Name: 倒置方向下整个人的心脏在加压袋内的去细胞化 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-26T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: 了解利用加压袋倒置方向进行整个人心脏去细胞化的创新方法。该技术通过实时监测流动动力学，在无菌环境下高效去除细胞成分，同时最大程度保留器官基质结构，为组织工程领域生成血管化支架提供重要技术支撑。

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本研究得到了休斯顿基金会资助和德克萨斯州新兴技术基金的支持。作者感谢器官获取机构LifeGift公司以及捐献者家属，使本研究得以进行。

所有实验均遵循德克萨斯心脏研究所伦理委员会的指导方针。
1. 器官准备
注意：本研究与德克萨斯州的非营利性器官获取组织 LifeGift（http://www.lifegift.org）合作，使用经批准同意后不适合移植的捐赠人类心脏进行科研。
<ol>
	<li>获取心脏后，通过静脉输注 30,000 U 肝素至心脏。将心脏停跳液套管牢固缝合于主动脉，并连接夹闭的灌注管路。穿刺下腔静脉（IVC）以引流右心。剪开左上肺静脉或左心耳以引流左心腔。</li>
	<li>灌注 1 L 心脏停跳液或肝素化生理盐水。游离主动脉弓分支、上腔静脉（SVC）及其他肺静脉，使心脏脱离所有血管或周围组织连接。将充分肝素化的心脏浸入冰盐水中。</li>
	<li>检查供体人的心脏（包括前侧和后侧，图1）。将心脏置于解剖托盘上，检查是否存在结构损伤或解剖畸形。若同时获取了肝脏和/或肺脏用于移植，心脏可能出现下腔静脉较短和/或左心房后壁缺失的情况。</li>
	<li>进行内部检查，评估是否存在潜在缺陷——如房间隔缺损（ASD）、室间隔缺损（VSD）或瓣膜（主动脉瓣、肺动脉瓣、二尖瓣、三尖瓣）畸形。</li>
	<li>若存在间隔缺损，应使用适当缝线进行修补（图2A、2B）。修补间隔缺损是为了通过肺动脉（PA）流出道浊度测量来监测脱细胞进程。修补后可消除左向右分流，从而使PA流出代表冠状循环经冠状窦的流出情况。</li>
	<li>使用 2-0 丝线结扎上腔静脉和下腔静脉（图2C）。</li>
	<li>游离主动脉（Ao）与主肺动脉（PA）之间的组织（图2D），以便后续插管。</li>
	<li>根据血管直径选择合适的连接器（图3），插入主动脉（Ao）和肺动脉（PA），并用 2-0 丝线固定（图4A）。</li>
	<li>通过左心房插入导管（图4B），经由任一肺静脉开口进入左心室（LV）（图3）。</li>
	<li>将输注管路连接至主动脉（Ao）中的连接器，流出管路连接至肺动脉（PA）中的连接器（图3）。</li>
	<li>将准备好的心脏倒置（ upside down）放入聚酯袋中。</li>
	<li>将装有心脏的聚酯袋放入灌注容器中，并盖上盖子（图4C）。</li>
	<li>将各管路连接至橡胶塞上相应直径的接口（根据容器尺寸选择），并将橡胶塞插入灌注容器盖中，以密封聚酯袋（图4C 和 图5B）。</li>
	<li>通过橡胶塞上的灌注口灌注 1× 磷酸盐缓冲液（PBS）（蒸馏水中含 136 mM NaCl、2.7 mM KCl、10 mM Na2HPO4 和 1.8 mM KH2PO4，pH 7.4），验证肺动脉（PA）及插入左心室（LV）导管的流出情况。</li>
	<li>利用此流动清洗血管系统中残留的任何血液痕迹。若未观察到流动，应检查并收紧可能松动的连接管路。</li>
</ol>
2. 系统设置与器官脱细胞操作步骤
<ol>
	<li>组装生物反应器并将其置于直立位置（图5）。灌注系统包括一台个人计算机（PC）、比例-积分-微分（PID）控制器、用于主动脉（Ao）灌注的蠕动泵、灌注式生物反应器、用于左心室（LV）灌注液储存的压力头容器（2L 吸引瓶，底部带侧臂），以及另一台蠕动泵，用于从压力头容器中排出多余液体并收集肺动脉（PA）流出液。</li>
	<li>在橡胶隔膜上，将灌注管路、压力头管路、PA流出管路以及生物反应器排液管路连接至位于灌注生物反应器顶部的橡胶盖表面接口（图5A）。</li>
	<li>在主动脉根部维持恒定压力120 mmHg的条件下进行心脏脱细胞处理。在整个脱细胞过程中，左心室（LV）的平均压力应保持在14–18 mmHg范围内。</li>
	<li>按以下步骤进行心脏脱细胞处理：500 mM NaCl 高渗溶液处理4小时，20 mM NaCl 低渗溶液处理2小时，1% 十二烷基硫酸钠（SDS）溶液处理120小时，最后用120 L的1×磷酸盐缓冲液（PBS）进行终末冲洗（图6A）。</li>
	<li>在恒定压力控制（120 mmHg）下进行心脏脱细胞处理。主动脉（Ao）内的灌注流速因心脏而异，平均流速分别为：高渗溶液98.06±16.22 mL/min，低渗溶液76.14±7.90 mL/min，SDS溶液151.50±5.76 mL/min，PBS溶液185.24±7.10 mL/min。各试剂消耗总体积平均为：高渗溶液23.36±5.70 L，低渗溶液9.13±1.26 L。</li>
	<li>在SDS灌注结束前，循环使用最后60 L的1% SDS溶液（每克心脏重量使用1 L）。图6A展示了脱细胞过程的时间线，并标明了数据采集的关键节点：灌注期间监测主动脉（Ao）和肺动脉（PA）的流速，以及从压力头容器收集PA和非PA流出液。</li>
	<li>由于上腔静脉（SVC）和下腔静脉（IVC）已被结扎，可合理推断从肺动脉（PA）收集到的所有液体均来源于实际的冠状动脉灌注（图5B）。通过将PA流出灌注液的流速除以Ao输入溶液的流速，直接计算冠状动脉灌注效率： 
	冠状动脉灌注效率 = <img alt="流速比方程，流体动力学，过程效率分析。" src="/files/ftp_upload/58123/58123eq1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Equation">（%）。</li>
	<li>将来自PA和LV的灌注液以及输入溶液分别取200 μL加入透明底96孔板中，每组设两个复孔，于280 nm波长下测定吸光度，进行比较分析。该吸光度值经经验筛选后确定，可提供最佳的归一化结果。</li>
	<li>以洁净输入试剂的浊度作为对照。流出灌注液的浊度反映细胞碎片的洗脱情况，可在脱细胞过程中实时量化，作为过程追踪工具。</li>
	<li>在最后使用10 L的1×PBS进行冲洗时，加入500 mL经10N NaOH中和的无菌2.1%过氧乙酸溶液，使PBS中过氧乙酸终浓度为0.1%（v/v），用于支架的灭菌处理。</li>
</ol>
3. 脱细胞心脏的评估
注意：脱细胞后，将使用代表性心脏进行冠状动脉造影成像和生化检测。
<ol>
	<li>对代表性去细胞化人心脏进行冠状动脉造影，以检查冠状血管系统的完整性。简言之，通过右冠状动脉和左冠状动脉主干的冠状动脉口插管注入造影剂后，在荧光透视镜下对去细胞化人心脏进行成像。</li>
	<li>解剖去细胞化心脏，从19个区域获取组织样本，以评估去细胞化组织中残留的脱氧核糖核酸（DNA）、糖胺聚糖（GAG）和十二烷基硫酸钠（SDS）水平。将心底部从心室分离，并将心室分为4个相等的部分（图6C）。将每个部分进一步分为前、后右心室（RV）、前、后左心室（LV）以及室间隔（IVS）。包含心尖的组织在取样时分别归入左心室和右心室。</li>
	<li>切取用于DNA、GAG和SDS检测的组织样本（湿重约15 mg）。</li>
	<li>通过在1 M NaOH中65 °C消化3小时提取双链DNA（dsDNA），并使用10x Tris-EDTA（TE）缓冲液和1 M盐酸（HCl）将pH调节至7。</li>
	<li>使用含小牛胸腺DNA标准品的双链DNA检测试剂盒定量dsDNA（见材料表）。采用荧光酶标仪对样本进行双复孔检测（激发波长480 nm，发射波长520 nm）。通过比较各组织样本中dsDNA浓度与尸体来源心脏组织的dsDNA浓度，计算去细胞化心脏中残留dsDNA的百分比（% 尸体来源）。</li>
	<li>将组织样本在木瓜蛋白酶提取液（含0.2 M磷酸钠缓冲液、EDTA二钠盐、盐酸半胱氨酸、乙酸钠和木瓜蛋白酶）中65 °C孵育3小时，使硫酸化糖胺聚糖（GAG）溶解释放。使用糖胺聚糖检测试剂盒对GAG含量进行双复孔测定。</li>
	<li>将用于SDS检测的样本在加热真空条件下冻干，并测定干重。向每份干燥样本中加入200 µL超纯水，匀浆以将残留SDS溶解释出。将所得SDS溶液与氯仿及亚甲蓝溶液（1 L含12 mg亚甲蓝的0.01 M HCl溶液）混合。SDS将与亚甲蓝染料结合并转移至有机相。</li>
	<li>使用荧光酶标仪在655 nm波长下对标准品和样本进行双复孔吸光度检测，计算残留SDS含量，并将该SDS数值归一化至组织干重。</li>
	<li>利用非线性光学显微镜（NLOM）对人心脏厚壁区域（即左心室、右心室和室间隔）的样本进行成像，以确认去细胞化后细胞的去除情况。NLOM系统的具体配置详见我们此前的发表文献18,19,20。NLOM可通过双光子荧光（TPF）和二次谐波生成（SHG）通道，在无需任何外源性染料或染色剂的条件下，对细胞、弹性蛋白、胶原蛋白和肌球蛋白纤维进行成像21。</li>
</ol>

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</ol>

Taylor 博士是 Miromatrix Medical, Inc. 的创始人和股东。这一关系已根据明尼苏达大学和德克萨斯心脏研究所的利益冲突政策进行管理；其他作者均无利益冲突需要披露。

据我们所知，这是首项报道在加压袋内对人类心脏进行倒置脱细胞处理，并对流速和细胞碎片清除过程进行延时监测的研究。类似心包膜的袋状结构在整个脱细胞过程中保持了心脏方向的稳定性。将完整心脏浸没并倒置置于袋内，与传统的直立式Langendorff灌注脱细胞方法相比，可防止脱水，并显著减少心脏重量对主动脉造成的过度张力9。这进而保护了主动脉瓣的功能完整性。
为了实现最大程度的脱细胞效率，冠状血管阻力必须保持较低，以确保液体能够充分且稳定地灌注整个心肌组织。在采用逆行灌注的全心脏脱细胞模型中，液体会在心室中积聚，导致心室内压力升高，进而增加冠状血管阻力并限制液体流动。即使主动脉瓣结构完整，心室腔仍会因生理性的渗漏而充液，从而压迫心室壁。
在加压袋内对心脏进行脱细胞的技术旨在缓解这一问题，并提高脱细胞效率。脱细胞过程中，主动脉根部维持120 mmHg的压力，袋内维持14 mmHg的压力。这些压力值接近生理范围（主动脉压力为80–120 mmHg，左心室舒张末期压力为15 mmHg）。<sup ...

心力衰竭导致患者的高死亡率。终末期心力衰竭的最终治疗选择是异体移植。然而，由于供体器官短缺，患者需要长时间等待移植，且移植后仍面临诸多障碍，包括终身免疫抑制和慢性器官排斥反应1,2。通过将患者自体细胞重新接种到去细胞化的人类大小心脏支架上，以生物工程手段构建功能性心脏，有望克服这些障碍3。
一个关键步骤 &#34;工程学&#34; 心脏的构建需要具有适当血管和实质结构、组成及功能的支架，以引导所递送细胞的排列与组织。在具备合适框架的情况下，接种于支架上的细胞应能识别该微环境，并作为器官的一部分发挥预期功能。我们认为，脱细胞器官细胞外基质（dECM）具备理想支架所需的各项特性。
通过利用器官固有的血管系统，可通过顺行或逆行灌注实现复杂完整器官的脱细胞化4，从而在保留精细的三维细胞外基质和血管结构的同时去除细胞成分2,5,6,7。功能性血管系统在组织工程完整器官中至关重要，其作用与体内in vivo相同，即实现营养物质输送和代谢废物清除8。冠状动脉灌注脱细胞化方法已被证实可有效制备大鼠4、猪4,7,9,10,11,12,13以及人类5,7,14,15,16的脱细胞心脏。然而，瓣膜、心房及其他&#34;较薄&#34;区域的结构完整性可能受到损害。
可通过压力控制7,9,10,11,12或灌注流速控制13,17从猪心脏获取人尺寸的脱细胞心脏支架，也可通过压力控制5,7,14,15从人类供体心脏获取。人类供体心脏的脱细胞过程在直立位、80–100 mmHg压力控制条件下需4–8天5,15,16，或在60 mmHg压力控制条件下持续16天14。在顺行性压力控制脱细胞过程中，主动脉瓣的功能完整性对于维持冠状动脉灌注效率及主动脉根部稳定的压力至关重要。我们先前的研究表明，心脏在脱细胞过程中的摆放方向会影响其冠状动脉灌注效率，从而最终影响支架的完整性9。
作为我们先前工作的延续9，我们提出了一种新概念，即添加一个类似心包的囊袋以改善全心脏脱细胞效果。我们描述了将人类心脏置于加压囊袋内、倒置定向，并在主动脉根部维持120 mmHg压力条件下进行脱细胞的过程。该方案包括在脱细胞过程中监测流动曲线并收集流出液，以评估冠状动脉灌注效率和细胞碎片清除情况。随后进行生化检测，以验证该方法的有效性。

<table><tbody><tr><td>2-0 丝线缝合线</td><td>Ethicon</td><td>SA85H</td><td>用于结扎上腔静脉和下腔静脉的缝合线</td></tr><tr><td>1/4&quot; x 3/8&quot; 带鲁尔接头的连接器</td><td>NovoSci</td><td>332023-000</td><td>连接主动脉与肺动脉</td></tr><tr><td>Masterflex 铂金固化硅胶管</td><td>Cole-Parmer</td><td>HV-96410-16</td><td>用于连接心腔或静脉的导管</td></tr><tr><td>灌注与流出管线</td><td>Smiths Medical</td><td>MX452FL</td><td>用于使溶液流经血管系统</td></tr><tr><td>聚酯袋（Ampak 400 系列 SealPAK 袋）</td><td>Fisher scientific</td><td>01-812-17</td><td>模拟心包膜的袋子，用于脱细胞过程中容纳心脏</td></tr><tr><td>Snapware Square-Grip 密封罐</td><td>Snapware</td><td>1022</td><td>1 升容器，用于心脏灌注</td></tr><tr><td>黑色橡胶塞</td><td>VWR</td><td>59586-162</td><td>用于密封灌注容器</td></tr><tr><td>蠕动泵</td><td>Harvard Apparatus</td><td>881003</td><td>用于通过流入管线泵送液体并排出废液</td></tr><tr><td>2 L 带侧臂底部的抽吸瓶</td><td>VWR</td><td>89001-532</td><td>用于盛放溶液或灌注液</td></tr><tr><td>Quant-iT PicoGreen dsDNA 检测试剂盒</td><td>Life Technologies</td><td>P7589</td><td>用于定量双链 DNA</td></tr><tr><td>小牛胸腺 DNA 标准品</td><td>Sigma</td><td>D4522</td><td>DNA 标准品</td></tr><tr><td>Blyscan 糖胺聚糖（GAG）检测试剂盒</td><td>Biocolor Ltd</td><td>Blyscan #B1000</td><td>GAG 检测试剂盒</td></tr><tr><td>酶标仪</td><td>Tecan</td><td>Infinite M200 Pro</td><td>用于分析检测</td></tr><tr><td>GE 透视成像系统</td><td>General Electric</td><td>OEC 9900 Elite</td><td>血管造影</td></tr><tr><td>Visipaque</td><td>GE</td><td>13233575</td><td>造影剂</td></tr></tbody></table>

在加压袋内以倒置方向对完整人类心脏进行脱细胞处理

Decellularization of Whole Human Heart Inside a Pressurized Pouch in an Inverted Orientation

终末期心力衰竭患者的根本解决方案是器官移植。然而，供体心脏数量有限，且需要长期使用免疫抑制剂，最终仍可能发生排斥反应。构建具有功能的自体生物人工心脏有望解决上述难题。由支架和细胞组成的生物制造心脏是一种可行策略。通过脱细胞化人类或大型动物（如猪）的心脏，可以获得具有组织特异性成分以及微观和宏观结构的天然支架。脱细胞化过程旨在清除细胞碎片，同时保留三维细胞外基质和血管系统，以便在后续时间点进行&#34;细胞重植&#34;。基于我们的一项新发现——复杂器官可通过灌注方式进行脱细胞化，我们开发出一种更为&#34;生理化&#34;的方法，用于处理无法用于移植的人类心脏：将心脏倒置置于加压袋内，并在可控压力条件下进行操作。使用加压袋的目的是在主动脉瓣两侧形成压力梯度，使其保持关闭状态，从而改善心肌灌注。在脱细胞化过程中同步评估流体动力学变化和细胞碎片清除情况，可同时监测灌注液流入和碎片流出，由此制备出的支架既可用于简单的心脏修复（例如作为补片或瓣膜支架），也可作为完整器官的支架。

在以120 mmHg恒定压力通过顺行主动脉灌注进行为期7天的脱细胞处理后，人的心脏变为半透明状（图6B）。将心脏大体解剖为19个部分，用于生化分析（DNA、GAG和SDS）（图6C），以评估最终的脱细胞产物。
在整个脱细胞过程中，由于压力保持恒定，不同溶液的灌注流速随之变化。进入主动脉的流速（Ao）图7A) 随灌注液从高渗转变为低渗，灌注流速逐渐从 96.68±23.54 降至 80.59±12.41 mL/min（下降 16.64%）。相反，当灌注液从低渗转变为 SDS 时，流速从 71.68±10.63 增至 110.61±14.40 mL/min（增加 54.31%）。在 SDS 灌注期间，灌注流速在 110±14.40 至 176.31±44.03 mL/min 之间...

该方法通过基于渗透冲击和离子型去污剂灌注的简单方案，实现对复杂实体器官的脱细胞处理，同时最大程度减少对器官基质的破坏。该技术包含一种新颖的人类心脏脱细胞方法，将心脏置于加压袋内，并对流动动力学和细胞碎片流出进行实时监测。

终末期心力衰竭患者的最终治疗方案是器官移植。但供体心脏有限，且需要进行免疫抑制治疗，以及……

该方法有助于解答有关构建可血管化支架的关键问题，而可血管化支架正是组织工程领域的圣杯。该技术的主要优势在于，采用倒置方向的加压袋可提高对不可移植人源器官的脱细胞效率，并使我们能够在适当的 timeframe 内以无菌方式完成操作。为准备心脏的脱细胞处理，首先应进行内部检查以排除可能存在的缺陷。如果存在房间隔缺损，使用适当的缝线进行缺损修补。接着，用2-0丝线结扎上腔静脉和下腔静脉。用5-0 PROLENE缝线缝合右心房壁，并将主动脉从主肺动脉上分离，以备后续插管。根据血管的直径，将连接器插入主动脉和肺动脉，并用2-0丝线缝合固定连接器。通过其中一个肺静脉开口，将导管经左心房插入左心室，将灌注管路连接至主动脉中的连接器，将流出管路连接至肺动脉中的连接器。将准备好的心脏以倒置方向放入聚酯袋中，再将该袋放入灌流容器内。根据容器的直径，将各管路连接至橡胶塞上相应的端口，并将橡胶塞插入灌注容器的盖子中，以密封聚酯袋。然后通过橡胶塞的灌注端口灌注PBS，以确认肺动脉及插入左心室的管路有流出液，并利用此流动清除血管系统内残留的血液痕迹。当心脏准备就绪后，将组装好的生物反应器垂直放置，并将灌注管路、压力头管路、肺动脉流出管路以及生物反应器引流管路连接至灌注用生物反应器顶部橡胶帽表面的端口。然后，在主动脉根部压力恒定为120毫米汞柱的条件下，依次使用高渗溶液脱细胞4小时，低渗溶液脱细胞2小时，十二烷基硫酸钠（SDS）溶液脱细胞120小时，最后用120升磷酸盐缓冲液（PBS）进行终末冲洗。在PBS冲洗的最后10升中，向灌注液中加入500毫升无菌的2.1%过氧乙酸溶液（用10 N氢氧化钠中和），以对支架进行灭菌。通常，在脱细胞过程中，随着灌注液从高渗转变为低渗，进入主动脉的流速会逐渐降低。相比之下，当灌注液从低渗溶液更换为SDS时，流速增加，此时灌注流速表现出波动。肺动脉流出率在高渗和低渗溶液作用下呈现相似趋势。然而，在SDS灌注期间，流出率总体呈下降趋势。随着不同试剂通过血管灌注，冠状动脉灌注效率也会随时间推移而下降。由于肺动脉和左心室的流出灌注液被同时收集，可通过光谱法比较两者所含碎片的含量。在灌注过程中，两处血管流出液的浊度均随时间逐渐降低，但在初始灌注阶段，肺动脉流出液的浊度变化较左心室更为显著，颜色改变更为迅速。通过对六个人类脱细胞心脏进行二辛可宁酸蛋白测定，评估流出液浊度与细胞碎片之间的相关性，结果显示蛋白质浓度与流出液浊度之间存在线性关系。在实施该操作过程中，重要的是监测灌注流速，并定期收集灌注液，以实际监控灌注进程。完成该操作后，可采用其他技术（如力学性能评估或无菌检测）来评价支架的保真度及其在再细胞化以生成功能性心肌组织中的潜在应用价值。该技术问世后，为再生医学和组织工程领域的研究人员探索全血管化器官的构建开辟了道路，彻底改变了实体器官移植领域。请注意，操作人体

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Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

倒置方向下整个人的心脏在加压袋内的去细胞化

我们描述了新生大鼠心肌细胞的分离方法，以及将细胞包封于纤维蛋白水凝胶支架中用于组织工程的制备步骤。我们还介绍了培养结束后对组织工程心肌组织的分析方法，包括电刺激下产生的主动收缩力、细胞活力检测以及免疫组织化学染色。...

用于心脏组织工程的纤维蛋白水凝胶包封心肌细胞

本视频展示了一种通过血管系统顺行灌注去污剂来制备脱细胞化细胞外基质（ECM）支架的方法。这些结构化的ECM支架随后可用于分析与心肺疾病相关的ECM重塑过程。...

心肺复合体脱细胞：一种用于小鼠模型心脏和肺脏脱细胞的技术

本文描述了一种通过逆行灌注快速且完全去除完整猪心脏中细胞成分的方法。该方法可获得具有部位特异性的心脏细胞外基质支架，具有多种临床应用的潜力。...

通过逆行冠状动脉灌注法对猪心脏进行脱细胞处理的步骤

在这些研究中，我们提供了一种用于再生研究的新型新生小鼠心脏支架的方法学。...

新生心脏支架：再生研究中的新型基质

本方案描述了一种将完整心脏心肌组织与磁共振成像（MRI）进行三维比对的新方法。该方法旨在对慢性猪心肌梗死模型中梗死边缘区的心肌内注射进行精确定量评估。...

三维全心心肌组织分析

已开发并描述了多种从大鼠心脏中分离不同心肌细胞类型的方案。本文介绍了一种优化的方案，可从单次制备中分离出高质量的主要心肌细胞类型（心肌细胞、内皮细胞和成纤维细胞），从而降低实验成本。...

从成年大鼠心脏中同时分离高质量心肌细胞、内皮细胞和成纤维细胞

本方案描述了在保留细胞外基质成分的同时，对人心肌组织进行完全脱细胞处理。对细胞外基质的进一步加工可制备出微颗粒及一种具有细胞保护作用的自组装水凝胶。...

人类心脏组织制备自组装细胞外基质水凝胶的处理方法 体外 和 体内 应用

心脏细胞外基质（ECM）是由多种分子构成的复杂网络，可在整个生命周期中协调组织和器官的关键生理过程，并经历生理性的重塑。对胎儿和成人心脏进行标准化脱细胞处理，可在三维环境中保留其天然结构和生物力学特性，从而实现两种组织的对比实验研究。...

用于体外研究的胎儿与成人心脏组织外植体的可比性脱细胞三维样平台

本方案旨在对小鼠的心脏和肺进行脱细胞处理。所获得的细胞外基质（ECM）支架可通过免疫染色和成像，以绘制其组分的位置与拓扑结构图谱。...

小鼠心肺复合体的脱细胞化

本实验方案旨在介绍并演示一种高度定向的人类心肌组织三维（3D）微流控模型的构建方法。该模型由干细胞来源的心肌细胞与心脏成纤维细胞（CFs）在仿生性胶原基水凝胶中共培养形成，可用于心肌组织工程、药物筛选及疾病建模等应用。...

在微流控平台上构建三维有序的人类心脏组织

本方案介绍了一种综合性的分析流程，用于分析来自人类心脏的样本，涵盖微观和宏观尺度。...

人类心脏多尺度三维解剖研究流程

了解利用加压袋倒置方向进行整个人心脏去细胞化的创新方法。该技术通过实时监测流动动力学，在无菌环境下高效去除细胞成分，同时最大程度保留器官基质结构，为组织工程领域生成血管化支架提供重要技术支撑。

在加压袋内以倒置方向对完整人类心脏进行脱细胞处理

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