免疫刺激性剂评价: 淋巴组织提取与注射路径依赖性树突状细胞活化
2018年9月16日
在 immunostimulating 纳米材料治疗后, 对淋巴组织进行后续提取实验, 以检测淋巴树突状细胞活化。
此过程的总体目标是熟悉将细胞性淋巴结与小鼠隔离所需的独特技术。手术是在小鼠的六条不同途径上注射免疫刺激物质后进行的。在这项研究中，我们使用了形成纳米结构的新材料。
表面活性剂由亲水性头组和疏水性尾部组成。那些形成球形米特尔或其他二级结构由于微噬细胞分离。我们利用这个属性，一个生物大分子，是DNA。
此处所示的DNA两栖动物作为常规核苷酸（如 A、C、G、T）具有亲水性块，而脂质改性神经细胞核碱则充当疏水单位。经过改良的寡头由DNA合成器在大规模八位图中合成。在等介质中，两栖脂质DNA自发地形成纳米大小的球形球状
当米特尔形成时，DNA仍为直径约10纳米的空载体。为了使载体具有免疫刺激，用收费样受体9辅助物eCpG来扩展DNA序列是很简单的。脂质DNA和eCpG基座在这里，因此米特尔的外表面退化与CpG序列。
然后，我们将这种免疫刺激纳米粒子称为 INP。为了确定 INP 的免疫反应的正确方法，我们在 64 条注射路线中向小鼠注射 INP，从而分析了适当的淋巴结组织。有关更详细的注射说明，请找到查尔斯·里弗在2012年发表的一篇工作文章。
此视频的主要优点是直观地展示如何获得媒体淋巴结。该视频明确显示了中心淋巴结的位置，很多人发现在隔离器官方面有困难。所有实验都是在上海公共卫生临床中心（Ulsan医学院）机构动物护理和使用委员会的指引下进行的。
本部分将显示器官或组织的具体位置，这对免疫学分析至关重要。脾脏和两个淋巴结将被隔离。首先，老鼠因吸入二氧化碳安乐死而牺牲，并按照机构动物护理和使用委员会的指导，作出一切努力，尽量减少痛苦。
从现在开始，让我们找到器官并隔离它们。首先，将鼠标正确固定到操作台上，在鼠标手掌上固定四个针脚。用酒精消毒解剖区。
用大尺寸剪刀解剖小鼠腹部底部的外盖。使用钳子打开附件的两侧，并在操作台上用销固定附件。通过发现向左腿向下移动的血管的连合，暴露了内淋巴结的位置。
容器的形状看起来像倾斜的字母字母Y. 揭开层与钳子，并把它从皮肤。用较小的剪刀切割内膜，以暴露内脏。使用钳子将肠子向左移动，然后包裹在形状的脾脏中，脾脏在腹部左侧、左上侧显示。
在手术过程中需要特别注意，因为脾脏很容易被破坏。最后这个视频的要点:收获中淋巴结。它位于肺的上部下，这是很难看到的，由于其小尺寸和有点隐藏的位置。
用小剪刀和钳子小心地露出区域。切肋骨和隔膜的两侧。将切断的肋骨夹在胸前。
在手术过程中，避免损害心脏和血管，因为它可能会使部位失明，找到半透明的中心淋巴结。如果意外血管破裂，用纱布轻轻擦去血迹。抓住肺的左侧，轻轻地把它翻到另一边，看看肺下面。
用钳子拉起中序淋巴结。收获中序淋巴结后，确保完全去除淋巴结周围的所有脂肪和血液，因为不需要的组织可能会影响分析。最后，所有孤立的器官在装满介质的培养皿上。
在此流式细胞学上分析共0.1倍10至第六细胞。基于力的获取和大小，白细胞种群被封闭，细胞被暗染色排除。INP注射后24小时，通过64个注射途径，脾脏，内结淋巴结和内序淋巴结被收获，并分析直流活化通过流细胞学。
基于流细胞学DC组的策略，定义为活白细胞中的CD11C阳性和血统性阴性细胞。值得注意的是，与PBS相比，INP的鼻内注射促进了中序淋巴结CD40、80、86表达的显著增加。因此，该数据表明，INP的鼻内注射可以用作增强肺部免疫力的粘膜佐剂。
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概述
本文描述了一种从注射免疫刺激剂纳米材料的小鼠中分离纵隔淋巴结的方法。该技术专注于淋巴组织的提取，以评估淋巴树突状细胞的激活。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 免疫学
- 纳米技术
背景
- 了解淋巴树突状细胞的激活对于免疫学研究至关重要。
- 免疫刺激材料可以增强免疫反应。
- 纳米尺寸结构具有可以在生物应用中利用的独特性质。
- 分离技术对于研究特定类型的免疫细胞至关重要。
研究目的
- 让研究人员熟悉分离纵隔淋巴结的技术。
- 评估新类别的免疫刺激纳米材料的效果。
- 研究治疗后的淋巴树突状细胞激活。
所用方法
- 通过六种不同的途径在小鼠中注射免疫刺激材料。
- 使用特定的手术技术分离纵隔淋巴结。
- 利用表面活性剂形成纳米尺寸结构。
- 在研究中应用DNA作为生物大分子。
主要结果
- 成功从小鼠中分离出淋巴组织。
- 治疗后观察到淋巴树突状细胞的激活。
- 证明了免疫刺激纳米材料的有效性。
- 对纳米尺寸结构在免疫反应中的作用提供了见解。
结论
- 分离纵隔淋巴结的技术有效且可重复。
- 免疫刺激纳米材料可以显著影响免疫细胞的激活。
- 需要进一步研究以探索这些材料在免疫学中的全部潜力。
常见问题
Executive Industry Relevance
Precise evaluation of immunostimulatory agents requires robust methods for extracting and analyzing lymphoid tissues to assess dendritic cell activation across administration routes. This workflow enables biopharma teams to compare immune activation profiles of novel nanoparticle-based agents, supporting predictive confidence in early immunotherapy and vaccine discovery. The approach directly informs route-of-administration decisions and portfolio triage for immunomodulatory candidates.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of immune activation mechanisms by quantifying dendritic cell responses in lymphoid tissues.
- Supports biological de-risking by comparing activation signatures across multiple administration routes.
- Facilitates functional target validation for immunostimulatory nanoparticle candidates.
Screening & Assay Development
- Provides standardized tissue extraction and flow cytometry protocols for reproducible immune cell analysis.
- Delivers quantitative readouts of dendritic cell activation markers (CD40, CD80, CD86) for assay development.
- Enables screening of administration routes to optimize immunogenicity profiles.
Translational & Preclinical Research
- Aligns immune activation data with route-dependent delivery strategies for translational vaccine and immunotherapy research.
- Supports continuity from discovery through preclinical validation by enabling direct tissue-level immune monitoring.
- Informs risk-adjusted advancement of candidates with favorable activation and safety profiles.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the immunotherapy discovery continuum from early target validation through preclinical candidate selection, enabling direct comparison of immune activation across administration routes.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing on immunostimulant mechanism and tissue-specific activation.
- Screening: Provides reproducible, quantitative flow cytometry outputs for cross-route comparison.
- Analytics: Delivers marker-based dendritic cell activation data to inform candidate ranking.
- Translational Research: Connects route-dependent immune activation to preclinical delivery strategies.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable tissue extraction and analysis workflow for nanoparticle immunostimulant evaluation.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in immunostimulant mechanism and route selection.
- Operational Value: Standardizes tissue extraction and flow cytometry for reproducible immune profiling.
- Strategic Value: Enables informed go/no-go decisions for immunomodulatory candidates based on quantitative immune activation.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of candidates with optimal activation and delivery profiles.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine dissection and lymphoid tissue extraction, especially for mediastinal lymph nodes.
- Needs access to flow cytometry instrumentation and analytical infrastructure for immune cell profiling.
- Demands cross-team standardization of tissue handling and gating strategies for reproducibility.
- Adaptation may be needed for different animal models or tissue targets.
- Careful tissue preparation is critical to avoid contamination and ensure accurate immune cell analysis.
