细胞悬液，因为部分细胞可能已沉降至管底。缓慢吸取2.5 µL新鲜混匀的MSC悬液，直接滴加在支架表面，在支架上方形成一小滴液滴。向每孔边缘加入300 µL DMEM培养基，以防止细胞液滴过快蒸发。在37摄氏度下孵育30分钟，使细胞附着于支架上。孵育结束后，使用镊子轻轻将支架在孔板中翻转。接种2.5微升 freshly mixed MSC悬液，使每个支架接种的细胞总数达到5 × 10⁵个。孵育30分钟后，使细胞贴附于支架上，随后向6孔板的每个孔中加入2毫升DMEM培养基以覆盖支架。轻轻抬起支架，使培养基能够流至其下方。在植入手术前，于37°C条件下继续孵育48小时。首先将立体定位仪放置在荧光解剖显微镜的载物台上。然后使用异氟烷鼻罩适配器提供的持续

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科研

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Medicine

医学

影像引导切除治疗干细胞种子支架的胶质母细胞瘤和颅内植入术

将GL261细胞颅内植入C57BL/6小鼠可诱导生成恶性胶质瘤，其特征与人类多形性胶质母细胞瘤的多种典型特征相似。我们采用稳定表达荧光素酶的GL261细胞，以便通过体内成像技术监测肿瘤进展过程。本文展示了手术操作及三维体内成像方法。...

颅内植入及后续三维成像 体内 小鼠胶质瘤的生物发光成像

我们介绍一种集成方法，用于将人多形性胶质母细胞瘤细胞精确、立体定向地植入裸鼠脑内，并进行后续系列 体内...

立体定向颅内植入与 体内 多形性胶质母细胞瘤小鼠模型系统中肿瘤异种移植的生物发光成像

通过结合抛光加固的薄颅骨（PoRTS）颅窗和胶质母细胞瘤（GBM）细胞注射，我们能够对活体小鼠脑内注射的GBM细胞所引发的胶质瘤发生及生长过程进行长期纵向观察。...

成像胶质瘤起始过程 在体 内 通过抛光并加固的薄颅骨颅窗

本视频介绍了将间充质干细胞（MSCs）接种到可生物降解的聚乳酸（PLA）支架上的技术。制备好的支架可植入脑部手术切除腔内，细胞可能由此向肿瘤病灶迁移。此外，这些细胞可经基因工程改造以表达治疗性蛋白，从而诱导癌细胞发生凋亡。...

MSC接种支架制备：一种用于制备可植入小鼠模型的间充质干细胞接种支架的技术

本视频展示了用于影像引导下肿瘤切除及植入经基因工程改造、表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的间充质干细胞（MSCs）的生物支架的外科手术操作。这类治疗性间充质干细胞在脑肿瘤治疗中具有潜在应用价值。...

荧光引导的肿瘤切除与间充质干细胞接种支架植入小鼠模型：一种将治疗性间充质干细胞递送至小鼠脑肿瘤切除腔的外科手术方法

我们建立了小鼠皮层原位胶质母细胞瘤模型，用于活体双光子显微镜观察，该模型可重现肿瘤生长过程中通常存在的生物物理约束条件。通过以慢性玻璃窗替代肿瘤上方的颅骨，可利用双光子显微镜对肿瘤进展进行长期动态追踪。...

一种保留脑实质物理约束并适用于活体双光子显微成像的原位胶质母细胞瘤小鼠模型

由于干细胞具有内在的肿瘤趋向性，它们作为治疗脑肿瘤的载体具有广阔前景。非侵入性的经鼻干细胞递送可绕过血脑屏障，在临床转化方面展现出巨大潜力。本文总结了在胶质瘤小鼠模型中经鼻干细胞递送的基本原理。...

小鼠模型中通过鼻内递送治疗性干细胞至胶质母细胞瘤

本研究描述了用于三维脑肿瘤模型的柔性叉指电极的开发，即 体外 培养 在卵内 模型，以及 体内...

用于胶质母细胞瘤脉冲电场治疗的柔性有机电子器件

我们提出了一种新的方法，利用双光子显微镜在小鼠模型中研究荧光标记的氧化铁纳米颗粒向胶质母细胞瘤递送的过程。...

小鼠模型中胶质母细胞瘤的双光子活体显微成像

体内，许多中枢神经系统疾病（如胶质母细胞瘤，GBM）所涉及的细胞间通讯极难进行测量和表征。本文介绍了脑部开放流动微透析（cOFM）的操作流程，该方法可用于在GBM的纵向动物模型中采集间质液成分。...

利用脑部开放流式微透析技术在胶质母细胞瘤动物模型中纵向采集间质液

本实验方案的目的是为研究人员提供一种高度可重复的颅内植入技术。...

小鼠脑内立体定向接种胶质母细胞瘤患者来源异种移植细胞系

学习影像引导切除胶质母细胞瘤并植入间充质干细胞种子支架的技术。该方法利用小鼠模型研究术后细胞治疗与支架递送系统对神经肿瘤学疗效的影响，为临床脑癌干预提供重要参考。

图像引导下胶质母细胞瘤切除及治疗性干细胞接种支架的颅内植入

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