Expression and Purification of Mammalian Bestrophin Ion Channels

Alec Kittredge; Nancy Ward; Austin Hopiavuori; Yu Zhang&#160;; Tingting Yang

doi:10.3791/57832

JoVE Journal
Biochemistry

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Expression and Purification of Mammalian Bestrophin Ion Channels

哺乳动物 Bestrophin 离子通道的表达与纯化

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08:12 min

August 2, 2018

DOI: 10.3791/57832-v

Alec Kittredge¹, Nancy Ward¹, Austin Hopiavuori¹, Yu Zhang ¹, Tingting Yang¹

¹Department of Pharmacology and Physiology,University of Rochester, School of Medicine and Dentistry

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

离子通道的纯化往往具有挑战性, 但一旦达到, 它就有可能允许对通道的功能和结构进行体外调查。在这里, 我们描述的步骤, 以表达和纯化哺乳动物 bestrophin 蛋白, 一个家庭的 Ca^{2 +}激活 Cl 通道.

该方法可以帮助回答与哺乳动物离子通道生物物理学相关的关键问题，包括但不限于离子通道的 bestrophin 家族。该技术的主要优点是它可以应用于其他类型的离子通道，并为各种下游体外检测生成关键产物。这项技术的影响延伸到 bestrophinopathis 的治疗，因为使用纯化蛋白的检测有助于我们了解 bestrophin 通道如何在视网膜中工作以及 BEST1 基因突变如何导致黄斑变性。

病毒感染前 24 小时，将等体积的台盼蓝加入 15 微升等分试样的 HEK293F 细胞培养物中，并在显微镜下使用血细胞计数器检查细胞密度和活力。进行细胞计数后，将 0.6 乘以 10 至 6 个细胞/毫升，以 500 mL 的体积接种在两个一次性 2 L 培养瓶中。将培养瓶放入含 37% 二氧化碳的 8 摄氏度加湿培养箱中。

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