Name: 斜扫描激光检眼镜 (奥斯陆) 与光学相干层析成像 (OCT) 的多模态视网膜成像 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 22 s
Description: 了解斜扫描激光检眼镜与光学相干层析成像的多模态视网膜成像技术，用于获取大视野三维荧光和OCT图像。该方法可量化血视网膜屏障破坏并评估毛细血管功能，有助于诊断糖尿病视网膜病变等前视网膜疾病。

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资金来自波士顿医学中心的埃文斯医学基金会，以及美国国立卫生研究院（NIH）项目5R01CA183101的子合同、波士顿大学临床与转化科学研究所（BU-CTSI）试点资助项目1UL1TR001430、波士顿大学-乔斯林试点项目，以及波士顿大学临床与 translational 科学研究所KL2TR001411项目。

本文所述所有方法均已获得波士顿医学中心动物护理与使用委员会（ACUC）的批准。
1. 系统设置
<ol>
	<li>oSLO 系统
	<ol>
		<li>使用超连续谱激光器作为系统的激光光源。
		<ol>
			<li>通过二向色镜（DM1）将可见光范围（450–650 nm）与较长波长范围（650–2000 nm）分离。激光束通过偏振分束器（PBS）后，利用一对色散棱镜展宽光谱。</li>
			<li>放置狭缝以选择激发波长范围（475–495 nm）。使用反射镜将滤波后的光束反射回棱镜对，然后将光耦合进单模光纤（SMF 1）。</li>
			<li>使用光谱仪确认单模光纤输出端的波长选择。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>将单模光纤连接至两个级联的光纤耦合器，如图2所示。第二个光纤耦合器的一个光纤输出端口将光传输至oSLO系统。</li>
		<li>在oSLO系统中首先对激光进行准直。
		<ol>
			<li>通过检流计镜（GM1）偏转激光。使用1:1望远镜系统将激光继而传递至第二个检流计镜（GM2），再通过3:1望远镜系统进一步传递至眼睛瞳孔。</li>
			<li>在3:1望远镜系统内安装二向色镜（DM2），用于反射荧光信号。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>将3:1望远镜系统和二向色镜（DM2）安装在定制的燕尾滑轨上，以偏移光轴并实现如图3所示的斜向扫描照明。使用卡尺精确控制所需的偏移长度。</li>
		<li>荧光成像光路。
		<ol>
			<li>由二向色镜反射荧光，并将其传递至第三个检流计镜，以消除慢轴扫描的偏转。</li>
			<li>通过另一个1:1望远镜系统将光传递至成像物镜。将上述光学元件安装在平移台上。 
			注：在第三个检流计镜（GM3）下方安装了两个额外的平移台，以提供自由度冗余，便于优化成像。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>将最终的成像系统安装在一个具有三个自由度（旋转及两个平移轴）的平台上。使用面阵相机采集横截面荧光图像。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>光学相干断层扫描系统
	<ol>
		<li>使用相同的超连续谱激光器作为系统的激光光源。
		<ol>
			<li>通过另一二向色镜（DM3）将近红外（NIR）范围（650–900 nm）与其余光（650–2000 nm）分离。使用长通滤光片进一步将带宽限制在800–900 nm。将光束耦合进单模光纤（SMF 2）。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>将单模光纤连接至两个级联光纤耦合器的另一个输入端口，以与蓝色oSLO激发光合并。将第二个光纤耦合器的第二个输出端口的光导向OCT参考臂，该参考臂包含可变中性密度滤光片（VNDF）、色散补偿板和反射镜。 
		注：从参考臂和眼睛返回的光在第二个光纤耦合器处重新组合，并被输送至OCT光谱仪以采集信号。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>数据采集
	<ol>
		<li>使用基于LabVIEW编写并修改自OCTA7,8,9,10扫描协议的数据采集系统软件。对于每个B扫描，模拟输出板（AO1）输出占空比为80%、500步的锯齿波，用于控制x'方向快速扫描镜GM2。</li>
		<li>在每一步触发线扫描相机，仅在镜面处于前向扫描方向时采集OCT数据。将线扫描相机的曝光时间设置为17 µs。</li>
		<li>为获取OCTA信号，在同一B扫描位置重复测量5次。</li>
		<li>将AO输出速率设为100 kHz，OCT A线速率为50 kHz。通过斜坡波形控制y'方向慢速扫描镜GM1。使去扫描镜GM3与GM1同步，以消除慢扫描的偏转。</li>
		<li>通过另一模拟输出板（AO2）触发面阵相机，在每个y'位置采集一幅荧光图像。可根据需要裁剪成像尺寸或合并邻近像素，以提高速度和灵敏度。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 系统校准
<ol>
	<li>调节oSLO光源的狭缝以选择蓝色激发波长。使用光谱仪监测光谱范围，使其保持在约475–490 nm。</li>
	<li>调节鸽尾架滑块，使光轴偏移约5 mm。这将在大鼠瞳孔处产生约1.7 mm的偏移，从而在视网膜上形成约15°的斜入射角。</li>
	<li>将荧光检测光路的平移台同样调节偏移5 mm。</li>
	<li>将最终的荧光成像系统调整至约30°。</li>
	<li>使用功率计测量光功率。确保蓝色oSLO激发光功率不超过0.2 mW，OCT激光功率不超过0.8 mW，以避免对视网膜造成损伤。 
	注意：根据ANSI标准，在可见光范围内，视网膜允许的最大辐射暴露（MPE）水平约为2 mW7,8。根据Delori et al.9提出的公式，近红外光的MPE约为可见光的两倍，即约4 mW。</li>
</ol>
3. 在体 内 动物实验
<ol>
	<li>将一只12周龄的雄性Long Evans大鼠转移至诱导室中。使用异氟烷蒸发器，以2 L/min的流速将4.5%异氟烷与氧气混合，对大鼠进行10分钟麻醉。
	<ol>
		<li>通过趾间夹捏测试确认麻醉深度，若无回缩反射则表明麻醉充分。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>诱导完成后，将大鼠固定于五轴（x、y、z平移，偏航和俯仰）固定装置上。在长时间实验中，通过加热平台、循环温水毯或其他合适方式提供辅助加热。在实验其余阶段，以1.5%异氟烷、2升/分钟的流速维持麻醉。若未使用带主动排气功能的诱导室，则应将诱导室置于逆流或下吸式工作台面，或置于排风罩下方，以清除异氟烷气体。</li>
	<li>使用1%托吡卡胺滴眼液散瞳，持续2分钟。如有需要，可在大鼠眼部滴加0.5%盐酸丁卡因滴眼液以增强局部麻醉效果。实验过程中至少每分钟使用一次市售人工泪液保持眼球湿润。</li>
	<li>使用1 mL注射器和29G针头，将荧光素钠（10% w/w）或FITC（10% w/w）用无菌生理盐水稀释后（0.1–0.3 mL），经尾静脉注射。</li>
	<li>开启激光光源。在对光过程中，放置中性密度滤光片以衰减蓝光激发光。将OCT光功率调节至约0.8 mW，蓝光功率&#60;0.01 mW，以避免白内障形成。</li>
	<li>启动检流计扫描与对光模式。调节眼球高度，使激光光斑在角膜上保持静止。调整大鼠眼球位置，使瞳孔边缘大致与激光束垂直，并将激光束偏移至眼球顶点中心约1.5 mm处。</li>
	<li>进一步调节动物固定装置，直至OCT图像达到最佳质量。在x'快速扫描方向上，确保横截面B扫描图像呈平坦状态；切换至y'慢速扫描方向时，由于斜向扫描，横截面B扫描图像应呈现倾斜状态。</li>
	<li>移除蓝光激发光的中性密度滤光片，并监控相机的实时图像。横截面荧光图像应显示不同深度的血管结构。
	<ol>
		<li>调节最终荧光成像系统的焦距以达到最佳聚焦状态。允许在横向平面对眼球位置进行微调，以获得最优的oSLO图像质量。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>完成对光后，开始同步采集OCTA和容积荧光素血管造影（vFA）图像。</li>
	<li>使用Matlab构建OCTA和oSLO的容积图像。相关算法已在先前文献中详细描述10。通过图像分割生成深度分辨的视网膜血管结构。</li>
	<li>成像完成后，关闭激光，释放动物，在其眼部涂抹适量眼用软膏，随后将动物置于恢复箱中。</li>
	<li>在动物恢复足够意识、能够维持胸卧位之前，不得无人看护，或依照机构规定执行监护。</li>
</ol>

<ol><li>Webb, R. H., Hughes, G. W., Delori, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+scanning+laser+ophthalmoscope%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Optics%22%5BJournal%5D)">Confocal scanning laser ophthalmoscope.</a> Applied Optics. 26 (8), 1492-1499 (1987).</li>
<li>Roorda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+scanning+laser+ophthalmoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy.</a> Optics Express. 10 (9), 405-412 (2002).</li>
<li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4638169/">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li>
<li>de Carlo, T. E., Romano, A., Waheed, N. K., Duker, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+optical+coherence+tomography+angiography+%28OCTA%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Retina+and+Vitreous%22%5BJournal%5D)">A review of optical coherence tomography angiography (OCTA).</a> International Journal of Retina and Vitreous. 1 (1), 5(2015).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Optical+Coherence+Tomography+Angiography+of+Choroidal+Neovascularization+in+Age-Related+Macular+Degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Quantitative Optical Coherence Tomography Angiography of Choroidal Neovascularization in Age-Related Macular Degeneration.</a> Ophthalmology. 121 (7), 1435-1444 (2014).</li>
<li>Chen, C. -L., Wang, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+based+angiography+%5BInvited%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography based angiography [Invited].</a> Biomedical Optics Express. 8 (2), 1056-1082 (2017).</li>
<li>Yi, J., Chen, S. Y., Shu, X., Fawzi, A. A., Zhang, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+retinal+imaging+using+visible-light+optical+coherence+tomography+guided+by+scanning+laser+ophthalmoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Human retinal imaging using visible-light optical coherence tomography guided by scanning laser ophthalmoscopy.</a> Biomedical Optics Express. 6 (10), 3701-3713 (2015).</li>
<li>Zhang, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual-band+spectral-domain+optical+coherence+tomography+for+in+vivo+imaging+the+spectral+contrasts+of+the+retinal+nerve+fiber+layer%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Dual-band spectral-domain optical coherence tomography for in vivo imaging the spectral contrasts of the retinal nerve fiber layer.</a> Optics Express. 19 (20), 19653-19667 (2011).</li>
<li>Delori, F. C., Webb, R. H., Sliney, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximum+permissible+exposures+for+ocular+safety+%28ANSI+2000%29%2C+with+emphasis+on+ophthalmic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Optical+Society+of+America+a-Optics+Image+Science+and+Vision%22%5BJournal%5D)">Maximum permissible exposures for ocular safety (ANSI 2000), with emphasis on ophthalmic devices.</a> Journal of the Optical Society of America a-Optics Image Science and Vision. 24 (5), 1250-1265 (2007).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volumetric+fluorescence+retinal+imaging+in+vivo+over+a+30-degree+field+of+view+by+oblique+scanning+laser+ophthalmoscopy+%28oSLO%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Volumetric fluorescence retinal imaging in vivo over a 30-degree field of view by oblique scanning laser ophthalmoscopy (oSLO).</a> Biomedical Optics Express. 9 (1), 25-40 (2018).</li>
</ol>

Ji Yi 拥有 oSLO 的待批专利。其他作者声明不存在竞争性财务利益。

在此，我们描述了oSLO，一种 体内 视场角超过30°的容积荧光视网膜成像技术。与目前眼科临床标准成像方法光学相干断层扫描（OCT）相比，光学扫描激光检眼镜（oSLO）具备类似的三维成像能力，同时可提供OCT不敏感的荧光对比度。oSLO的优势在于仅需一次光栅扫描，因而可无缝结合OCT，实现结构成像与荧光成像两种互补的容积成像技术。
在本实验方案中，获得良好图像质量的关键在于大鼠眼睛的清晰度。如果 oSLO 图像模糊，应检查是否存在白内障的形成。多种因素，如氯胺酮/赛拉嗪麻醉、角膜干燥以及蓝光过度暴露，均可能导致白内障形成，从而显著降低图像质量。为预防白内障，应避免蓝光连续照射超过2分钟；每分钟至少使用一次人工泪液以防止角膜干燥；在每次成像间隔期间，通过阻断光线使眼睛至少休息30秒。
我们预计，光学扫描激光检眼镜（oSLO）将显著影响荧光成像的临床实践。我们已证明，其深度分辨能力可有效消除外层视网膜的信号，从而获得高达单毛细血管水平的高对比度容积荧光血管造影（FA）图像，这是传统SLO无法实现的。显著改善的图像...

现代光学成像技术极大地推动了眼科学和视觉科学研究的发展，因为视网膜易于通过光线进行观察。荧光视网膜成像是诊断和管理脉络膜视网膜血管疾病（如糖尿病性视网膜病变（DR）和年龄相关性黄斑变性（AMD））的重要工具，这两种疾病均是美国致盲的主要原因。
然而，利用荧光成像技术获取大视野（FOV）、三维（3D）视网膜图像仍然具有挑战性。眼底照相不具备深度分辨能力，也无法抑制散射光，因此来自不同深度的信号混合会降低图像质量。扫描激光检眼镜（SLO）和共焦SLO（cSLO）可通过共焦门控技术减少散射光的影响1。然而，由于其焦深受限，SLO或cSLO难以获取完整的人类视网膜三维图像。自适应光学SLO（AOSLO）通过校正人眼引入的波前像差，可提供极高的分辨率和对比度。但AOSLO仍需通过z轴堆叠实现容积成像2。光学相干断层扫描（OCT）3及其血管成像技术（OCTA）系统克服了上述限制，能够提供三维（3D）解剖结构和血管图像4,5,6，但OCT无需染料的特性使其无法显示提示血管功能障碍的渗漏现象。
本方案描述了一种用于三维容积荧光视网膜成像的新型多模态平台，即斜向扫描激光检眼镜（oSLO）。在该成像系统中，通过鸽尾滑块产生斜向扫描，最终成像系统以一定角度对准，以获取荧光的横截面图像。该系统采用激光扫描方法，这些技术可方便地与光学相干断层扫描（OCT）结合，作为互补的三维结构成像模态。当前系统在大鼠视网膜中的深度分辨率为约25 µm，视场角为30°。本质上，oSLO实现了OCT的荧光版本，可在大视场范围内与OCT和OCT血管成像（OCTA）同步联合使用。
在本实验方案中，我们将描述光学扫描激光检眼镜（oSLO）的装置设置、校准与构建方法、以及相关方法 体内 大鼠视网膜成像及代表性结果

<table><tbody><tr><td>超连续谱激光光源</td><td>NKT Photonics</td><td>SuperK EXTREME EXU-OCT6</td><td></td></tr><tr><td>二向色镜（DM1）</td><td>Thorlabs</td><td>DMLP650R</td><td></td></tr><tr><td>二向色镜（DM2）</td><td>Chroma</td><td>ZT514/1064rpc</td><td></td></tr><tr><td>二向色镜（DM3）</td><td>Thorlabs</td><td>DMLP900R</td><td></td></tr><tr><td>单模光纤（SMF 1）</td><td>Thorlabs</td><td>P3-460B-FC-2</td><td></td></tr><tr><td>单模光纤（SMF 2）</td><td>Thorlabs</td><td>P3-780A-FC-2</td><td></td></tr><tr><td>光纤耦合器</td><td>Thorlabs</td><td>TW850R5A2</td><td></td></tr><tr><td>1:1 望远镜系统</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-100-A&amp;times;2</td><td></td></tr><tr><td>3:1 望远镜系统</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-150-A&amp;times;2</td><td></td></tr><tr><td>3:1 望远镜系统</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-50-A&amp;times;2</td><td></td></tr><tr><td>扫描振镜（GM1, GM2）</td><td>Thorlabs</td><td>GVS201&amp;times;2</td><td></td></tr><tr><td>去扫描振镜（GM3）</td><td>Thorlabs</td><td>GVS011</td><td></td></tr><tr><td>物镜</td><td>Olympus</td><td>UplanSApo 20&amp;times;/0.75</td><td></td></tr><tr><td>最终成像系统</td><td>Olympus</td><td>UplanFL N 10&amp;times;/0.3</td><td></td></tr><tr><td>最终成像系统</td><td>Computar</td><td>12-36mm/1:2.8</td><td></td></tr><tr><td>相机</td><td>PCO</td><td>Pco.pixelfly usb</td><td></td></tr><tr><td>滤光片</td><td>Thorlabs</td><td>FEL0800</td><td></td></tr><tr><td>带安装座的连续可变中性密度滤光片</td><td>Thorlabs</td><td>NDC-50C-4M-A</td><td></td></tr><tr><td>线阵扫描相机</td><td>Thorlabs</td><td>SPL2048-140K</td><td></td></tr><tr><td>模拟输出板卡（AO1）</td><td>National Instrument</td><td>PCI-6731</td><td></td></tr><tr><td>模拟输出板卡（AO2）</td><td>National Instrument</td><td>PCIe-6351</td><td></td></tr><tr><td>长通滤光片</td><td>Thorlabs</td><td>FEL0800</td><td></td></tr></tbody></table>

通过斜扫激光检眼镜（oslo）与光学相干断层扫描（oct）实现多模态容积式视网膜成像

Multimodal Volumetric Retinal Imaging by Oblique Scanning Laser Ophthalmoscopy (oSLO) and Optical Coherence Tomography (OCT)

尽管荧光成像在眼科领域广泛应用，但现有的视网膜成像技术仍难以实现大视野（FOV）三维（3D）荧光视网膜成像，因为这类成像通常需要通过z轴堆叠来构建三维数据集。较新的光学相干断层扫描（OCT）及OCT血管成像（OCTA）系统虽已克服上述限制，可提供三维解剖与血管图像，但OCT无需染料的特性使其无法显示提示血管功能障碍的渗漏现象。本实验方案介绍一种新型斜向扫描激光检眼镜（oSLO）技术，可实现三维容积荧光视网膜成像。该成像系统的装置通过燕尾滑块实现斜向扫描，并将最终成像系统以特定角度对准，以获取荧光横截面图像。该系统采用激光扫描方法，因此可便捷地整合OCT作为互补的三维结构成像模态。 体内 在大鼠视网膜上进行成像。通过静脉注射荧光素溶液，生成容积荧光素血管造影（vFA）。

图4a 显示大鼠视网膜的横断面OCT图像。图4b–4c 显示在同一时间获取的OCTA和oSLO vFA的相同视网膜横断面图像。oSLO可实现类似于OCT B扫描的横断面荧光血管造影（FA）。与OCTA相比，oSLO vFA横断面图像可清晰识别神经纤维层（NFL）和神经节细胞层（GCL）中的血管，以及外丛状层（OPL）中的毛细血管。图4d 和 4g 显示OCTA和oSLO vFA图像的浅层结构。与OCTA不同，oSLO vFA图像（图4g）通过利用荧光发射对比度避免了运动伪影（图4d 中的垂直条纹）。通过比较视网膜中层内的oSLO vFA（图4e）和OC...

本文介绍了一种利用新型多模态成像平台获取大视野（FOV）三维（3D）荧光与光学相干断层扫描（OCT）视网膜图像的实验方案。我们将阐述系统配置、对准方法及操作流程。 在体 将演示成像过程，并提供代表性结果。

通过斜扫激光检眼镜（oSLO）与光学相干断层扫描（OCT）实现多模态容积式视网膜成像

尽管荧光成像在眼科领域广泛应用，大视野（FOV）三维（3D）荧光视网膜图像仍是一个重大挑战。

该方法有助于解答眼科及视网膜成像领域中的关键问题，例如血-视网膜屏障破坏和视网膜毛细血管功能的成像与定量分析。该技术的主要优势在于，仅通过一次光栅扫描，利用斜向扫描激光即可获得大视野、三维、多对比度的视网膜图像。该技术的应用前景包括糖尿病性视网膜病变及其他视网膜前疾病的诊断。由于光学扫描激光检眼镜（oSLO）能够获取视网膜微血管系统（包括三维空间下单个毛细血管）的高对比度图像，因此尽管该方法可为视网膜成像提供重要信息，也可应用于采用常规物镜的其他成像系统。例如对小鼠皮层进行活体成像。在斜向扫描激光检眼镜（oblique scanning laser ophthalmoscopy, oSLO）系统中，采用超连续谱激光源作为系统的激光光源。第一块二向色镜将可见光波段与较长波长波段分离开来。光束通过偏振分束器后，利用一对色散棱镜扩展光谱。使用狭缝选择激发波长范围。然后，通过反射镜将滤波后的光束反射回棱镜对，以将光耦合进单模光纤。使用光谱仪来确认单模光纤输出端的波长选择。单模光纤连接至两个级联的光纤耦合器。来自第二个光纤耦合器的一个光纤输出端口将光传输至oSLO系统。为了在oSLO系统中准直激光，激光首先被一个检流计镜反射。一个1:1的望远镜系统将激光传递至第二个检流计镜，随后一个3:1的望远镜系统进一步将激光传递至眼睛的瞳孔。在3:1望远镜系统内的二向色镜用于反射荧光信号。三比一望远镜系统和二向色镜安装在定制的燕尾滑块上，以偏移光轴并形成斜向扫描照明。斜向照明可在无需切片的情况下实现容积荧光成像。通过偏移激光，使斜向光束聚焦于视网膜，随后斜向探测可沿斜向光束路径捕获断层荧光图像。为了构建荧光成像光路，荧光被二向色镜反射后传递至第三振镜。随后，荧光通过另一组1:1望远镜系统传递至成像物镜。在第三振镜下方安装了两个额外的平移台，以提供冗余的自由度，从而优化图像质量。最终的成像系统安装在一个具有三个自由度的平台上，包括旋转以及两个方向的平移。采用平面相机来采集横截面荧光图像。另一块二向色镜将后向红外光与其余光分离。使用长通滤光片进一步将带宽限制在800至900纳米之间。将光束耦合进单模光纤。单模光纤连接至两个级联光纤耦合器的另一个输入端口，以与蓝色oSLO激发光合并。来自第二个光纤耦合器第二输出端口的光被导向OCT参考臂，该参考臂包含色散补偿板、可变中性密度滤光片和反射镜。参考臂和眼睛返回的光在第二个光纤耦合器处重新组合，并被传送到OCT光谱仪以采集信号。使用基于Labview编写并由扫描OCTA扫描协议修改而来的数据采集系统软件。对于每个B扫描，模拟输出板输出一个占空比为80%、包含500步的锯齿波，用于控制x-prime快速扫描镜。仅在镜面处于正向扫描方向时，于每一步触发线扫描相机以获取OCT数据。将线扫描相机的曝光时间设置为17微秒。为获取OCTA信号，需在同一B扫描位置重复测量五次。将AO输出速率设置为100千赫兹，OCT A线速率为50千赫兹。通过斜坡波形控制y'轴慢速扫描镜GM1。将解扫描镜GM3与GM1同步，以实现慢速扫描的解扫描。通过另一个模拟输出板触发平面相机，以在每个 y' 位置捕获一张荧光图像。根据需要裁剪成像尺寸或将相邻像素合并，以提高速度和灵敏度。首先通过在脚趾间施加夹捏刺激，确认大鼠缺乏回缩反射，以判断麻醉水平是否适当。麻醉诱导后，将大鼠置于固定装置上。连接鼻罩以在实验剩余过程中维持麻醉状态。在大鼠眼部滴加5滴盐酸丁卡因眼药水，进行局部麻醉。然后使用1%托吡卡胺滴眼液散大瞳孔。散瞳两分钟后，用1毫升注射器和29号针头经尾静脉注射10%荧光素钠或10%异硫氰酸荧光素（FITC）生理盐水稀释液。随后打开激光光源，并放置中性密度滤光片，以在准直过程中减弱蓝光激发光强度。测量蓝光的功率，确保其低于10微瓦。然后切换至光学相干断层扫描光源，确保其功率接近8毫瓦。打开振镜的电源，该振镜用于控制激光的方向。调整眼球高度，使激光光斑在角膜上保持静止。调整眼睛位置，使瞳孔边缘大致与激光垂直。并将激光偏移至距离眼球顶点中心约1.5毫米处。进一步调整动物固定装置，直至光学相干断层扫描图像达到最佳质量。在 x' 快速扫描方向上，确保横截面 b-scan 图像呈现为平坦状态。当切换至 y' 慢速扫描方向时，由于斜向扫描，应确保横截面 b-scan 图像呈现倾斜状态。移除蓝光激发的中性密度滤光片，并监控相机的实时画面。应出现一幅横截面荧光图像，显示不同深度的血管。调整最终荧光成像系统的焦距以达到最佳聚焦状态，并在水平面内对眼位进行微调，以获得最佳的斜向扫描激光检眼镜图像质量。对位完成后，开始同步采集光学相干断层扫描血管成像和容积荧光素血管造影。该图像显示了大鼠视网膜的横断面光学相干断层扫描图像。这是同一区域的光学相干断层扫描血管成像（OCTA）图像。以及斜向扫描激光检眼镜和容积荧光素血管造影图像的横断面荧光素血管造影，即 oSLO-VFA。类似于光学相干断层扫描的B扫描。与OCTA相比，斜扫激光检眼镜和容积荧光素血管造影的横截面图像能够清晰识别出外丛状层中的毛细血管。此处显示的是视网膜浅层的OCTA图像。图像中可见呈垂直条纹形式的伪影。oSLO-VFA 通过利用荧光发射对比度避免了运动伪影。在视网膜中层内，oSLO 荧光血管造影图像中可清晰显示垂直走行的血管。但在OCTA中不明显。进行此操作时，应注意避免激光对眼睛持续照射超过两分钟。防止角膜干燥，并在每次成像区域之间通过阻断光线使眼睛至少休息30秒。完成此操作后，可进一步采用其他方法，例如对表达荧光蛋白的转基因小鼠进行成像，以回答更多科学问题，比如特定视网膜细胞类型如何发生变化，以及在已知疾病中观察到的牵拉现象与其他变量之间的关系。

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斜扫描激光检眼镜 (奥斯陆) 与光学相干层析成像 (OCT) 的多模态视网膜成像

总视网膜血流量通过多普勒光学相干断层扫描结合半自动分级软件进行测量。...

视网膜循环的多普勒光学相干断层成像

光声眼科成像（PAOM）是一种基于光学吸收的成像技术，可为当前可用的眼科成像技术提供互补的视网膜评估。我们报道了将PAOM与谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）结合，用于大鼠视网膜的同步多模态成像。...

集成光声眼底显微术与谱域光学相干断层扫描

来源： Jagodzinska, J., et. al.，活体小鼠视网膜神经节细胞的光学相干断层扫描成像。 J. Vis. Exp. (2017)...

使用光学相干断层扫描技术对小鼠视网膜进行活体成像

本文描述了一种利用高分辨率谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）对小鼠视网膜进行活体成像的实验方案。重点针对视乳头周围区域的视网膜神经节细胞（RGC），介绍了多种扫描与定量分析方法。...

光学相干断层扫描：活体成像小鼠视网膜神经节细胞 In Vivo

本文展示了一种利用高分辨率谱域光学相干断层扫描（HR-SD-OCT）将基因治疗药物递送至视网膜下腔、评估其分布范围并表征光感受器活性的新方法。...

超高分辨率小鼠光学相干断层扫描技术在视网膜基因治疗研究中辅助眼内注射

本文描述了一种新型的光声显微成像与光学相干断层扫描双模态系统的构建及其操作流程，可用于对兔子等较大动物的脉络膜视网膜进行无创、免标记成像。...

活体兔眼脉络膜视网膜新型光声显微与光学相干断层扫描双模态成像

本文介绍了利用光学相干断层扫描和视动反应对啮齿类动物进行结构和视觉指标评估的详细方案。该结果为眼科及神经科学研究提供了有价值的见解。...

利用光学相干断层扫描和视动反应作为小鼠和大鼠视觉系统的结构与功能读出指标

本文介绍了使用谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）在视网膜变性、青光眼、糖尿病性视网膜病变和近视等模型中活体可视化视网膜及眼部结构的方法。...

利用光学相干断层扫描对啮齿类动物模型中眼部疾病的体内结构评估

光学相干断层扫描在小鼠视网膜病变模型中的应用

眼前段高分辨率光学相干断层扫描（HR-OCT）是一种用于眼表鳞状细胞肿瘤（OSSN）诊断及治疗评估的前景良好的无创性检查方法。本文介绍了该技术的系统设置、扫描方法以及典型的诊断结果。...

眼前段高分辨率光学相干断层扫描在眼表鳞状细胞肿瘤诊断及治疗监测中的应用

了解斜扫描激光检眼镜与光学相干层析成像的多模态视网膜成像技术，用于获取大视野三维荧光和OCT图像。该方法可量化血视网膜屏障破坏并评估毛细血管功能，有助于诊断糖尿病视网膜病变等前视网膜疾病。

通过斜扫激光检眼镜（oSLO）与光学相干断层扫描（OCT）实现多模态容积式视网膜成像

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