Name: 基于网模的无支架三维心脏组织创建方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: 学习基于网模的无支架三维心脏组织创建方法，利用多能干细胞分化的心肌细胞、成纤维细胞和内皮细胞形成球状体，构建具有结构完整性和同步搏动功能的心脏组织。该方法为心脏再生医学研究提供了高效且可扩展的技术方案。

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作者们感谢以下资助来源：心血管研究魔法基金（Magic That Matters Fund for Cardiovascular Research）。

1. 心肌细胞的制备
<ol>
	<li>用基底膜基质包被6孔板，并按照先前所述方法培养人诱导多能干细胞（hiPSCs）17。</li>
	<li>使用先前所述方法将hiPSCs分化为hiPSC来源的心肌细胞（hiPSC-CMs）18。</li>
	<li>在分化后16–18天，用2 mL不含钙和镁的1×磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗每孔，随后在室温下加入1 mL/孔胰蛋白酶或细胞解离试剂（见材料表），孵育5分钟，使心肌细胞悬浮。</li>
	<li>使用等体积的添加B-27的RPMI（Roswell Park Memorial Institute）细胞培养基（RPMI/B-27细胞培养基）中和胰蛋白酶或细胞解离试剂（见材料表），并通过移液吹打数次以松解贴壁细胞。</li>
	<li>用10 mL血清移液管收集悬浮的心肌细胞，并转移至50 mL锥形管中。</li>
	<li>在室温下以250 × g 离心5分钟，使细胞沉淀。</li>
	<li>用10 mL RPMI/B-27细胞培养基重悬细胞沉淀。</li>
	<li>取20 µL细胞悬液与等体积的0.4%台盼蓝溶液混合，轻轻混匀。</li>
	<li>使用手动血细胞计数板对细胞悬液进行计数，测定细胞浓度和细胞活力。</li>
</ol>
2. 成纤维细胞的制备
<ol>
	<li>按照先前所述方法启动人成人心室型心脏成纤维细胞（HCF）细胞系的培养16。</li>
	<li>在室温下用适量胰蛋白酶或细胞解离试剂（见材料表）孵育HCF细胞5分钟，使细胞悬浮。对于T175培养瓶，使用10 mL胰蛋白酶或细胞解离试剂16。</li>
	<li>用等体积的培养基中和胰蛋白酶或细胞解离试剂（见材料表），然后将样品转移至50 mL锥形管中，在室温下以250 × g离心5分钟，获得细胞沉淀。</li>
	<li>用10 mL成纤维细胞生长培养基重悬细胞沉淀（见材料表）。</li>
	<li>取20 µL HCF细胞悬液与等量0.4%台盼蓝溶液混合，轻轻混匀。</li>
	<li>使用自动细胞计数仪或手动血细胞计数板对新制备的细胞悬液进行计数，测定细胞浓度和细胞活力。</li>
</ol>
3. 内皮细胞的制备
<ol>
	<li>按照先前所述方法启动人脐静脉内皮细胞（HUVEC）系的培养17. 用适量的胰蛋白酶或细胞解离试剂孵育 HUVECs，使其悬浮（参见 材料表室温下孵育 3 分钟17. 用完全培养基中和胰蛋白酶或细胞解离试剂（参见 材料表) 使用等体积的培养基重悬，然后转移至50 mL锥形管中，在250 × g条件下离心细胞悬液 g 室温下离心5分钟以获得沉淀。 
	注意：对于T175培养瓶，使用10 mL胰蛋白酶或细胞解离试剂。</li>
	<li>将沉淀物重悬于10 mL内皮细胞生长培养基中（参见 材料表).</li>
	<li>将20 µL HUVEC悬液与等体积的0.4%台盼蓝溶液混合染色，轻轻混匀。</li>
	<li>使用自动细胞计数器或手动血细胞计数板对细胞悬液进行计数，以获得细胞浓度和细胞活力。</li>
</ol>
4. 悬滴球状体的制备
<ol>
	<li>将含有850个微孔（每个微孔直径为350 µm）的悬滴装置放入无菌的6孔板中。</li>
	<li>按照上述方法分离三种细胞：hiPSC-CMs、HCFs和HUVECs。将它们以70% iPSC-CMs、15% HCFs和15% HUVECs的比例混合，加入RPMI/B-27细胞培养基，使细胞浓度达到每毫升2,475,000个细胞，置于50 mL锥形管中。</li>
	<li>向置于6孔板中的超低吸附悬滴系统（微孔直径为350 µm）的每孔中加入4 mL细胞悬液（每毫升含2,475,000个细胞）。</li>
	<li>细胞悬液加入悬滴装置后12小时内，类球体将自发形成。继续在37 °C、5% CO2和95%湿度条件下培养，总培养时间为72小时（3天），以促进类球体的成熟。</li>
	<li>培养72小时后，将悬滴装置放入含有培养基的培养皿中，轻轻旋转以使类球体从装置底部的微孔中释放，从而收集类球体。</li>
</ol>
5. 使用新型网状模具制备三维细胞贴片
<ol>
	<li>使用无菌镊子辅助，将底座、底部方板、底部网片以及10层侧网组装，构建新型模具。首先，利用角柱将底座、底部方板和底部网片堆叠并对齐。然后，将10层侧网以交替方向逐层堆叠，形成由精细不锈钢针组成的网状结构。</li>
	<li>用PBS或培养基冲洗填充底座，以降低表面张力，随后将组装好的模具转移至填充底座上。</li>
	<li>采用相同方法用PBS或培养基润湿网状模具的腔体。缓慢将类球体填充至预设尺寸（2 × 2 × 1 mm、4 × 4 × 1 mm 或 6 × 6 × 1 mm）的腔体内。 
	注意：确保填入腔体的类球体体积达到预期体积的120%，以保证细胞聚集体紧密连接并保持静止状态。</li>
	<li>将顶部网片和顶部方板安装到角柱上，并固定塞子和固定管，防止类球体被冲出。</li>
	<li>将装填完毕的网状模具系统转移至含有6 mL RPMI/B-27细胞培养基的6孔板中，或转移至无菌容器中，容器内需加入足量培养基以完全覆盖组装好的模具。</li>
	<li>将装有模具系统的6孔板置于摇床上，在3,000 – 4,000 × g 条件下孵育7 – 10天。 
	注意：孵育时间由心肌补片的大小决定。对于较大的补片，需延长孵育时间以促进心肌补片的成熟。</li>
</ol>
6. 从新型网状模具上移除贴片
<ol>
	<li>将模具系统从培养基中取出，放置在无菌10 cm培养皿内的灭菌操作垫上。</li>
	<li>移除固定管、塞子、顶部方形板和顶部网片。使用无菌镊子逐一小心地滑出层叠的侧网片。脱模后，完整的心肌补片即位于底部网片上。</li>
	<li>用无菌镊子夹起带有补片的底部网片，将其转移至含有5 mL RPMI/B27培养基的35 mm培养皿中。通过在培养皿中缓慢旋转网片，或使用无菌细胞刮棒，轻轻将补片从底部网片上松解。脱离底部网片后，心肌组织可在RPMI/B27培养基中继续培养。</li>
	<li>将游离的三维心肌补片继续在35 mm培养皿中孵育。自脱模后约24小时起，即可观察到功能性同步搏动。</li>
	<li>将补片从网状模具取出后，观察其形态是否保持完整，并可见同步搏动强度随时间逐渐增强。 
	注意：基于三维网状模具制备的心肌补片在脱模后表现出组分心肌球之间的电整合性。我们观察到搏动频率在每分钟60至80次之间，并可持续超过60天。</li>
</ol>

<ol><li>Gao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+Tissue+Engineering+With+Cells+Derived+From+Human-Induced+Pluripotent+Stem+Cells+and+a+Native-Like%2C+High-Resolution%2C+3-Dimensionally+Printed+Scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Myocardial Tissue Engineering With Cells Derived From Human-Induced Pluripotent Stem Cells and a Native-Like, High-Resolution, 3-Dimensionally Printed Scaffold.</a> Circulation Research. 120 (8), 1318-1325 (2017).</li>
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<li>Baudin, B., Bruneel, A., Bosselut, N., Vaubourdolle, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+isolation+and+culture+of+human+umbilical+vein+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">A protocol for isolation and culture of human umbilical vein endothelial cells.</a> Nature Protocols. 2 (3), 481-485 (2007).</li>
<li>Pimentel, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+fabrication+of+thick+and+densely+populated+soft+constructs+with+complex+and+actively+perfused+channel+network%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional fabrication of thick and densely populated soft constructs with complex and actively perfused channel network.</a> Acta Biomaterialia. 65, 174-184 (2018).</li>
<li>Shimizu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polysurgery+of+cell+sheet+grafts+overcomes+diffusion+limits+to+produce+thick%2C+vascularized+myocardial+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Polysurgery of cell sheet grafts overcomes diffusion limits to produce thick, vascularized myocardial tissues.</a> The FASEB Journal. 20 (6), 708-710 (2006).</li>
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<li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+number+per+spheroid+and+electrical+conductivity+of+nanowires+influence+the+function+of+silicon+nanowired+human+cardiac+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Cell number per spheroid and electrical conductivity of nanowires influence the function of silicon nanowired human cardiac spheroids.</a> Acta Biomaterialia. 51, 495-504 (2017).</li>
<li>Karra, R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redirecting+cardiac+growth+mechanisms+for+therapeutic+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Redirecting cardiac growth mechanisms for therapeutic regeneration.</a> Journal of Clinical Investigation. 127 (2), 427-436 (2017).</li>
<li>Bartholoma, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vitro+reaggregates+of+embryonic+cardiomyocytes%3A+a+potential+model+system+for+monitoring+effects+of+bioactive+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Screening%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vitro reaggregates of embryonic cardiomyocytes: a potential model system for monitoring effects of bioactive agents.</a> Journal of Biomolecular Screening. 10 (8), 814-822 (2005).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

该方法的重要性在于其可重复性以及所获得的多层心肌组织的有效性。在心肌组织工程领域，当前目标之一是找到一种构建能够搏动、具有多层结构且功能完整的三维心肌补片的方法。我们报道了一种高效且可重复的多层心肌组织构建方法，即通过将由心肌细胞、内皮细胞和成纤维细胞组成的球状体直接手动接种到一种新型网状模具中来实现。本方法所使用的网状模具具有多种不同尺寸，可用于制备大小从 2 × 2 × 1 mm 到 6 × 6 × 1 mm 不等的组织。我们所描述的技术也可根据所需组织几何形状的不同，调整用于其他形状或系统的模具。文中所述的细胞浓度和比例此前已针对人诱导多能干细胞来源的心肌细胞（hiPSC-CMs）进行了优化，若更换为其他细胞类型，则需进一步评估和调整。
的 体外 利用生物打印技术构建三维心脏组织的研究已开展，旨在开发治疗和诊断模型。然而，现有的生物打印方法较为繁琐，需要耗费大量时间，并依赖针头或支架材料等辅助支撑结构。这些辅助支撑结构的存在会降低营养物质和氧气的扩散效率18因此，由于缺乏为组织供氧和营养的毛细血管，中心坏死是当...

目前心脏组织工程的目标是开发出能够替代或修复受损心肌组织结构与功能的治疗方法1。构建具有天然心脏组织重要收缩性和电生理特性的三维心脏组织模型的方法正在迅速发展2,3。已有多种策略被探索并应用于相关研究4,5，这些方法包括使用特定的合成与天然生物活性水凝胶（如明胶、胶原蛋白、纤维蛋白和多肽）6，以及生物墨水沉积技术2和生物打印技术7。
已有研究表明，无支架方法能够产生与基于生物材料的方法相当的组织，同时避免了引入外源性支架材料所带来的缺点8。Oren Caspi et al. 证明，通过整合多种类型的细胞，可生成高度血管化的人工工程化心肌组织9。Chin et al. 开发了一种利用球状体进行心脏补片3D打印的方法，所获得的补片由心肌细胞、成纤维细胞和内皮细胞按70:15:15的比例组成10。研究表明，球状体作为无支架心肌组织构建的“基本单元”具有显著效果，因其对缺氧具有较强耐受性，并具备足够的机械完整性以满足植入需求11,12。先前的研究已报道了多种球状体的制备方法，包括悬滴法、旋转瓶培养13、微流控系统14，以及使用未包被或包被琼脂糖微模具的非黏附性培养表面15。在本实验方案中，我们采用悬滴装置，该装置含有微孔结构，可同时浓缩数百个球状体。
本研究提出了一种新颖且高效的无支架心肌组织构建方法，该方法包括将球状体手动接种至方形模具腔内，并在摇床中孵育以促进组织成熟。在常规静态培养条件下，氧气扩散仅限于组织结构的外层区域，导致中心部位发生坏死。然而，使用网状模具后，接种于模具内的所有球状体均浸没在培养基中，并处于持续的流体运动状态，从而增强了营养物质和氧气的扩散。此外，这种基于模具的方法能够以最少的人工操作同时制备不同尺寸的组织片，且所得组织可轻松从模具中取出。该创新方法实现了无支架、多层心肌补片的高效且可重复的构建。

<table><tbody><tr><td>人源心脏成纤维细胞（HCF）</td><td>Sciencell</td><td>6310</td><td></td></tr><tr><td>FM-2 含基础培养基</td><td>Sciencell</td><td>2331</td><td>HCF 培养基</td></tr><tr><td>人脐静脉内皮细胞（HUVEC）</td><td>Lonza</td><td>CC-2935</td><td></td></tr><tr><td>EGM+Bullet Kit&amp;nbsp;</td><td>Lonza</td><td>CC5035</td><td>HUVEC 培养基</td></tr><tr><td>E8 培养基&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A1517001</td><td>HiPSC 培养基</td></tr><tr><td>Geltrex&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A1413202</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express 酶（1X）</td><td>Thermo Fisher</td><td>12604013</td><td>胰蛋白酶及细胞解离试剂</td></tr><tr><td>RPMI 培养基</td><td>Invitrogen</td><td>11875093</td><td>添加 B-27 补充剂的 RPMI 培养基为 hiPSC-CM 培养基</td></tr><tr><td>B-27 补充剂（50x）</td><td>Thermo Fisher</td><td>17504044</td><td>添加 B-27 补充剂的 RPMI 培养基为 hiPSC-CM 培养基</td></tr><tr><td>台盼蓝溶液，0.4%</td><td>Thermo Fisher</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>新型网状模具&amp;nbsp;</td><td>TissueByNet Co.,Ltd</td><td>NM25-1</td><td></td></tr><tr><td>悬滴培养板</td><td>Kuraray Co.,Ltd</td><td>MPc350</td><td></td></tr><tr><td>6 孔板&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS-3516</td><td></td></tr></tbody></table>

一种基于网状模具的无支架三维心脏组织构建方法

A Net Mold-based Method of Scaffold-free Three-Dimensional Cardiac Tissue Creation

本方案描述了一种基于新型简易网状模具的三维（3-D）心肌组织构建方法，无需额外的支架材料。分离人诱导多能干细胞来源的心肌细胞（iPSC-CMs）、人心脏成纤维细胞（HCFs）和人脐静脉内皮细胞（HUVECs），并制备成细胞悬液，其中含70% iPSC-CMs、15% HCFs和15% HUVECs。将细胞悬液置于超低吸附性的“悬滴”培养系统中进行共培养，该系统含有微孔结构，可同时浓缩数百个球形聚集体。细胞在共培养3天后自发聚集并形成具有搏动功能的球状体。收集球状体后接种至新型模具腔内，并在培养箱中置于摇床上继续培养。接种约7天后，球状体发育为成熟的、具有功能性的组织。所获得的多层组织由融合的球状体构成，具备良好的结构完整性和同步搏动特性。该新方法具有良好的可重复性和成本效益，未来有望成为治疗心力衰竭的工程化组织构建策略。

在我们的实验中，我们使用了含有70% iPSC-CMs、15% HCFs和15% HUVECs的细胞悬液，培养基为RPMI/B-27，细胞浓度为每毫升2,475,000个细胞。制备细胞悬液后，按照方案第4.3步所述，将4 mL细胞悬液加入超低吸附悬挂液滴系统的每个孔中。在37 °C、5% CO2和95%湿度条件下培养3天后，悬挂液滴系统可自发形成数百个跳动的球状体。培养72小时后，在4倍和10倍光学显微镜下可轻松观察到球状体的搏动，其平均直径为350 µm（图1）。
在实验方案第6.5步结束时，收集类球体后，可通过简单的移液方法轻松将类球体接种至模具中。培养过程中类球体在模具内发生融合；随后移除模具，即可获得具有机械完整性的完整心肌组织片。从模具中取出并继续培养24小时后，可观察到心肌组织出现功能性且同步的搏动，证实了类球体之间的机械整合（<strong class="x...

本方案描述了一种基于网状模具的方法，用于构建具有满意结构完整性和同步搏动行为的三维无支架心肌组织。

本方案描述了一种基于新型简易网状模具的无需额外支架材料制备三维（3-D）心肌组织的方法。

本方案描述了一种基于新型简易模具的三维心肌组织构建方法，该方法利用球形细胞聚集体作为无支架心肌组织构建的工具。在我们的实验中，分离并使用了三种细胞：人诱导多能干细胞来源的心肌细胞、人心脏成纤维细胞和人脐静脉内皮细胞，以制备单细胞悬液。细胞组成为70%心肌细胞、15%成纤维细胞和15%内皮细胞，置于50 mL锥形管中。随后，我们将细胞悬液分配至超低吸附悬滴系统的每个孔中，三天后可自发形成数百个跳动的球状体。然后收集这些球状体，并将其植入一种新型模具腔内。将组织置于含培养基的无菌容器中，在培养箱内的摇床上维持数天。随后移除模具，得到具有机械完整性的无支架组织片。悬滴装置是一种可重复使用的超低吸附孔板，含有850个微孔，每个微孔直径为350微米。该悬滴装置与标准六孔板兼容。制备细胞悬液后，将含有一千万个细胞的四毫升细胞悬液分别加入悬滴系统的每个孔中。将装置置于37°C、5%二氧化碳和95%湿度条件下培养。72小时后，可观察到自发形成搏动的球状体，其平均直径为350微米。通过将悬滴装置放入另一含有培养基的培养皿中，轻轻旋转以释放类球体，使其从悬滴系统底部的孔隙中漂出，从而收获类球体。这是用于三维、无支架心脏组织构建的新型模具的示意图。该装置包括操作垫、填充底座和新型模具。该新型模具由一个底座、一个底部方形板、一个底部网片、10层由精细不锈钢齿状结构制成的侧网、一个顶部网片、一个顶部方形板、固定管和止动销组成。该新型模具系统可制备不同尺寸的组织，包括2×2毫米、4×4毫米以及6×6毫米。使用角柱将底部基底方板和底网堆叠并对齐。然后借助一对无菌镊子，将10层侧网以交替方向堆叠，形成由细小不锈钢针状突起构成的网状结构。接着用1倍磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗填充基底，以降低表面张力，便于将类球体植入新型模具中。在相同的甲烷中润湿新型模具型腔后，将球状体置入预设的所需尺寸的型腔中。放置后，过量的培养基通过网状模具排出，使球状体充满并形成预定义型腔的形状。然后将顶部网片和顶方板组装到角柱、止动销上，并固定夹持管，以防止球状体被冲出。将填充好的新型模具系统转移至六孔板中，加入6毫米的B-27添加培养基，然后置于摇床上的培养箱中，在30至40 RPM条件下培养7至10天。培养时间可根据心肌补片的大小进行调整。培养结束后取出系统，移除固定管、塞子、顶部方形板和顶部网筛。然后逐一小心地滑出分层的侧网，注意不要破坏组织。在移除所有侧网后，可在底部网的上方获得一个完整的心肌补片。24小时内可观察到功能性同步搏动。这种基于新型模具的方法是一种高效且简便的三维无支架心脏组织构建技术，所需人工操作极少。所获得的多层组织由融合的球状体构成，具有良好的结构完整性和同步搏动行为。该基于模具的创新方法为现有工程化组织的生物制造技术提供了一种成本低、可扩展的替代方案。

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Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

基于网模的无支架三维心脏组织创建方法

在本实验方案中，我们展示了利用毛细力光刻技术，采用两种不同的高分子材料制备仿生心脏细胞培养基质的方法。in vitro 和 in vivo...

毛细力光刻技术在心肌组织工程中的应用

生成排列整齐的心肌组织是将干细胞生物学的最新进展应用于临床实用目的的关键要求。本文中，我们描述了一种微接触印刷技术，可精确控制细胞形态与功能。利用高度纯化的胚胎干细胞来源的心脏前体细胞，我们进而生成了各向异性的功能性心肌组织。...

通过微接触印刷技术生成取向功能性心肌组织

在这些研究中，我们提供了一种用于再生研究的新型新生小鼠心脏支架的方法学。...

新生心脏支架：再生研究中的新型基质

本方案描述了无需使用生物材料的三维心脏组织生物打印技术。三维生物打印的心脏补片表现出组分球状体之间的机械整合，在心脏组织再生及作为心脏疾病的三维模型方面具有广阔的应用前景。...

利用3D生物打印技术构建表现出类球体机械整合的心脏组织

本方案旨在生成含有源自人诱导性多能干细胞的心血管细胞的网状工程化心肌组织，以用于心脏疾病细胞移植治疗的研究。...

由人iPS细胞衍生的网格状工程化心肌组织制备及其在体内心肌修复中的应用

本文介绍一种易于使用的3D自组装心脏微组织阵列制备方法，该阵列由预先分化的人诱导多能干细胞来源的心肌细胞、心脏成纤维细胞和内皮细胞组成。这种操作简便且所需细胞量少的心脏微组织制备技术，可用于疾病建模及药物研发的早期阶段。...

利用人iPSC来源的心肌细胞、心脏成纤维细胞和内皮细胞构建三维心脏微组织阵列

工程化组织高度依赖于适当的血管网络，以提供必需的营养物质和气体，并清除代谢废物。本研究中，通过内皮细胞与支持细胞的逐步接种方案，在高通量平台上构建出高度有序的血管网络，用于在可控的三维环境中研究血管发育行为。...

在镶嵌式支架上逐步接种细胞以研究出芽型血管

本实验方案旨在介绍并演示一种高度定向的人类心肌组织三维（3D）微流控模型的构建方法。该模型由干细胞来源的心肌细胞与心脏成纤维细胞（CFs）在仿生性胶原基水凝胶中共培养形成，可用于心肌组织工程、药物筛选及疾病建模等应用。...

在微流控平台上构建三维有序的人类心脏组织

患者特异性模型在制定或学习手术方案时，能够提高外科医生和进修医生的信心。三维（3D）打印机可生成用于手术准备的足够细节，但无法复制组织的触觉真实感。本文介绍了一种用于制备患者特异性硅胶心脏模型的方案，结合了3D打印的精确性与模拟硅胶组织的特性。...

创建用于术前规划和动手培训的患者特异性硅胶心脏模型

本文介绍了一种可重复的方法，通过结合熔融电纺写入（MEW）法制备的聚己内酯（PCL）支架、纤维蛋白水凝胶以及人诱导多能干细胞来源的心肌细胞和成纤维细胞，生成三维心肌组织。该技术可精确控制支架结构，适用于临床前药物筛选和心脏疾病建模。...

利用聚己内酯支架的熔融静电纺丝书写技术与人诱导多能干细胞来源的心脏细胞生成三维人心肌组织

学习基于网模的无支架三维心脏组织创建方法，利用多能干细胞分化的心肌细胞、成纤维细胞和内皮细胞形成球状体，构建具有结构完整性和同步搏动功能的心脏组织。该方法为心脏再生医学研究提供了高效且可扩展的技术方案。

一种基于网状模具的无支架三维心脏组织构建方法

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