Gene-targeted Random Mutagenesis to Select Heterochromatin-destabilizing Proteasome Mutants in Fission Yeast

Hogyu David Seo; Daeyoup Lee

doi:10.3791/57499

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Genetics

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Gene-targeted Random Mutagenesis to Select Heterochromatin-destabilizing Proteasome Mutants in Fission Yeast

基因靶向随机诱变在裂变酵母中选择染色质稳定蛋白酶突变体

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07:18 min

May 15, 2018

DOI: 10.3791/57499-v

Hogyu David Seo¹, Daeyoup Lee¹

¹Department of Biological Sciences,Korea Advanced Institute of Science and Technology

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

本文介绍了一种用于裂变酵母靶基因随机诱变的详细方法。例如, 我们针对的是rpt4+, 它对19S 蛋白酶体的亚基进行编码, 并筛选出破坏染色质的突变。

这种随机诱变的总体目标是筛选使异染色质不稳定的突变。这种方法可以帮助回答异染色质领域的关键问题，例如调节异染色质形成和维持的因素。该技术的主要优点是它可以特异性地靶向所需的基因进行诱变，即使该基因是必需的。

首先，通过混合下表所示的组分，制备含有补充剂或 YES、不含腺嘌呤的 Pombe 谷氨酸培养基或 PMG 以及不含腺嘌呤的 PMG 的酵母提取物。高压灭菌并根据需要添加 G418 后，再搅拌培养基 5 到 10 分钟。然后，将培养基分装到 90 毫升培养皿中，并将板储存在 4 摄氏度。

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