Name: 通过检测全小鼠胚胎β乳糖酶活性追踪基因表达 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: 学习检测全小鼠胚胎β-galactosidase活性的标准实验方案，用于追踪基因表达模式。该方法操作简便、灵敏度高，适用于发育生物学研究，可直接观察整体组织染色或石蜡切片后的高分辨率结果。

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我们感谢国家心血管研究中心（CNIC）组织病理学服务部门在技术方面提供的协助。同时感谢Motoharu Seiki博士慷慨提供Mt4-mmpLacZ小鼠，以及Alicia G. Arroyo博士对本项目的支持和对本文稿的审阅。我们还要感谢Peter Bonney对本文的校对。本研究由马德里欧洲大学通过授予C.S.C.的资助（# 2017UEM01）支持。

所有实验程序均经国家心血管研究中心（CNIC）动物实验伦理委员会和马德里自治区政府批准，以确保尽量减少动物痛苦。
1. 从怀孕小鼠中收集胚胎（从E8.5至E12.5）
<ol>
	<li>通过颈椎脱位或吸入 CO2 的方法处死怀孕小鼠。首次观察到阴道栓的当天记为胚胎发育第 0.5 天（E0.5）。</li>
	<li>将动物仰卧位放置在吸水垫上，并用 70% 乙醇清洁小鼠腹部皮肤。 
	注意：后续步骤无需无菌操作。</li>
	<li>使用齿状镊夹起并提起腹部皮肤。</li>
	<li>用手术剪在腹部正中线处垂直切开皮肤和腹壁，切口长度为 2 至 4 cm。</li>
	<li>打开腹腔，用镊子取出子宫角，同时用手术剪剪断沿子宫内侧弯曲部的血管。</li>
	<li>取出整串胚胎，并将其转移至含有 10 mL 冰上预冷的 0.01 M 磷酸盐缓冲液（pH 7.4，PBS）的培养皿中。</li>
	<li>在体视显微镜下，于盛有 10 mL 新鲜冰 PBS 的培养皿中仔细解剖分离胚胎。用钟表匠镊夹住肌层以暴露羊膜囊，然后用镊尖撕开羊膜，取出其中的胚胎和卵黄囊。</li>
	<li>收集来自怀孕小鼠早期阶段（E8.5 至 E12.5）的同窝胚胎（图 2）。</li>
	<li>使用弯头镊将胚胎转移至另一盛有 10 mL 冷 1×PBS 的新培养皿中；对于非常小的胚胎（E8.5–E9.5），建议使用塑料移液管转移样本，以避免损伤胚胎。</li>
	<li>开始固定前，用钟表匠镊从胚胎上剪取一小块组织，或从小型胚胎（E8.5 至 E9.5）中取羊膜，放入微量离心管中用于基因型鉴定。 
	注意：LacZ 基因型鉴定采用聚合酶链式反应（PCR）引物：上游引物 5´-ATCGTGCGGTGGTTGAACTG-3´；下游引物 5´-CGAGGCGTTAACCGTCAGCA -3´。</li>
</ol>
2. 小鼠胚胎的固定
<ol>
	<li>将每个胚胎转移至含有1 mL 1× PBS的2 mL圆底微量离心管中。 
	注意：本方案所有步骤均需在这些管中进行，并使用滚轴摇床振荡操作。</li>
	<li>在室温下用1× PBS洗涤胚胎1分钟，以去除残留血液。使用塑料移液管更换管中液体。</li>
	<li>在冰上用1 mL 0.125%戊二醛固定胚胎。 
	注意：固定时间取决于胚胎大小：E8.5–E9.5胚胎固定20分钟，E10.5胚胎固定30分钟，E12.5胚胎固定1小时。</li>
	<li>去除固定液，在进行X-gal染色前，用1× PBS在室温下洗涤胚胎两次，每次10分钟。</li>
</ol>
3. 小鼠胚胎整体β-半乳糖苷酶组织化学染色
<ol>
	<li>在开始实验前，配制 X-Gal 漂洗缓冲液和 X-Gal 染色液（参见表1和材料表）。使用野生型（WT）同窝胚胎作为酶促反应的阴性对照。</li>
	<li>将胚胎在 X-Gal 漂洗缓冲液中室温孵育 10 分钟（图2）。</li>
	<li>将胚胎在 X-Gal 染色液中于 37 °C 避光孵育 2 小时至过夜。通过体视显微镜定期观察显色反应，直至胚胎中出现足够强度的蓝色染色且无背景干扰。在整个染色过程中，保持溶液 pH 在 8 至 9 之间以降低背景。若染色液开始褪色，应更换为新鲜底物溶液以延长酶促反应时间。</li>
	<li>当获得理想信号后，将胚胎在微量离心管中用 1 mL 1x PBS 洗涤两次，每次 10 分钟，室温操作，以终止反应。</li>
	<li>将染色后的胚胎转移至 1 mL 4% 多聚甲醛（PFA）中重新固定，4 °C 下孵育 1 小时至过夜。 
	注意：胚胎可在 4% PFA/PBS 中于 4 °C 长期保存，也可立即进行切片处理。此最终固定步骤对染色模式的长期保存至关重要。</li>
	<li>将胚胎在 1 mL 1x PBS 中室温洗涤两次，每次 10 分钟。</li>
	<li>方案一：将胚胎依次浸入浓度递增的甘油溶液（20%、40%、60% 和 80% 甘油溶于 1x PBS）中，每种溶液室温孵育 1 小时，以实现透明化。 
	注意：在 80% 甘油中可延长洗涤时间，甚至数天，直至胚胎完全透明，随后在此步骤将胚胎保存于 80% 甘油中，4 °C 存放（图2）。建议向保存于 4 °C 的甘油或 1x PBS 中的胚胎添加极少量叠氮化钠或一颗硫柳汞晶体，以防止霉菌生长。透明化完成后，可对整体胚胎进行拍照（步骤 4）。</li>
	<li>方案二：将胚胎进行石蜡包埋，并使用切片机进行切片（图2）。在切片前，应先记录整体染色胚胎中的表达模式（步骤 4 和 5）。</li>
</ol>
4. 整体胚胎的摄影
<ol>
	<li>在切片前对整体染色的胚胎进行拍照时，将胚胎转移至含有凝固的1-2%琼脂糖（溶于1x PBS）基底的培养皿中。</li>
	<li>用10 mL 1x PBS完全覆盖琼脂糖包被培养皿中的胚胎，以防止在液体中拍照时发生脱水和反光。</li>
	<li>使用镊子在1x PBS中调整胚胎的方向。对于较晚期的胚胎（E10.5–E12.5），可用镊子在琼脂糖中戳出小孔，将样本置于其中并从不同角度固定位置，以避免拍照过程中胚胎自由漂浮。</li>
	<li>将培养皿放置在体视显微镜载物台上，使用透射光（下光源）。在拍照过程中切换“暗场”和“明场”模式，以设定所需的照明条件，并优化样本的透光性。 
	注意：对晚期胚胎拍照时，建议使用光纤照明，以避免胚胎表面产生反光。拍摄透明化处理后的胚胎时，操作步骤相同，但需将其转移至含有100%甘油的培养皿中，并完全浸没。</li>
</ol>
5. X-gal 染色胚胎的石蜡包埋与切片
<ol>
	<li>石蜡包埋
	<ol>
		<li>从 4 °C 取出经 X-gal 染色的胚胎（步骤 3.5），用 1 mL 1× PBS 洗涤三次，以去除多余的固定剂。</li>
		<li>使用镊子将每个胚胎转移至组织学包埋盒中。</li>
		<li>将装有胚胎的包埋盒放入烧杯中，于室温下依次通过梯度乙醇系列进行脱水：70% 乙醇处理一次，每次 30 分钟；96% 乙醇处理两次，每次 30 分钟；100% 乙醇处理两次，每次 30 分钟。 
		注意：胚胎可在 4 °C 下于 70% 乙醇中长期保存，直至开始脱水过程。</li>
		<li>将整个包埋盒在异丙醇中室温孵育 30 分钟。</li>
		<li>用镊子将包埋盒转移至盛有预热异丙醇的玻璃染色缸中，并置于 60 °C 烤箱中 30 分钟。</li>
		<li>将包埋盒放入另一个盛有 50% 异丙醇/50% 熔化石蜡混合液的玻璃染色缸中，在 60 °C 烤箱中放置 4 小时。</li>
		<li>用熔化的石蜡更换两次，每次在 60 °C 孵育 30 分钟，对含胚胎的包埋盒进行孵育。</li>
		<li>最后一次石蜡洗涤结束后，打开包埋盒，将每个胚胎转移至独立的组织包埋模具中，并在体视显微镜下观察样本。</li>
		<li>向模具孔中加入 60 °C 的熔化石蜡。使用加热的镊子保持石蜡处于熔融状态，并小心地在模具中调整胚胎的方向。 
		注意：正确摆放样本方向是实现胚胎在目标切面上切片的关键步骤。</li>
		<li>在石蜡凝固前，将一个无盖的包埋盒置于蜡块顶部，并用熔化石蜡填满，然后在室温下静置过夜，使其完全冷却凝固。</li>
		<li>待石蜡完全凝固后，从模具中取出固体蜡块，并将石蜡块在室温或 4 °C 下保存，直至进行切片14。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>石蜡切片
	<ol>
		<li>在切片机上安装刀片，并设定切片厚度为 5–7 µm。将石蜡块在冰上冷却，并修整成立方体或金字塔形。</li>
		<li>用少量熔化石蜡将蜡块固定在切片机夹持器上。</li>
		<li>调整蜡块方向以实现最佳切割效果。使用标准切片机在室温下将石蜡块切成 5–7 µm 厚的切片。</li>
		<li>使用细毛刷将切片转移至室温水浴中，以便操作和挑选切片。</li>
		<li>用载玻片从水浴中捞取切片，并将其转移至 42 °C 水浴中进行展片。</li>
		<li>从水浴中取出切片，轻轻放置于防脱载玻片上。</li>
		<li>将载玻片置于 37 °C 烤箱中过夜充分干燥，以确保切片完全贴附，否则在染色过程中可能发生脱落。 
		注意：在开始染色程序前，将载玻片在 4 °C 下保存。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>X-gal 染色石蜡切片的脱蜡与复染
	<ol>
		<li>将载玻片置于载玻片架上，放入 60 °C 烤箱中至少 45 分钟，使石蜡更易流动。</li>
		<li>将载玻片转移至架上，使用玻璃染色缸进行以下操作：将架浸入含有浓度递减乙醇的染色缸中，以彻底去除石蜡并使组织水化：在 60 °C 下用异丙醇处理 5 分钟；再用异丙醇处理 3 分钟；100% 乙醇处理 2 分钟；96% 乙醇处理 1 分钟；70% 乙醇在室温下处理 1 分钟。</li>
		<li>用蒸馏水冲洗切片两次，确保无乙醇残留。</li>
		<li>在室温下用复染剂（例如 核固红溶液）复染切片 5 分钟（通常为 3–8 分钟）（图 2）。 
		注意：此染色有助于显示切片中的整体组织结构。</li>
		<li>染色后，用蒸馏水冲洗载玻片 1 分钟，并在显微镜下检查切片染色情况。 
		注意：若染色效果过弱，可延长复染时间再次复染。</li>
		<li>按以下递增浓度乙醇系列对切片进行脱水：95% 乙醇洗涤两次，每次 2 分钟；100% 乙醇洗涤两次，每次 2 分钟；为避免溶解蓝色沉淀物，仅用二甲苯快速洗涤一次。</li>
		<li>将载玻片逐个从架上取下，放置于纸面上。然后使用合成的永久性封片介质对每张载玻片进行封片并加盖盖玻片。 
		注意：二甲苯为易燃物质，其蒸气对人类健康及水生生物具有刺激性和危害性，必须在通风橱内操作，并佩戴适当的个人防护装备。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

E. coli 的 LacZ 基因由于具有高灵敏度和易于检测的特点，已被广泛用作基因表达模式研究中的报告基因。本方案描述了一种基于酶促反应的经典方法，用于检测 β-半乳糖苷酶（β-gal）的表达，该方法操作简便、快速且成本低廉。此方法也可在未经重大修改的情况下，应用于整体胚胎、完整器官、冰冻切片组织或培养细胞的检测。
准确应用本方法可获得稳定且易于解读的染色结果。然而，强烈建议同时设置对照并进行后续验证步骤。为此，本方案需平行开展于野生型同窝胚胎中，作为阴性对照，用于监测非特异性X-gal染色。此外，通过β-gal染色获得的表达数据应通过蛋白质印迹（western-blot）和定量PCR（Q-PCR）分析，或β-gal免疫组织化学染色予以验证。图5），与其他抗体联用还可鉴定表达LacZ的特定细胞类型9固定步骤需予以充分考虑，以保持β-半乳糖苷酶的酶活性并尽量减少染色过程中的背景信号。因此，与多聚甲醛固定相比，胚胎必须使用戊二醛进行固定，因其可获得最为一致且可...

为了描述特定的基因表达模式，从Drosophila到哺乳动物，报告基因作为标记物的使用至关重要。在涉及转基因和基因敲除动物的实验中，大肠杆菌（Escherichia coli，E. coli）的细菌β-半乳糖苷酶基因（LacZ）是最广泛使用的报告基因之一1,2,3,4。β-半乳糖苷酶（β-gal）可催化β-半乳糖苷（如乳糖）水解为其单糖（葡萄糖和半乳糖）5。其最常用的底物是X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-半乳吡喃糖苷），这是一种可被β-半乳糖苷酶水解为5-溴-4-氯-3-羟基吲哚和半乳糖的糖苷。前者可被氧化形成二聚体，当与铁氰化钾和亚铁氰化钾联合使用时，产生特征性的不溶性蓝色沉淀（图1）6。
的 LacZ 基因作为报告基因的使用已有三十多年的历史7,8通常， LacZ 插入到内源性启动子下游，取代开放阅读框，因此可用于细菌和细胞培养中可视化含有特定插入片段的细胞，以及在转基因动物中作为发育过程中内源性基因表达模式的示踪标记9在这方面，β-半乳糖苷酶活性的可视化已被广泛用于 果蝇 从单个细胞到整个组织，理解发育和细胞过程。 黑腹果蝇 遗传学方法有利于生成稳定品系，其中含有报告基因的修饰型P因子构建体 LacZ 被随机插入基因组的不同位置。因此，当其处于增强子元件的影响下时，可驱动报告基因以组织特异性的方式表达，这使得过去二十年中对大量基因表达模式的系统性分析成为可能10此外，利用转基因小鼠进行监测 LacZ 基因表达还能够通过Cre-loxP介导的重组检测基因重组事件，并在嵌合体分析中定位突变的胚胎干细胞衍生物11，这有助于实现对 LacZ 在特定组织中的表达以及时间上的表达变化。此外，在整体胚胎中，β-半乳糖苷酶活性的检测可能在不同强度下产生差异性染色模式，这些模式可在不同发育阶段方便地观察，以分析基因表达的时间动态变化8,12.
本文介绍了一种通过X-gal染色在小鼠胚胎早期发育阶段对完整组织进行基因表达可视化的方法。我们提出这一组织化学方法是一种高度敏感且成本低廉的技术，适用于在整体标本中或对石蜡包埋的组织或胚胎进行细胞水平上的标记细胞精确检测。与其他方法相比，该方法能够在小鼠组织中实现染色的直接可视化，并具有最低的背景信号13。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;试剂&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2-丙醇</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>24137-1L-R</td><td></td></tr><tr><td>琼脂糖</td><td>SCHARLAU</td><td>50004/ LE3Q2014</td><td></td></tr><tr><td>水性封片剂</td><td>VECTOR LABS</td><td>H-5501</td><td></td></tr><tr><td>合成封片剂</td><td>MERCK</td><td>100579</td><td></td></tr><tr><td>96% 乙醇</td><td>PROLABO</td><td>20824365</td><td></td></tr><tr><td>99.9% 绝对乙醇</td><td>SCHARLAU</td><td>ET00021000</td><td></td></tr><tr><td>50% 戊二醛溶液</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>G6403-100ml</td><td></td></tr><tr><td>85% 甘油</td><td>MERCK</td><td>104094</td><td></td></tr><tr><td>99.9% 甘油</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>六水合氯化镁</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>63064</td><td></td></tr><tr><td>非离子型表面活性剂（Nonidet P-40）</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>542334</td><td></td></tr><tr><td>核固红复染剂</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>N3020</td><td></td></tr><tr><td>石蜡片</td><td>MERCK</td><td>111609</td><td></td></tr><tr><td>多聚甲醛</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>158127-500g</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（片剂）</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P4417-50TAB</td><td></td></tr><tr><td>亚铁氰化钾</td><td>MERCK</td><td>1049840500</td><td></td></tr><tr><td>铁氰化钾</td><td>MERCK</td><td>1049731000</td><td></td></tr><tr><td>叠氮化钠</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>S8032</td><td></td></tr><tr><td>脱氧胆酸钠</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>30970</td><td></td></tr><tr><td>一水合磷酸二氢钠</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>106346</td><td></td></tr><tr><td>二水合磷酸氢二钠</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>71638</td><td></td></tr><tr><td>百里酚</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>T0501</td><td></td></tr><tr><td>Tris 盐酸盐（Tris HCl）</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>10812846001 (Roche)</td><td></td></tr><tr><td>X-GAL</td><td>VENN NOVA</td><td>R-0004-1000</td><td></td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>VWR CHEMICALS</td><td>VWRC28973.363</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;设备&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>一次性塑料冷冻模具（15×15×5 mm）</td><td>SAKURA</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>旋转式切片机</td><td>Leica</td><td>RM2235</td><td></td></tr><tr><td>包埋盒</td><td>Oxford Trade</td><td>OT-10-9046</td><td></td></tr><tr><td>显微镜盖玻片（24×60 mm）</td><td>VWR</td><td>ECN631-1575</td><td></td></tr><tr><td>显微镜载玻片</td><td>Thermo Scientific, MENZEL-GL&amp;Auml;SER</td><td>AGAA000001#12E</td><td></td></tr><tr><td>防脱显微镜载玻片</td><td>Thermo Scientific, MENZEL-GL&amp;Auml;SER</td><td>J1820AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>漂浮水浴锅</td><td>Leica</td><td>HI1210</td><td></td></tr><tr><td>一次性低剖面切片机刀片</td><td>Feather</td><td>UDM-R35</td><td></td></tr><tr><td>石蜡烘箱</td><td>J.R. SELECTA</td><td>2000205</td><td></td></tr><tr><td>石蜡分配器</td><td>J.R. SELECTA</td><td>4000490</td><td></td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>Leica</td><td>DM500</td><td></td></tr><tr><td>聚丙烯微量离心管（2.0 mL）</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>T2795</td><td></td></tr><tr><td>聚丙烯微量离心管（1.5 mL）</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>T9661</td><td></td></tr><tr><td>旋转摇床</td><td>IKA Labortechnik</td><td>HS250 BASIC</td><td></td></tr><tr><td>搅拌加热板</td><td>Bibby</td><td>HB502</td><td></td></tr><tr><td>涡旋振荡器</td><td>IKA Labortechnik</td><td>MS1</td><td></td></tr><tr><td>实验室天平</td><td>GRAM</td><td>FH-2000</td><td></td></tr><tr><td>精密天平</td><td>Sartorius</td><td>ISO9001</td><td></td></tr><tr><td>pH计</td><td>Crison</td><td>Basic 20</td><td></td></tr><tr><td>光纤</td><td>Optech</td><td>PL2000</td><td></td></tr></tbody></table>

通过检测完整小鼠胚胎中β-半乳糖苷酶活性示踪基因表达

Tracing Gene Expression Through Detection of &#946;-galactosidase Activity in Whole Mouse Embryos

这 大肠杆菌 LacZ 基因，编码β-半乳糖苷酶，常被用作基因表达的报告基因以及细胞谱系研究中的示踪标记。经典的组织化学反应基于底物X-gal在铁氰化物和亚铁离子存在下的水解，生成不溶性的蓝色沉淀，易于观察。因此，随着发育的进行，β-半乳糖苷酶的活性可作为目的基因表达模式的标记。本文描述了在早期小鼠全胚胎中检测β-半乳糖苷酶活性的标准实验流程，以及后续进行石蜡切片和复染的方法。此外，还提供了一种全胚胎透明化处理的步骤，以更清晰地观察胚胎深层区域的X-gal染色结果。尽管需要优化反应条件以降低背景活性，但采用该方法可获得稳定可靠的结果。在实验应用中也应考虑其局限性，尤其是在进行整体染色时胚胎大小的影响。本实验方案为小鼠发育过程中β-半乳糖苷酶的检测提供了一种灵敏且可靠的方法，既适用于冷冻切片和整体器官，也可用于全胚胎检测。因此，利用该方案不仅可在全胚胎水平上分析发育过程中基因表达的动态模式，还可通过石蜡切片在细胞水平上进一步评估基因的精细表达情况。

关键词：β-半乳糖苷酶，X-gal染色，基因表达，细胞谱系，小鼠胚胎，组织化学，石蜡切片，整体透明化，发育生物学

本文展示了在整只小鼠胚胎中使用X-gal作为底物进行β-半乳糖苷酶组织化学反应的标准实验方案所得结果（图1 和 图2）。通过该方案，我们利用在内源性Mt4-mmp启动子调控下表达LacZ报告基因的Mt4-mmp基因突变小鼠，检测了不同胚胎发育阶段（E9.5、E11.5和E12.5）中膜型4-基质金属蛋白酶（Mt4-mmp）的表达情况（图3、图4 和 图5）9,15。Mt4-mmp是一种通过糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定于细胞膜上的内肽酶。尽管已在多种人类癌症中检测到Mt4-mmp，并发现其与肿瘤生长进展相关，但目前关于其对细胞外基质成分的蛋白水解活性的信息仍十分有...

本文介绍了在早期小鼠全胚胎中检测β-半乳糖苷酶活性的标准实验方案，以及石蜡切片和复染的方法。该方法操作简便、快速，可用于监测发育过程中的基因表达，也可应用于组织切片、器官或培养细胞。

大肠杆菌的 LacZ 基因编码 β-半乳糖苷酶，广泛用作基因表达的报告基因以及细胞谱系研究中的示踪标记。

该方法可用于发育生物学领域的关键问题研究，例如胚胎发育过程中基因表达模式的分析。该技术的主要优势在于其高灵敏度、操作简便快捷，并可在整体组织样本中直接观察染色结果，或在样本经石蜡包埋切片后以更高分辨率进行观察。本次演示实验的主讲人为 Maria Jose Blanco 博士、Anabel Learte 博士、Emma Munoz 博士和 Miguel Marchena 博士，他们均为我实验室的高级博士后研究人员。首先，将经戊二醛固定的、表达半乳糖苷酶的转基因胚胎置于新配制的 X-gal 漂洗缓冲液中，在室温下孵育 10 分钟。使用野生型同窝胚胎作为酶反应的阴性对照。随后，将漂洗缓冲液更换为 pH 8–9 的 X-gal 染色液。避光条件下于 37°C 孵育 2 小时至过夜。

tracing-gene-expression-through-detection-galactosidase-activity

Research

科研

JoVE Journal

Developmental Biology

发育生物学

通过检测全小鼠胚胎β乳糖酶活性追踪基因表达

我们描述了一种荧光报告基因检测方法，可用于快速鉴定和表征调控小鼠胚胎干细胞维持与自我更新的基因。...

Oct4GiP 报告基因检测法用于研究调控小鼠胚胎干细胞维持与自我更新的基因

本视频展示了一种评估小鼠胚胎中视黄酸活性的技术。从小鼠胚胎中分离细胞后，将这些细胞与视黄酸（RA）报告细胞共培养。胚胎细胞产生的视黄酸可诱导报告细胞中β-半乳糖苷酶的表达，从而指示胚胎细胞中存在视黄酸活性。...

利用报告细胞共培养研究小鼠胚胎细胞的视黄酸生成

本文介绍了一种优化的实验方案，用于对胎鼠进行基因分型、染色及样本制备，以实现对整个动物体内周围伤害性感受器轴突投射的成像，从而有效评估遗传工程小鼠发育过程中感觉轴突生长的表型特征。...

小鼠胚胎感觉轴突投射的全组织成像

利用一种双元遗传策略，我们提供了一种详细的神经环路示踪实验方案，适用于在Cre介导的重组后表达互补性跨突触示踪剂的小鼠。由于细胞特异性的示踪剂表达由基因编码决定，本实验方法可在单细胞分辨率下研究小鼠胚胎脑发育过程中神经环路的形成与成熟。...

胚胎小鼠大脑中的条件性遗传跨突触示踪

本方案介绍了一种进行定量、单细胞分析的方法 原位...

小鼠植入前胚胎谱系特化过程中蛋白质表达的定量分析

本实验方案旨在描述一种功能缺失和功能获得的方法，可用于鉴定新生素（neogenin）作为植入前小鼠胚胎中滋养外胚层和内细胞团分化的阶段特异性受体。...

利用功能缺失与功能获得方法研究小鼠着床前胚胎早期细胞命运决定因子

本文介绍一种通过将慢病毒载体直接注射到受精卵的卵周隙中，以高效促进外源基因整合并制备首建者转基因小鼠的实验方案。...

慢病毒介导的转基因小鼠制备：一种用于直接研究 Founder 小鼠的简单高效方法

小鼠受精卵和早期胚胎由透明带保护，透明带是一种糖蛋白基质，可形成阻碍基因递送的屏障。本文介绍了一种利用激光穿孔透明带，通过慢病毒载体转导胚胎细胞并制备转基因小鼠的实验方案。...

激光辅助慢病毒基因递送至小鼠受精卵

本文建立了一种用于制备受精后小鼠胚胎单细胞和细胞核高质量悬液的流程，以进行单细胞和单细胞核测序。...

从上胚层到原肠胚形成结束：突变小鼠全胚胎的单细胞RNA测序

我们描述了在早期胚胎发育过程中，于单细胞水平上可视化合子基因组激活期间新生转录的方法。...

在早期胚胎的单细胞中可视化合子基因组激活

学习检测全小鼠胚胎β-galactosidase活性的标准实验方案，用于追踪基因表达模式。该方法操作简便、灵敏度高，适用于发育生物学研究，可直接观察整体组织染色或石蜡切片后的高分辨率结果。

通过检测完整小鼠胚胎中β-半乳糖苷酶活性示踪基因表达

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