Name: 数据库引导流式细胞术评价骨髓细胞成熟 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 5 s
Description: 学习多参数流式细胞术诊断骨髓增生异常综合征的方法，利用数据库比对正常髓系细胞成熟路径，量化细胞群体差异，减少分析主观性，提高血液病诊断准确性。

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本研究中使用的抗体由BD Biosciences提供。作者感谢法国圣艾蒂安大学医院分子生物学与血液学实验室的同事帕斯卡·弗兰德兰-格雷斯塔博士（Dr. Pascale Flandrin-Gresta）为第二例骨髓增生异常综合征（MDS）病例的二代测序（NGS）数据解读提供的专业支持。作者感谢临床血液科医生对本研究的关注与参与，也感谢患者及健康供者同意参与本研究。作者同时感谢“莱斯·阿米·德·雷米”基金会（"Les Amis de Rémi" Foundation）为本研究论文发表提供的经费支持。

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<li>Westers, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotypic+analysis+of+erythroid+dysplasia+in+myelodysplastic+syndromes.+A+report+from+the+IMDSFlow+working+group%29%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Immunophenotypic analysis of erythroid dysplasia in myelodysplastic syndromes. A report from the IMDSFlow working group).</a> Haematologica. 102, 308-319 (2017).</li>
<li>Shen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+immunophenotypic+findings+in+chronic+myelomonocytic+leukemia+and+its+utility+in+monitoring+treatment+response%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry immunophenotypic findings in chronic myelomonocytic leukemia and its utility in monitoring treatment response.</a> European Journal of Haematology. 95, 168-176 (2015).</li>
</ol>

作者声明不存在任何竞争性财务利益。圣艾蒂安大学医院血液学实验室流式细胞术部门&#160;是EuroFlow联盟的成员。

骨髓穿刺物的质量可能影响最终结果。骨髓穿刺物的血液稀释可能会因祖细胞或前体细胞的缺失，而导致不同成熟阶段细胞分布的失真。采用整体裂解法可能有助于在流式细胞术分析中校正骨髓穿刺物的血液稀释效应。此外，通过流式细胞术评估骨髓髓系发育异常的关键步骤包括样本处理与染色、数据采集和结果解读2,3。样本处理与染色应在骨髓采集后72小时内完成。数据采集应尽可能在染色后立即进行，或在4 °C避光保存不超过1小时后尽快上机检测。基于数据库指导的解读可避免对骨髓髓系细胞成熟过程的主观判断。
抗体组合和样本制备基本遵循EuroFlow方案9,10。与EuroFlow抗体组合的不同之处在于，除CD300e外，所有抗体均由BD Bioscience提供。流式细胞术的标准化使得获得高度可重复的数据成为可能11，但这需要加入致力于相...

由于目前尚无针对骨髓增生异常综合征（MDS）发生和进展过程中髓系细胞发育异常改变的特异性表型标志物，近年来提出了一种新方法，该方法基于评估髓系细胞成熟途径（成熟髓系细胞生成过程中髓系抗原表达异常）或骨髓（BM）细胞区室中不同类型细胞的异常分布1,2。
本文介绍了一种标准化应用多参数流式细胞术（MFC）的新方法，用于检测与骨髓增生异常综合征（MDS）或其他髓系血液病相关的骨髓中髓系细胞区室的发育异常改变。本研究还展示了在MFC数据分析中使用成熟度数据库的实用性。
通过使用数据库对样本制备流程、数据采集和分析进行标准化，可识别与骨髓髓系细胞发育异常改变相关的最重要表型异常。因此，需要基于明确标记且广泛认可的格式（如自动群体分离器（APS）图、直方图和点图）进行统计学筛选的亚群，以建立可用于后续分析轮次的分析策略。在骨髓增生异常综合征（MDS）中发现稳定的表型异常，将有助于对存在或不存在轻微形态学发育异常以及无细胞遗传学异常的病例进行诊断。识别具有区分能力的参数，以减少免疫表型检测组合的数量，可能简化现有的评分系统2，使其更适用于临床病理&#160;实验室。
该方法限制了流式细胞术数据的主观解读，而主观解读已在骨髓增生异常综合征（MDS）诊断中被指出存在问题3。此步骤是开发用于处理和分析流式数据的自动化工具的前提条件4。
骨髓增生异常综合征（MDS）是一组异质性的克隆性造血干细胞（HSC）疾病，其中剪接体突变与特定的表观遗传修饰因子协同作用，导致MDS表型的产生。目前研究已知，除了HSC突变外，MDS的发病机制还涉及其他因素，例如异常的免疫介导性炎症以及恶性HSC与骨髓（BM）基质微环境之间的相互作用。然而，这些机制尚未被充分阐明。MDS在临床和生物学上的高度异质性使得其诊断及最佳治疗方案的选择面临挑战。在过去十年中，多项研究表明，多参数流式细胞术（MFC）在检测细胞发育异常方面通常比形态学分析更为敏感2，但由于技术和经济上的限制，该技术难以实现标准化，其结果往往依赖于操作者的解读经验3。此外，在存在或不存在轻微形态学发育异常、缺乏细胞遗传学异常的情况下，或在低增生性MDS等临界病例中（例如原始细胞比例较低，需与其他非克隆性骨髓疾病如骨髓衰竭（i.e., 再生障碍性贫血）相鉴别时），MFC如何帮助明确MDS诊断仍不明确。同时，将伴有原始细胞增多的MDS临界病例与急性髓系白血病（AML）相鉴别仍然困难。由于上述原因，目前的临床指南尚未将MFC检测纳入MDS的最终诊断标准。2011年，美国国家综合癌症网络（NCCN）建议将MFC用于评估CD34+细胞百分比、检测阵发性睡眠性血红蛋白尿克隆以及在低增生性MDS中识别细胞毒性T细胞克隆5。后两种情况还具有治疗指导意义，因为临床数据表明，这类患者对免疫抑制治疗反应良好6。2017年NCCN指南引用国际工作组（IWG）的建议，将MFC检测发现的异常免疫表型列为MDS诊断的辅助标准之一，但未作具体说明6。此外，最新发布的WHO分类指出，在缺乏明确的形态学和/或细胞遗传学证据时，仅凭MFC结果不足以确立MDS的初步诊断7。然而，MFC可作为一项辅助检测手段，用于揭示髓系细胞成熟模式的失调，并量化患者在疾病进程中某一特定时间点与正常状态之间的“偏离程度”&#34;&#34;。
该方法适用于临床实验室，旨在通过多色流式细胞术免疫表型分析对骨髓髓系细胞中的发育异常进行评估，以优化骨髓增生异常综合征（MDS）或其他伴有发育异常的髓系疾病的诊断。

<table><tbody><tr><td>BD FACSCanto II 流式细胞仪</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>序列号: V33896301336</td><td>3 激光，4-2-2 配置；滤光片和反射镜详情：https://www.bdbiosciences.com/documents/BD_FACSCanto_II_FilterGuide.pdf</td></tr><tr><td>Awel C48-R 离心机</td><td>AWEL Industries, 法国</td><td>序列号: 910120016；型号: 320002001</td><td>低速离心机；容量为 60 支 FACS 管</td></tr><tr><td>10&amp;micro;L 和 200&amp;micro;L 移液器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>巴斯德移液管</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL Falcon 管</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACS 用聚丙烯管</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>小鼠抗人 HLA-DR</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>655874</td><td>克隆号 L243&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG2a, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 Horizon V450&lt;br/&gt;（激发最大值 404 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 448 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD45</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>560777</td><td>克隆号 HI30&lt;br/&gt; 小鼠 IgG1, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 Horizon V500（激发最大值 415 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 500 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD16</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>656146</td><td>克隆号 CLB/fcGran1 小鼠 BALB/c IgG2a, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 FITC&lt;br/&gt;（激发最大值 494 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 520 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD13</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>347406</td><td>克隆号 L138&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c × C57BL/6 IgG1, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 PE&lt;br/&gt;（激发最大值 496 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 578 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD34</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>347222</td><td>克隆号 8G12&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG1, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 PerCP-Cy5.5&lt;br/&gt;（激发最大值 482 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 678 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD117</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>339217</td><td>克隆号 104D2&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG1&lt;br/&gt; 荧光染料 PE-Cy7&lt;br/&gt;（激发最大值 496 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 785 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD11b</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>333143</td><td>克隆号 D12&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG2a, &amp;kappa;&lt;br/&gt; D12, 荧光染料 APC&lt;br/&gt;（激发最大值 650 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 660 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD10</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>646783</td><td>克隆号 HI10A&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG1, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 APC-H7&lt;br/&gt;（激发最大值 496 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 785 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD35</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>555452</td><td>克隆号 E11&lt;br/&gt; 小鼠 IgG1, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 FITC&lt;br/&gt;（激发最大值 494 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 520 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD64</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>644385</td><td>克隆号 10.1&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG1, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 PE&lt;br/&gt;（激发最大值 496 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 578 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD300e</td><td>Immunostep</td><td>IREM2A-T100</td><td>克隆号 UP-H2&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG1, k&lt;br/&gt; 荧光染料 APC&lt;br/&gt;（激发最大值 496 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 578 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD14</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>641394</td><td>克隆号 MoP9&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG2b, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 APC-H7&lt;br/&gt;（激发最大值 496 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 785 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD36</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>656151</td><td>克隆号 CLB-IVC7&lt;br/&gt; 小鼠 IgG1, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 FITC&lt;br/&gt;（激发最大值 494 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 520 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD105</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>560839</td><td>克隆号 266&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG1, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 PE&lt;br/&gt;（激发最大值 496 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 578 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD33</td><td></td><td>345800</td><td>克隆号 P67.6&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG1, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 APC&lt;br/&gt;（激发最大值 496 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 578 nm）</td></tr><tr><td>小鼠抗人 CD71</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>655408</td><td>克隆号 M-A712&lt;br/&gt; 小鼠 BALB/c IgG2a, &amp;kappa;&lt;br/&gt; 荧光染料 APC-H7&lt;br/&gt;（激发最大值 496 nm/&lt;br/&gt; 发射最大值 785 nm）</td></tr><tr><td>溶血液 10 倍浓缩液（IVD）</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>349202</td><td></td></tr><tr><td>FACSFlow 鞘液</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>342003</td><td></td></tr><tr><td>FACSDiva CS&amp;T IVD 微球</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>656046</td><td></td></tr><tr><td>RAINBOW 校准微粒，8 峰</td><td>Cytognos, 萨拉曼卡, 西班牙</td><td>SPH-RCP-30-5A</td><td>批号 EAB01, EAC01, EAD05, EAE01, EAF01, EAG01, EAH01, EAI01, EAJ01, EAK01</td></tr><tr><td>补偿微粒 多色 CompBeads（CE/IVD）</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td>货号 #51-90-9001229 + #51-90-9001291</td><td></td></tr><tr><td>Diva 软件版本 6.1.2 和 6.1.3</td><td>BD Biosciences, CA, 美国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液片剂</td><td>R&amp;D Systems, 明尼阿波利斯, 美国</td><td>5564</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白&amp;nbsp;（BSA）</td><td>Sigma-Aldrich, 法国</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>叠氮化钠 99%</td><td>Sigma-Aldrich, 法国</td><td>199931</td><td></td></tr><tr><td>Infinicyt 软件版本 1.8.0.e</td><td>Cytognos, 萨拉曼卡, 西班牙</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

基于数据库指导的流式细胞术评估骨髓髓系细胞成熟度

Database-guided Flow-cytometry for Evaluation of Bone Marrow Myeloid Cell Maturation

法国细胞计量学会（AFC）内成立的一个工作组致力于在法国范围内统一多参数流式细胞术（MFC）在髓系疾病诊断中的应用。本文所述方案于2013年9月至2015年11月期间在法国六家诊断实验室（圣艾蒂安、格勒诺布尔、克莱蒙费朗、尼斯、里尔大学医院以及马赛的帕奥利-卡尔梅特研究所）达成共识并实施，实现了骨髓样本制备和数据采集的标准化。研究基于“健康”供体个体（无任何造血系统疾病证据的个体）的骨髓样本，建立了中性粒细胞、单核细胞和红细胞系的三个成熟数据库。针对每种髓系细胞的稳健分析方法应适用于常规诊断应用。新病例可采用相同方法进行分析，并与正常数据库进行比较，从而识别定量和定性的表型异常；与正常骨髓样本数据相比，偏差超过2SD的异常应视为提示病理状态。该方法的主要局限性在于，目前临床诊断中使用的基于杂交瘤技术制备的单克隆抗体所获得的数据存在较高的变异性。制定数据采集的技术验证标准可能有助于提高MFC在骨髓增生异常综合征（MDS）诊断中的实用性。这些标准的建立需基于数据库的分析。该方法的重要优势之一是减少了分析人员在数据解读中的主观性。

本研究纳入了使用K-EDTA抗凝剂采集的54份骨髓样本。多参数流式细胞术（MFC）数据在完全不知晓患者信息的情况下进行分析。回顾性研究显示，这些骨髓样本来源于7名健康供者（5名男性和2名女性，中位年龄为47.4岁[35–48岁]）、11名无造血系统疾病证据的个体（8名男性和3名女性，中位年龄为57.9岁[35–72岁]），以及36例患有各种病理状况的患者：1例贫血伴肌酐水平降低，3例贫血伴肌酐水平升高，8例炎症性贫血，1例因维生素B12缺乏引起的贫血，4例由肝损伤导致的贫血±其他血细胞减少，3例自身免疫性溶血性贫血，5例特发性血小板减少性紫癜，1例巨噬细胞活化综合征，3例淋巴瘤治疗后完全缓解（微小残留病灶 &lt; 0.01%），以及7例伴有血液系统疾病的患者（4例骨髓增生异常综合征[MDS]，1例急性髓系白血病[AML]，1例慢性粒单核细胞白血病，1例JAK2阳性骨髓增殖性综合征）。最后一类包括18名男性和18名女性，平均年龄为60.3岁[17–100岁]。所有样本均来自高加索人种个体。构建数据库有助于识别并纠正与样本制备和数据采集相关的多个问题。...

在缺乏形态学标准或细胞遗传学信息不明确的情况下，骨髓增生异常综合征（MDS）的诊断较为困难。多参数流式细胞术（MFC）可能有助于优化MDS的诊断流程。为了在临床实践中具有应用价值，MFC分析必须基于具备足够特异性和敏感性的参数，且不同操作者之间的数据应具有可重复性。

由法国细胞计量学协会（AFC）发起的一个工作组得以建立，旨在协调多参数流式细胞术的应用……

该方法有助于解答髓系疾病（如骨髓增生异常综合征）或其他伴有髓系细胞谱系成熟异常的血液系统疾病诊断中的关键问题。该技术的主要优势在于能够降低研究者在分析和判读过程中的主观性。该方法可揭示哪些参数对骨髓增生异常综合征最具鉴别意义。它能够量化与正常髓系细胞群体之间的差异。本实验操作将由本实验室的博士后研究员 Tiphanie Picot 演示。首先，在一个 15 毫升的锥形管中，将 600 微升的原代细胞样本与 10 毫升洗涤缓冲液混合，每次洗涤使用 10 毫升新鲜洗涤缓冲液，共进行两次离心。第二次洗涤后，将沉淀重悬于400微升新鲜洗涤缓冲液中，取350微升细胞悬液转移至一个5毫升聚丙烯FACS管中，该管内已含有完整的骨干抗体组合。充分混匀细胞后，将细胞-抗体混合液等量分装至三个新的聚丙烯管中，并根据需要以新鲜洗涤缓冲液补足每管终体积至200微升。接着，加入针对目标细胞表面标志物的适量抗体，混匀后于室温避光孵育30分钟。孵育结束后，加入2毫升裂解液，混匀，在室温下避光孵育10分钟。通过离心收集裂解后的细胞，弃去每管上清液，仅保留最后50微升，注意不要扰动沉淀。用剩余的上清液轻柔重悬沉淀，并向每个样品中加入2毫升新鲜洗涤缓冲液。第二次洗涤后，弃去上清液，每管中保留约50微升残留液体，注意不要扰动沉淀。用200微升PBS重悬沉淀，并混匀，立即进行分析。在流式细胞仪上检测样本时，首先在流式细胞仪软件中新建一个实验，并根据样本名称、样本类型和日期对实验重新命名。为三个试管创建新的样本，并在实验设计中注明每个试管所使用的抗体。打开流式细胞仪设置，选择应用设置，以应用每月校准所获得的数值。新建一个全局工作表，并创建适当的散点图，用于圈定单细胞以及粒细胞、单核细胞、原始细胞和淋巴细胞群体。为补偿对照创建一个新的全局工作表。然后，在技术验证后，以中等采集速率从每支试管中采集 500,000 个事件，并将数据导出为 fcs 3.0 文件。在开始新分析之前，下载包含正常骨髓数据的 cyt 文件，这些数据涵盖中性粒细胞、单核细胞和有核红细胞系，以及 inp 格式的分析文件。然后，将数据保存到您的桌面。为了将中性粒细胞成熟过程保存至数据库，首先打开 Infinicyt 软件，然后打开对应的中性粒细胞成熟数据的 cyt 文件。在 APS 图上绘制成熟路径，并将中性粒细胞的成熟路径保存至数据库。打开需要分析的中性粒细胞谱系成熟过程的 fcs 文件。从“profiles”选项卡上传中性粒细胞成熟过程的 inp 文件。该谱系的分析分为三个步骤。首先选择 CD34 阳性、中性粒细胞定向的原始细胞。为此，使用七个门控的交集，以筛选出 CD34 阳性、CD117 阳性、HLADR 低表达、CD10 阴性、CD13 阳性、CD11b 阴性的细胞事件。随后继续分析，选择 CD117 阳性、CD34 阴性的中性粒细胞前体细胞。继续对更成熟的中性粒细胞进行分析。接着，展示单核细胞系细胞的分析结果。在APS图上绘制其成熟路径。确认指示成熟方向的箭头从不成熟的单核细胞（CD14阴性、IREM2阴性）指向成熟的单核细胞（CD14阳性、IREM2阳性）。将单核细胞系的成熟路径保存至数据库中。打开需要分析的单核细胞系成熟过程的fcs文件。上传用于单核细胞系分析的配置文件。为了鉴定单核细胞系细胞，使用四个门控的交集，以选择 CD64 高表达阳性、CD117 阳性、CD117 阴性以及 HLADR 阳性的事件。将这些事件分配至细胞群层级树中的单核细胞标签页。打开需保存在NRC数据库中的NRC细胞文件。在APS图上绘制有核红细胞的成熟路径，并将该成熟路径保存至数据库中。打开待分析的fcs文件。从配置文件中上传有核红细胞的分析模板。该谱系的分析分为两个步骤，首先选择 CD34 阳性、定向分化的红系原始细胞。此处，使用七个门的交集来选择 CD34 阳性、CD117 阳性、HLADR 低表达、CD105 阳性、CD33 阴性、CD36 阳性、CD71 阳性的细胞事件。将这些事件分配至群体层级中的 NRC 选项卡。从视野中移除 CD34 阳性的红系定向原始细胞。为了鉴定更成熟的红系细胞，使用四个门控的交集，以区分CD45阴性、CD45低表达、侧向散射低、CD36高表达以及CD71高表达的细胞。然后，从有核红细胞中去除CD36高表达且侧向散射低的血小板，并将该细胞群分配至NRC标签页。为了评估骨髓区室中的髓系成熟情况，打开需要评估病例中对应谱系的cyt文件。仅保留群体层级树中分配给中性粒细胞标签的事件可见。在APS图上绘制成熟路径，并加载对应于正常骨髓中中性粒细胞成熟的数据库，进行数据比较。如果数据至少部分兼容，软件将生成标准化的成熟差异图和参数带，以可视化成熟差异。为了比较新病例与正常骨髓样本中单核细胞在骨髓区室内的成熟情况（包括单核细胞数据库中的数据），打开对应于单核细胞系的cyt文件。仅保留细胞群层级树中分配至单核细胞标签的事件可见，并在APS图上绘制其成熟路径。加载正常骨髓中单核细胞成熟的相应数据库，并进行数据比对。为了将新病例的骨髓腔内有核红细胞成熟情况与NRC数据库中正常骨髓的数据进行比较，请打开对应于NRC谱系的cyt文件。仅保留群体层级树中分配给NRC标签的事件可见，并在APS图上绘制成熟路径。加载与正常骨髓中NRC成熟过程相对应的数据库，并进行数据比较。然后，点击“标准化成熟差异”并放大，以可视化新文件与数据库中数据之间的差异显著性。请记住，在流式细胞术数据分析中使用层次分类算法的方法具有高度主观性且本质上不准确，因为这类方法未考虑细胞群体间的重叠。将疑似骨髓增生异常综合征（MDS）的新发细胞减少症病例与髓系正常成熟数据库进行比对，可识别中性粒细胞、单核细胞及无核红细胞（NRC）谱系中异常表达的成熟抗原，即使在无细胞形态学或细胞遗传学异常的病例中亦可实现。在实施该流程时，需注意以标准化方式获取流式细胞术数据，每月进行流式细胞仪设置校准，执行每日质控检查，使用抗体前严格混匀，并严格遵守染色时间。完成该流程后，可进一步采用其他方法（如compass）对不同病例组进行比较，以回答更多问题，例如特定病例组最终的典型免疫表型特征是什么。该技术问世后，为研究克隆性造血潜能未定患者中髓系细胞成熟模式的研究人员铺平了道路，有助于可靠地识别与发育异常过程明确相关的最终典型改变。请注意，通过增加健康供体的数据量来更新数据库，可能有助于提高分析的稳健性。

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数据库引导流式细胞术评价骨髓细胞成熟

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本文提供了一种详细的实验方案，用于从小鼠模型中分离和表征骨髓增生异常综合征及急性髓系白血病的骨髓微环境细胞群体。该技术可识别疾病进展过程中非造血性骨髓微环境（包括内皮细胞和间充质基质细胞）的变化。...

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这是一种快速且全面的免疫表型分析髓系来源抑制性细胞（MDSC）并富集Gr-1的方法+ 从小鼠脾脏中分离白细胞。该方法利用流式细胞术和AutoMACS细胞分选技术富集活的Gr-1+ 在使用流式细胞荧光分选（FACS）分离髓源性抑制细胞（MDSC）之前，对白细胞进行处理 体内 和 体外...

从 naïve 小鼠和胰腺肿瘤荷瘤小鼠中分离制备髓系来源抑制性细胞（MDSC）的流式细胞术与自动磁性激活细胞分选（AutoMACS）方法

关键词：MDSC，髓系来源抑制性细胞，naïve 小鼠，胰腺肿瘤荷瘤小鼠，流式细胞术，自动磁性激活细胞分选，AutoMACS

学习多参数流式细胞术诊断骨髓增生异常综合征的方法，利用数据库比对正常髓系细胞成熟路径，量化细胞群体差异，减少分析主观性，提高血液病诊断准确性。

基于数据库指导的流式细胞术评估骨髓髓系细胞成熟度

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