Name: 分光光度法测定蓝藻Synechocystis中的蛋白含量 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-11T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 学习使用分光光度法测定蓝藻Synechocystis中藻胆蛋白含量的实验方法。该方案可定量分析藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白，适用于评估光合效率与生产力研究。

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本方案改编自先前发表的研究11。T. Z.、D. Ch. 和 J. Č. 获得了捷克共和国教育、青年和体育部国家可持续发展计划 I（NPU I）的资助（项目编号 LO1415）。J. Č. 还获得了捷克科学基金会（GA CR）的资助（项目编号 18-24397S）。仪器设备及其他设施的使用得到了捷克系统生物学研究基础设施 C4SYS（项目编号 LM2015055）的支持。M. A. S. 获得了俄罗斯科学基金会资助项目（编号 14-14-00904）的支持。

1. 蓝细菌培养

<ol>
	<li>培养 集胞藻属 细胞置于锥形瓶或光生物反应器中10,19 在缓冲的 BG11 培养基中20 以维持 pH 值为 &lt; 10 (例如，使用 17 mM HEPES10). 
	注意：标准培养条件需要控制温度（通常， 30 °C，最适温度为 35 °C)21，照明（通常为强度高达白光的光照） 800 µmol[光子]/[m2·s])21，以及一个 CO2 供应（在400 mL平板式光生物反应器中，达到生长饱和的CO₂）2 浓度为 1,700 ppm21.</li>
	<li>为确定培养物密度，使用分光光度法在730 nm处测定培养物的光密度（OD730使用光程为1 cm的比色皿进行测定。或者，在显微镜下使用血细胞计数板或自动细胞计数仪进行细胞计数。</li>
</ol>
2. 样品制备
<ol>
	<li>在低辐照条件下操作，以防止藻胆蛋白降解。</li>
	<li>取3 × 1 mL培养液至安全锁扣管中。设置三个技术重复，用于评估测量过程中的技术误差。为在无菌条件下进行培养物取样，应在超净工作台内收集细胞，并遵循正确的操作与安全规范。</li>
	<li>在室温下以15,000 × g 离心5分钟。注意离心机转子应正确平衡。离心后弃去上清液，注意不要扰动沉淀。</li>
	<li>将样品放入冷冻保存。长期保存时，应置于-80 °C；此条件可有效防止藻胆蛋白降解。短期保存可置于-20 °C。</li>
	<li>将样品冷冻干燥过夜。为确保冻干过程有效，冻干机冷凝器温度应保持在-60 °C以下，冻干室压力维持在约1 hPa。</li>
	<li>完成冻干循环后，应尽快封闭管盖，防止样品从空气中重新吸收水分。</li>
</ol>
3. 细胞匀浆与色素提取
<ol>
	<li>向每个样品管中加入四颗直径为 2 mm 的玻璃珠，并盖紧管盖。 
	注意：用于均质的 Safe-Lock 管若管盖过薄，可能在均质过程中破裂；因此，本方案建议仅使用管盖坚固的 Safe-Lock 管。</li>
	<li>在室温下使用均质仪将样品与玻璃珠均质 15 秒。 
	注意：充分均质后的样品应均匀分布在 Safe-Lock 管的整个内壁表面。</li>
	<li>为提取藻胆蛋白，向样品中加入 1 mL 预冷至 4 °C 的 PBS 缓冲液（pH 7.4）。 
	注意：从该步骤开始，需将样品始终置于冰上，以防止提取蛋白的降解。此操作至关重要。</li>
	<li>在室温下使用均质仪将样品与 PBS 混合 5 秒。 
	注意：混合后，样品呈绿色。</li>
	<li>混合后，将样品置于冰上静置 60 分钟。冰浴容器应加盖，以防止色素降解。</li>
	<li>藻胆蛋白提取 60 分钟后，在 4 °C 条件下以 15,000 × g 离心 5 分钟。注意离心机转子需准确平衡。 
	注意：离心后，上清液呈蓝绿色。</li>
</ol>
4. 藻胆蛋白定量
<ol>
	<li>在进行分光光度测定前，使用 PBS 缓冲液作为空白对照，将分光光度计校准至基线。</li>
	<li>分光光度计校准后，弃去一个分光光度计比色皿中的 PBS，用移液器将含有提取的藻胆蛋白的上清液加入该比色皿，替代已弃去的缓冲液。</li>
	<li>采用 0.5 nm 的狭缝宽度，通过分光光度法测定藻胆蛋白浓度。
	<ol>
		<li>分别在 615 nm（A615）和 652 nm（A652）处测定藻蓝胆素在藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白中的吸光度，以 PBS 缓冲液为空白对照；并在 720 nm（A720）处测定细胞碎片的吸光度。</li>
		<li>根据 Bennett 和 Bogorad12 提出的公式（1）和（2）计算藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的浓度： 
		<img alt="藻蓝蛋白浓度公式：(A615-A720)-0.474×(A652-A720)/5.34 [mg/mL]。" src="/files/ftp_upload/58076/58076eq1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="公式 1"> 
		<img alt="别藻蓝蛋白浓度公式，光谱分析，吸光度测定方程。" src="/files/ftp_upload/58076/58076eq2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="公式 2"> 
		注：A615、A652 和 A720 应处于分光光度计的线性吸光度范围内。如有必要，用 PBS 缓冲液稀释样品。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>重新计算原始样品中的色素浓度。当分析中使用 1 mL 培养物和 1 mL 提取缓冲液时，样品中的色素浓度可直接由公式（1）和（2）的结果得出。若使用不同体积的蓝细菌样品和/或 PBS 缓冲液，最终色素浓度应根据公式（3）进行计算： 
	<img alt="色素浓度计算公式，涉及样品和 PBS 缓冲液体积。" src="/files/ftp_upload/58076/58076eq3.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="公式 3">   (3) 
	注：若需将藻胆蛋白含量标准化为细胞干重，最终色素浓度应根据公式（4）计算<img alt="色素浓度公式，示意图，浓度与干重之比，单位为 mg/mg。" src="/files/ftp_upload/58076/58076eq4.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="公式 4">  (4)</li>
</ol>
5. 细胞干重的测定（可选）
<ol>
	<li>在分析天平上称量三个空的安全锁扣管。 
	注意：安全锁扣管必须保持干燥。若管子存放在潮湿环境中，请在冻干机中干燥数小时后再进行称量。操作时应轻柔处理，并仅使用无粉手套接触管子，避免材料与研究人员手指直接接触。保持所有支架和离心机清洁，防止任何外来物质污染管子。</li>
	<li>取 1 × 15 mL 培养液悬浮液至 15 mL 锥形管中。</li>
	<li>将培养液悬浮液在 15 mL 锥形管中以 4,000 × g 在室温下离心 10 分钟。使用另外三个各装有 15 mL 水的 15 mL 锥形管平衡离心转子。离心后，弃去 12 mL 上清液。</li>
	<li>将沉淀物在剩余上清液中重悬，并用移液器将 3 × 1 mL 混合液转移至三个 1.5 mL 安全锁扣管中。若部分沉淀物仍残留在 15 mL 锥形管中，则向该管中加入 1.5 mL 去离子水，涡旋或振荡以重悬残留沉淀物，并用移液器将 3 × 0.5 mL 混合液转移至已含有 3 × 1 mL 沉淀物的三个 1.5 mL 安全锁扣管中。 
	注意：将沉淀物分装至三个 1.5 mL 安全锁扣管中，有助于评估干重测量过程中的技术误差。</li>
	<li>将细胞在 1.5 mL 安全锁扣管中以 15,000 × g 在室温下离心 5 分钟。使用一个装有 1 mL 水的额外 1.5 mL 安全锁扣管平衡离心转子。离心后，弃去上清液。</li>
	<li>将样品放入冷冻柜中。长期储存时，应保存在 -80 °C；短期储存时，-20 °C 即可。</li>
	<li>将样品冻干过夜。为确保有效的冻干过程，冻干机冷凝器温度应保持在 -90 °C 以下，冻干室压力维持在约 1 hPa。</li>
	<li>冻干完成后，关闭管盖并在分析天平上称量样品。 
	注意：干重值可用于标准化每细胞干重的藻胆蛋白含量。</li>
</ol>

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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本方案描述了一种简单、快速且可重复的定量模式蓝藻Synechocystis中藻胆蛋白含量的方法。本文比较了多种细胞匀浆、蛋白质提取以及藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白定量的方法，最终方案整合了各单项操作中的最优步骤。作为代表性数据，本文测定了在光照强度递增条件下Synechocystis细胞中藻胆蛋白的含量。尽管该分析所需的时间和实验设备与此前报道的一些方法12,13,14,15,16相似，但本方案的优势在于提取过程中不会释放叶绿素a，因此可高精度地测定藻胆蛋白含量。
用于藻胆蛋白分析的细胞悬液用量可能因培养密度而异。1 mL 的样品体积适用于 OD730 为 1.5、细胞密度约为 2 × 10<...

藻胆蛋白是一类水溶性色素-蛋白质复合物，是原核蓝细菌（Cyanophyta）以及若干真核生物类群（Glaucophyta、Rhodophyta 和 Cryptophyta）光合天线系统的主要组成成分1。它们通常以超分子复合物的形式存在，称为藻胆体，一般附着在光合膜基质侧的表面，但 Cryptophyta 除外，其藻胆蛋白定位于类囊体腔内2。迄今为止已鉴定出四种类型的藻胆蛋白：位于核心的别藻蓝蛋白，以及位于外围的藻蓝蛋白、藻红蛋白和藻紫红蛋白1。作为主要的光捕获复合物，藻胆体是藻类和蓝细菌大规模培养生产率的关键因素之一。研究表明，在强光条件下，缩短藻胆体可提高生物量积累3；而在中等或弱光照条件下，天线系统的缩短则导致生长速率和生物量积累下降3,4。藻胆蛋白在商业上被用作食品着色剂、药品和食品添加剂，在化妆品工业中也有应用，并可作为荧光探针用于流式细胞术、荧光免疫分析和荧光显微镜技术5。
本方案聚焦于模式蓝藻Synechocystis中藻胆蛋白的定量测定。蓝藻是最早出现的产氧光合自养生物，已在地球上形成生物圈超过24亿年6。它们在全球氮、碳、氧及其他元素的生物地球化学循环中发挥着关键作用。在众多蓝藻中，单细胞株系Synechocystis具有独特地位，它是首个完成全基因组测序的蓝藻7,8，能够自然转化外源DNA9，并表现出稳定且相对快速的生长特性10,11。在Synechocystis中，核心天线组分别藻蓝蛋白与内在膜蛋白结合，而连接的藻蓝蛋白则位于类囊体膜的周边区域。
本方案中比较了多种藻胆蛋白的提取与定量方法。最终的提取步骤已成功应用于 集胞藻属以及其他蓝藻菌株，包括 Cyanothece sp. Synechococcus elongatus, 螺旋藻 sp., 节旋藻 sp.，以及 鱼腥藻 sp.，且已成功应用于红藻 紫球藻（Porphyridium cruentum）因此，本方案中开发的方法可被视为一种通用的藻胆蛋白提取方法。尽管部分测试的提取方法获得了更高的总蛋白产量，但本方案所述的提取程序提供了最高的藻胆蛋白产量，同时叶绿素含量最低 a 藻胆蛋白提取物中的残留物。降低叶绿素含量 a 对于藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的分光光度法定量至关重要。
不同藻类和蓝细菌物种之间的藻胆蛋白吸收光谱可能存在显著差异12,13,14,15,16,17，甚至在同一蓝细菌属的不同菌株之间也存在差异18。因此，用于Synechocystis中藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白测定的特定波长及吸收系数通常不适用于其他菌株。此外，Synechocystis不含藻红蛋白和藻红蓝蛋白，而这些蛋白可在某些其他藻类和蓝细菌中找到。针对Synechocystis以外菌株的藻胆蛋白测定，建议对每种菌株分别评估其分光光度计算方程。
尽管该实验方案包含两个耗时较长的步骤（细胞沉淀物的过夜冷冻干燥和1小时的蛋白质提取），但藻胆蛋白定量的总操作时间不超过2小时。

<table><tbody><tr><td>集胞藻属 PCC 6803</td><td>Institut Pasteur, Paris, France</td><td>6803</td><td>蓝细菌菌株</td></tr><tr><td>Roti-CELL PBS</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG, Karlsruhe, Germany</td><td>9143.1</td><td>磷酸盐缓冲液（PBS）溶液，pH 7.4</td></tr><tr><td>Eppendorf safe-lock 管&amp;nbsp;</td><td>Eppendorf, Hamburk, Germany</td><td>30120086</td><td>1.5 ml 安全锁扣管</td></tr><tr><td>VWR 80-位储存系统</td><td>VWR International, Radnor, Pennsylvania, USA</td><td>30128-282</td><td>安全锁扣管架&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>RAININ 100 &amp;micro;l -1000 &amp;micro;l&amp;nbsp;</td><td>Mettler-Toledo, Columbus, Ohio, USA</td><td>17014382</td><td>移液器</td></tr><tr><td>GP-LTS-A-1000&amp;micro;L-/F-768/8</td><td>Mettler-Toledo, Columbus, Ohio, USA</td><td>30389272</td><td>移液器吸头</td></tr><tr><td>Rotina 420R</td><td>Hettich, Kirchlengern, Germany</td><td>4701</td><td>适用于 1.5 ml 安全锁扣管和 15 ml 锥形离心管的制冷离心机</td></tr><tr><td>LCexv 4010</td><td>Liebherr, Bulle, Switzerland</td><td>9005382197172</td><td>冰箱和 -20&amp;nbsp;&amp;deg;C 冷冻柜</td></tr><tr><td>Revco ExF -86&amp;deg;C 立式超低温冷冻柜</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA</td><td>EXF24086V&amp;nbsp;</td><td>-80&amp;nbsp;&amp;deg;C 冷冻柜</td></tr><tr><td>CoolSafe</td><td>LaboGene, Liller&amp;oslash;d, Denmark</td><td>7.001.000.615</td><td>冷冻干燥机&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>UV-2600</td><td>Shimadzu, Kyoto, Japan</td><td>UV-2600</td><td>分光光度计&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Hellma 吸收池，半微量</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td><td>Z600288&amp;nbsp;</td><td>VIS/UV-VIS 半微量比色皿，0.75–1.5 ml，光谱范围 200–2500 nm&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Silamat S6</td><td>Ivoclar Vivadent, Schaan, Liechtenstein</td><td>602286WU</td><td>均质器&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>实心玻璃珠</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td><td>Z273627</td><td>直径为 2&amp;nbsp;mm 的玻璃珠</td></tr><tr><td>CPA225D-0CE</td><td>Sartorius AG, G&amp;ouml;ttingen, Germany</td><td>SECURA225D-1OBR</td><td>分析天平</td></tr><tr><td>螺旋藻属 C-藻蓝蛋白&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td><td>P2172</td><td>藻蓝蛋白标准品</td></tr><tr><td>别藻蓝蛋白</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td><td>A7472</td><td>别藻蓝蛋白标准品</td></tr><tr><td>双辛可宁酸试剂盒&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td><td>BCA1, B9643</td><td>总蛋白测定用完整试剂盒</td></tr><tr><td>AlgaeTron&amp;nbsp;</td><td>Photon System Instruments Ltd., Dr&amp;aacute;sov, Czech Republic</td><td>AG 130-ECO&amp;nbsp;</td><td>带可控光照和气氛的 E 瓶培养室</td></tr><tr><td>光生物反应器</td><td>Photon System Instruments Ltd., Dr&amp;aacute;sov, Czech Republic</td><td>FMT-150</td><td>具有完全可控环境的蓝细菌和藻类培养设备</td></tr><tr><td>Cellometer&amp;nbsp;</td><td>Nexcelom Bioscience, Lawrence, Massachusetts, USA</td><td>Auto M10</td><td>细胞计数仪</td></tr><tr><td>Corning 15 mL 离心管</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA</td><td>CLS430791&amp;nbsp;</td><td>用于干重取样的 15 ml 离心管</td></tr><tr><td>Herasafe KS</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA</td><td>51024579</td><td>层流罩</td></tr></tbody></table>

分光光度法测定蓝细菌集胞藻（synechocystis）中藻胆蛋白含量

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

这是一种用于定量测定模式蓝藻中藻胆蛋白含量的简易方案 集胞藻属藻胆蛋白是藻胆体的最重要组分，而藻胆体是蓝细菌和某些藻类类群中的主要捕光天线系统。这些藻胆体的 集胞藻属 包含两种藻胆蛋白：藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。本方案描述了一种针对该模式蓝细菌中藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白进行定量测定的简单、高效且可靠的方法。我们比较了多种藻胆蛋白的提取及分光光度法定量方法。本方案所述的提取程序也已成功应用于其他蓝细菌菌株，例如 Cyanothece sp. Synechococcus elongatus, 螺旋藻 sp., 螺旋藻 sp.，以及 鱼腥藻 sp. 以及红藻 紫球藻（Porphyridium cruentum）然而，来自不同分类群的特定藻胆蛋白的消光系数可能存在差异，因此建议对每种藻株 individually 验证分光光度法定量方法。该方案耗时较少，且仅需标准设备，可在任何标准生命科学实验室中进行。

在初始方法测试中，Synechocystis 在 Erlenmeyer 摇瓶中以分批培养方式于 BG11 培养基20（添加 17 mM HEPES）中培养，培养条件为 25 °C，光照强度为 50 µmol(光子)/(m2·s) 的暖白光，以及培养气相中含 1% CO2。培养过程中，取培养物样品至防漏管中，离心（15,000 × g，室温，5 分钟），弃去上清液，沉淀样品或于 -80 °C 保存并冻干，以备本方案各步骤使用，或于 -20 °C 或 -80 °C 保存，用于比较性提取与定量分析。
测试的提取方法包括超声波破碎细胞、在PBS缓冲液中使用氧化锆珠均质化以及冻融处理。不同提取方法的结果总结于图1中。本方案所述方法在提取缓冲液中获得了最高的藻胆蛋白产量，同时叶绿...

本文介绍了一种利用分光光度法定量测定蓝细菌Synechocystis中藻胆蛋白含量的实验方案。该提取方法也已成功应用于其他蓝细菌和藻类菌株；但由于色素吸收光谱存在差异，需针对每种菌株单独验证分光光度法计算公式的适用性。

分光光度法测定蓝细菌集胞藻（Synechocystis）中藻胆蛋白含量

这是一种用于定量测定模式蓝藻集胞藻（Synechocystis）中藻胆蛋白含量的简易实验方案。藻胆蛋白是……

本实验方案的总体目标是利用分光光度法对模式蓝细菌集胞藻（Synechocystis）中的藻胆蛋白含量进行定量测定。藻胆蛋白是一类水溶性的色素-蛋白复合物，是原核蓝细菌以及若干类真核藻类中光捕获天线系统的主要组成成分。由于藻胆蛋白是主要的光捕获复合物，因此其含量是决定藻类和蓝细菌光合生产力的关键因素之一。Synechocystis 是一种模式蓝细菌，在全球数百个实验室中被广泛使用。Synechocystis 含有两种藻胆蛋白，即藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白。本方案描述了一种针对该菌株中这两种藻胆蛋白进行定量测定的简单、高效且可靠的方法。我们比较了多种方法，包括藻胆蛋白的提取和分光光度法定量。由于不同藻株的藻胆蛋白吸收光谱可能存在差异，因此每种藻株均需单独验证定量方法。在开始提取藻胆蛋白时，将一毫升蓝细菌培养物转移至带安全锁的离心管中。如果决定测定样品的干重，需在取样前称量空离心管的重量。确保培养物未发生沉淀。在室温下以 15,000 G 离心 5 分钟，收集细胞。小心弃去上清液，注意不要扰动沉淀。将样品放入冷冻机中。长期保存时，需将样品置于 -80 摄氏度条件下。此步骤对于防止藻胆蛋白降解至关重要。样品冻结后，立即将其放入冷冻干燥机中。冻干开始后，检查冻干机的温度和压力。温度必须低于60摄氏度，压力应约为1百帕。将样品冻干过夜。冻干循环结束后，应尽快封闭管子，以防止样品从空气中重新吸收水分。向每个样品管中加入四个2毫升的玻璃珠。用玻璃珠对样品进行15秒的均质处理。充分匀浆的样品应均匀涂布于安全锁管的整个内表面。细胞匀浆后，向样品中加入1毫升磷酸盐缓冲液，以提取藻胆蛋白。PBS的最适pH约为7.4。在均质器上将细胞与 PBS 混合 5 秒。这将确保样品充分混匀，以实现高效的藻胆蛋白提取。混合后，样品呈绿色。为实现最高效的藻胆蛋白提取，将样品置于冰上保持60分钟。提取后，在4°C条件下以15,000 G离心5分钟。离心后，上清液呈深蓝色。在进行分光光度测定之前，使用 PBS 作为空白对照校准分光光度计。分光光度计校准后，从一个分光光度计比色皿中弃去 PBS，用移液器将含有提取的藻胆蛋白的上清液加入该比色皿以替代弃去的缓冲液。在藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的定量分析中，需在 615、652 和 720 纳米波长下测定含有提取藻胆蛋白的上清液。如文中所述，文献中已知有多种用于藻胆体定量的方程式。本方案所采用的方程式在藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白浓度与色素及点状物之间具有最佳相关性。本方案的关键步骤是细胞均质化与提取，应同时实现高得率和高特异性。我们测试了多种提取方法，例如通过超声波破碎细胞、使用氧化锆珠均质化或冷冻细胞裂解。本方案中的方法获得了最高的藻胆体得率。由于蛋白质提取物中即使存在少量叶绿素污染，也可能导致藻胆蛋白含量被高估，因此必须避免从细胞中提取任何叶绿素。我们在粗提物中检测到叶绿素，随后使用超声处理破碎细胞。随着超声处理循环次数的增加，叶绿素浓度也随之升高。经优化，匀浆时间确定为15秒。均质处理5秒和20秒均得到略低的得率。在PBS缓冲液或水中添加氯化钠或氯化钾，以及使用醋酸钠缓冲液进行提取，均未提高藻胆蛋白的提取效率。藻胆蛋白的提取时间优化为60分钟，因为在120分钟甚至240分钟后，藻胆蛋白浓度未发生显著变化。确保在615、652和720纳米处的吸光度处于分光光度计的适宜吸光度范围内。本实验方案所用的分光光度计显示的适宜吸光度范围为0.1至3。我们比较了文献中已知的几种分光光度法测定藻胆蛋白含量的计算公式。Bennett 和 Bogorad 的方程在已知蛋白质浓度的色素标准品中，对藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白含量的重建效果最佳。不同方程之间的差异与特定生物中藻胆蛋白消光系数的变异有关。在应用或未应用超声处理的样品中，硫酸链霉素的使用并未导致叶绿素 A 的减少。作为代表性数据，我们测定了集胞藻（Synechocystis）细胞中藻胆蛋白的含量。随着光照强度增加，藻胆蛋白含量下降。本方案的建立旨在最大限度减少时间与设备需求，所描述的色素分析方法可在任何标准的生命科学实验室中进行。此外，该实验方案还包括另外两个步骤，如细胞沉淀的冷冻干燥和蛋白质提取。藻胆体定量的总操作时间不超过两小时。

spectrophotometric-determination-phycobiliprotein-content

Research

科研

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

分光光度法测定蓝藻Synechocystis中的蛋白含量

来源：Weber, N. et. al., 丝状蓝细菌Phormidium lacuna的自然转化、蛋白质表达与低温保存。J. Vis. Exp.

使用聚焦光照进行丝状蓝细菌趋光性实验

来源：Jiang, H., Ho, M. 蓝细菌中完整藻胆体的分离与表征. J. Vis.

蓝细菌培养物制备用于生物量生产

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