检测幼虫行为反应剖面的实验协议: 在神经刺激咖啡因中的应用

鱼类模型具有许多优点，随后越来越多地用于生物医学科学。从开发到药物发现和毒理学研究。鱼类模型的行为同样越来越多地用于环境和生物医学研究。

在这里，利用数十年的水生毒理学和行为生态学研究经验来推进环境生物医学科学尤为重要。我们的方法可用于了解化学品的生物活性以及它们可能带来的好处和危害。该协议的主要优点是它提供了灵敏和快速的方法来了解对环境和生物医学科学有用的诊断化学活动。

该技术的含义旨在支持商业生物活性和行为影响的诊断。这些化学品中的大多数通常缺乏重要的毒性信息。但是，它也可以用于了解其他化学物质（例如药物和杀虫剂）的影响。

这方面很重要，因为工业化合物通常缺乏比较环境药理学和毒理学数据。除了在改变亮、暗光周期期间测量幼虫运动活动外，该协议还可用于测量幼虫光运动反应。它有效地检查了从亮到暗和从暗到亮过渡之间的运动差异的大小。

首先，将咖啡因溶解在重组的硬水中。然后进行连续稀释以产生较低的咖啡因处理水平。为了准备各个暴露室，将 20 毫升溶液倒入四个 100 毫升的斑马鱼玻璃烧杯中。

将 200 毫升溶液倒入三个 500 毫升的玻璃烧杯中，用于胖头鲦鱼。接下来，使用移液管将 10 个受精后 4 到 6 小时龄的斑马鱼胚胎放入每个烧杯中。使用改良的移液管，将 10 只在孵化后 24 小时内老化的胖头鲦鱼幼虫放入每个暴露室中。

将斑马鱼和胖头鲦鱼腔室放入培养箱中。96 小时后，将每条鱼装入 48 孔板和 24 孔板的单独孔中。在记录室中放置一个装有至少一条幼鱼的孔板。

然后在视频跟踪软件中，单击 文件生成协议.在对话框的 location count 字段中，输入孔板的单个孔数。然后点击 OK.At 屏幕顶部，点击 查看全屏.

显示孔板的俯视摄像头视图。然后单击 draw areas 图标。在标记为 areas 的字段中选择圆圈图标。

使用光标，描绘板左上角孔的圆形视频跟踪区域。选择右上角的标记并勾勒出右上角的井的查看区域。接下来，选择 bottom mark 以勾勒出右下角的井。

定义油井跟踪区域后，单击 build 以提示软件描绘其余油井的观察区域。在校准区域中，单击 draw scale 并在板上绘制一条水平线。绘制线条后，将出现一个标有 calibration measurement 的对话框。

在此框中输入孔板长度，然后单击 OK（确定）。单击 apply to group in calibration area（应用于校准区域中的组）。要退出绘图管理器，请单击 draw areas 图标。接下来，单击 tiles 图标。

使用光标突出显示查看屏幕上出现的所有框，使每个框都为绿色。单击查看和全屏。然后在检测阈值框中，单击 bkg 并使用阈值调整栏设置像素检测阈值。

选择适当的阈值后，单击 apply to group.在标记为 movement threshold 的框中，输入所需的移动速度跟踪参数。设置速度参数后，单击 apply to group。

接下来，单击下拉菜单中的 protocol parameters。在对话框中，选择 time （时间） 选项卡并输入观测时间和积分时间。单击 ok 并从 parameters 下拉菜单中选择 light driving 打开 light driver settings 对话框。

设置每个照片周期的亮暗照片周期时间和光照强度。然后单击 确定。接下来保存观察协议。

首先将含有实验鱼的孔板放入行为记录室中。然后打开之前开发的跟踪协议。在视频跟踪查看器中，确保所有幼虫都可见，每个孔中仅存在一只幼虫，并且孔与定义的观察区域对齐。

接下来，单击 experiment and execute。指定数据的名称和保存位置。然后单击多个实时图像图标以突出显示所有预定义的查看区域。

最后，关闭记录室的面板，然后单击 背景 然后 Start 开始 在计算机显示器上。暴露于咖啡因 96 小时后，胖头鲦鱼幼虫的光运动反应被咖啡因改变，其水平低于斑马鱼。然而，斑马鱼中受影响的光马达终点数量明显更多。

此外，还分析了移动距离、运动次数和运动持续时间的三个速度阈值的明暗运动活动。在这两个物种中，咖啡因抑制活性都显着影响运动终点。在执行此程序时，重要的是要记住将行为分析与较窄的特定时间窗口联系起来。

因为一天中的时间会影响幼鱼的行为。按照此程序，方法可以应用于其他化学品的标准化指南，以回答与鱼类行为相关的其他问题。观看此视频后，您应该很好地了解在使用与环境和生物医学科学相关的标准化指南进行毒性生物测定时如何观察幼鱼模型的行为和光运动反应。

不要忘记，使用某些化学品可能很危险，因此在执行此方案时请务必佩戴适当的个人防护设备。