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DOI: 10.3791/57949-v
Dana M. Freund1, Katherine A. Sammons2, Nokwanda P. Makunga3, Jerry D. Cohen1, Adrian D. Hegeman2
1Department of Horticultural Science, Microbial and Plant Genomics Institute,University of Minnesota, 2Department of Horticultural Science, Department of Plant and Microbial Biology, Microbial and Plant Genomics Institute,University of Minnesota, 3Department of Botany and Zoology,Stellenbosch University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
叶喷雾质谱法是一种直接的化学分析技术, 它能最大限度地减少样品的制备, 消除色谱, 从而快速检测植物组织中的小分子。
叶喷雾 MS 是一种对完整植物组织进行定性和半定量分析的快速方法,具有广泛的应用。该技术的主要优点是可以直接分析植物组织,基本上无需样品制备。虽然这种方法可以很好地了解来自 Sceletium 的 mesembrine 生物碱,但它也可用于分析各种其他植物物种和外源化学物质,如杀虫剂。
刚接触这种方法的个体可能会发现它具有挑战性,因为有必要针对每种植物物种、组织类型和感兴趣的化合物优化方案。使用改性的纳米喷雾源进行叶喷雾 MS.As 叶喷雾 MS 不需要流体组件,请通过从源上移除液相色谱探针来修改源。将电压施加到植物组织的叶式喷雾质谱仪导线的一端有一个焊接到导线上的引脚,另一端有一个焊接的夹子。
如果系统最近一直在使用,请让它冷却到触摸,然后再移除扫描锥中的任何替代源。然后连接纳米喷雾叶喷雾 MS 源。最后,按照文本协议中的说明创建 tune 文件和 method 文件。
始终戴手套,不要使用裸手处理过的植物组织。否则,聚乙二醇等污染离子将占据光谱的主导地位。将用于分析的植物组织带到与质谱系统相同的房间,以便快速采样。
对于没有自然尖头的植物组织,请在载玻片上使用剃须刀片切出锥形点。在发芽后 10 周将 Sceletium tortuosum 的叶子切成细条,每条细条都有一个锥形的末端以形成一个点。用镊子轻轻选择末端将被夹住的植物组织。
用镊子夹住组织,小心地将其转移到夹子上。使用夹子调整柔性臂和电线,使组织与 MS 入口对齐。请参阅正文,了解每个特定质谱仪与离子入口的最佳距离。
如果第一次尝试产生低信号强度,则可以将植物组织移动到更靠近离子入口的位置。加载方法文件。为数据文件命名并设置文件存储位置。
然后通过单击播放打开 MS 系统,然后单击开始开始采集数据。使用带有凝胶加载尖端的移液器涂抹溶剂,以最大限度地延长高压与用户手之间的距离,以提供保护。只要信号仍然存在或直到收集到足够的光谱,通常为 30 到 60 秒,就要采集数据。
停止数据采集并暂停 MS 系统。采集后,取出组织并在无绒擦拭布中用 100% 甲醇清洗夹具。打开数据文件并目视检查基峰质量计时图。
检查信号强度是否约为 1000 万到 5 亿。创建一个新的方法文件,其中包含 M over Z 的包含列表,最多保留四位小数。单击 global lists and inclusion(全域列表和包含)。
在 PRM 的属性下,选择碎裂能量和其他串联 MS 参数。为了获得 mesembrine 生物碱的串联 MS 数据,以归一化碰撞能量 35 的 Z 轴、290.1742 M 和 Z 轴上的 292.1897 M 处碎裂离子。接下来,加载串联 MS 方法文件和命名数据文件。
打开 MS 系统并开始采集数据,如有必要,添加溶剂。收集到足够的谱图后,通常在 30 到 60 秒后,停止采集。按照文本协议中的说明执行数据分析。
叶喷雾 MS 和正电离对 Sceletium tortuosum 进行代谢谱分析的代表性结果显示,插图显示 260 至 295 M Z.In 本研究中,通过叶喷雾 MS 共检测到 9 种 mesembrine 生物碱,并进行了鉴定。叶喷雾 MS 总离子计数质量计时图代表了一次成功的叶喷雾 MS 实验,其中在整个采集期间保持稳定的信号。对于每个峰,顶部数字是以分钟为单位的时间,底部是 M 与 Z 的偏差,串联质谱是在正电离中收集的,该质谱由 Sceletium tortuosum 切叶和叶片喷雾 MS 制成。通过对 mesembrine M 和 mesembrenone M 异构体、mesembrine 和 mesembrine M 二氢的精确质量和质量碎裂进行生物碱的局部鉴定。
看完这个视频,您应该对如何使用叶喷雾MS检测植物代谢物有了很好的了解。叶喷雾质谱仪已用于检测内源性化合物以及农药等外源性化合物。
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