家兔模型最佳胚胎阶段微创胚胎移植与胚胎玻璃化

本实验的主要目标是将兔子的腹腔镜胚胎移植程序描述为模型。这项技术的主要优点是，这一个工作，使用简单，微创技术转移胚胎。此外，这里描述的有效胚胎冷冻保存方案也适用于长期储存兔子胚胎，提供时间灵活的后勤能力和运输样本的能力。

正如我们所了解的，辅助生殖技术正在不断评估，以改善结果并减少相关风险。因此，使用这两种技术，兔子可以作为人类生殖的理想动物模型来回答这一领域的关键问题，如体外胚胎操作对后代的影响。由于胚胎移植步骤难以学习，因此对这些问题的视觉演示至关重要，因为必须非常精确地完成，以确保该技术的成功。

对于胚胎玻璃化，将胚胎浸入平衡溶液中两分钟，随后在玻璃化溶液中孵育一分钟。在孵育结束时，将胚胎装入125微升塑料迷你吸管中，将迷你吸管的封闭端与适当的1毫升微型吸管混合。吸气基介质高达稻草长度的三分之一，然后是一个小气泡。

接下来，使用立体显微镜在40微升的玻璃化溶液中吸出胚胎，然后再用一个小气泡和足够的基基介质将第一液体部分移动到小稻草的棉花上。然后用吸管将迷你吸管的开端关闭，将迷你吸管直接插入液氮中，实现玻璃化，将迷你吸管储存在液氮中。要解冻胚胎进行移植，请将迷你吸管水平放置10厘米，从液氮蒸汽中放置20至30秒。

当结晶过程在迷你吸管内开始时，将迷你吸管浸入 25 摄氏度的水浴中 10 到 15 秒。立即取出迷你吸管和棉塞，并使用耦合的微型分配器将迷你吸管内装物排出到含有 25 摄氏度基介质的板中，并辅以 0.33 摩尔蔗糖溶液，其中胚胎必须在五分钟内保留。然后将胚胎移植到一盘新鲜基基中再孵育五分钟。

早在胚胎移植年龄的前几天，观察现有的性成熟4.5个月大的雌兔的外阴的凹度和颜色，并诱导排卵的接受动物与单一肌肉注射一微克的布塞林醋酸盐，无论体重。在移植当天，在立体显微镜下以37摄氏度基基介质冲洗新鲜或解冻的胚胎，并在一毫升注射器上安装适当配置的17度硬膜外导管。将一厘米的基介质吸入导管，然后吸入一个小气泡。

然后吸5至7个胚胎和10微升的基介质，然后是另一个小气泡，最后一个1厘米的基础介质。胚胎加载后，将麻醉接受者兔子放在加热阶段的笼子里，并在动物的眼睛上涂抹软膏。在确认对踏板反射缺乏反应后，从腹腹部剃除毛皮，用氯己丁葡萄糖酸肥皂清洁手术区域，并去除剩余的头发。

用无菌窗帘覆盖手术区域，并在腹腔中插入一个内窥镜小车五厘米，在 zyphoid 工艺中插入两厘米，并使用调节机械吸气器的压力来充气腹腔。通过内窥镜托拉器插入内窥镜相机，并将 17 量的硬膜外针插入内皮区域，距离内皮球体两到三厘米。将加载的导管通过硬膜外针插入腹部，并通过安培的内皮隆，插入一到两厘米的硬膜外导管。

轻轻按下导管柱塞，将胚胎释放到卵巢中。两个气泡都必须从导管中退出。胚胎释放后取出导管，吸气并释放剩余的介质，以确认胚胎的缺失。

在确认胚胎成功移植后，取出硬膜外针和内窥镜相机，并通过内窥镜转接释放腹部二氧化碳。用氯己丁溶液清洁小刀切口，用微尼氧化铝和塑料敷料关闭伤口。然后用适当的抗生素和镇痛药治疗动物，并监测动物，直到完全恢复。

微创腹腔镜胚胎移植将兔子作为生殖研究的最佳动物模型之一，大量移植的新鲜胚胎导致幼崽。值得注意的是，当新鲜胚胎移植在早期或紧凑的胚胎阶段进行时，可以达到更高的值。在早期和压缩的玻璃化兔毛化移植后，特别是与紧凑的毛骨移植后，也观察到类似的结果，证实了这种技术在兔子中移植新鲜玻璃化胚胎的有效性和可靠性。

按照这个程序，其他方法，如有条件辅助生殖技术可以执行，以回答其他问题，如如何增加密度可以产生镇痛效果的晚年生活。经过近一技术的发展，这项技术为生殖领域的科学家在兔子与人类之间接近的植物遗传距离的基础上探索这种效应铺平了道路。因此，这项技术可以提供结果很容易转移到人类临床医学，以及其他哺乳动物物种。

不要忘记，我们的方法提供了一些卫生和经济优势，符合动物福利、替代、减少和精炼三个R的概念，旨在改善实验动物的人类待遇。