2018年9月14日
为了检测药理学试剂对蜜蜂大脑不同区域磷脂酶C(PLC)的抑制作用,我们提供了一种生物化学检测方法,用于测定这些区域中的PLC活性。该检测方法可用于比较不同组织之间的PLC活性,也可用于比较表现出不同行为的蜜蜂之间的PLC活性。
该方法有助于回答神经科学领域中的关键问题,例如不同脑区中磷脂酶C(PLC)的活性是否以及如何参与蜜蜂的大脑功能。该技术的主要优势在于,研究人员可以利用标准的实验室设备轻松开展实验,因为本方案仅需基本的操作步骤。首先,将装有蜜蜂的50 ml离心管置于冰上30分钟,以麻醉蜜蜂。接下来,将一块牙科蜡对折后放入塑料培养皿中,制备解剖平台。在双目显微镜下,使用镊子将蜜蜂的头部与身体分离。然后,将头部固定在牙科蜡上,并在每根触角基部插入昆虫针,使头部内部朝上固定。随后,倒入足够的生理盐水覆盖头部。使用镊子去除触角。接着,用解剖刀在触角基部附近做一水平切口,并在复眼边界处做一纵向切口。在头部顶端做一水平切口,移除头壳以在脑组织上方打开一个窗口。然后,用镊子从骨片上移除小眼面以及从脑内表面移除气管。接着,将镊子直接插入眼壳下方,去除复眼壳与小眼面之间的结缔组织。之后,移除复眼的头壳和小眼面。随后,用镊子小心地清除脑内表面残留的气管。然后,切断脑组织与周围组织之间的结缔组织,将脑组织从头壳中分离出来。用镊子将脑后表面的气管剥离。接着,用解剖刀切断蘑菇体(MBs)与垂直叶附近其他脑区之间的连接。将分离出的MBs及任何残留的脑组织放入1.5 ml离心管中,并用干冰迅速冷冻。首先,向冷冻的脑组织中加入10 ml匀浆缓冲液。使用塑料研磨棒在1.5 ml离心管中手动匀浆组织。随后,将匀浆后的组织溶液转移至同一批次的下一份组织中,并重复匀浆过程。然后,加入30
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本研究介绍了一种生化检测方法,旨在测定蜜蜂脑部不同区域的磷脂酶C(PLC)活性。该检测方法有助于比较不同组织间以及表现出不同行为的蜜蜂个体之间的PLC活性。
在特定脑区中对磷脂酶C(PLC)活性进行定量检测,可为模型系统中神经信号传导假说的机制性风险评估提供支持。该实验流程通过将生化活性与特定脑区功能相关联,支持靶点的早期验证,并阐明从分子表型到行为表型的转化连续性。该方法为比较神经生物学研究和药理学干预提供了可扩展的非放射性检测平台。
该PLC活性测定实验位于早期发现至临床前研究的连续过程中,可在神经组织模型中进行假设验证和药理学确证。