2019年1月7日
本文介绍了一种建立小鼠抑郁模型的方法,用于观察慢性不可预知性轻度应激(CUMS)相关的行为学变化,并评价逍遥散的抗抑郁作用。
该方法有助于回答利用逍遥散等传统中药在抑郁症防治领域中的关键问题。逍遥散是中国数千年来治疗心理疾病广泛使用的一种方剂。该技术的主要优势在于为逍遥散在抑郁症防治中的应用提供实验依据。该技术的意义延伸至抑郁症治疗的临床前研究,因为它提供了使用传统中药评估抗抑郁效果的标准化方案。
通常,初学者会遇到困难,因为建模过程非常复杂,且对抑郁行为的重要测量参数不易掌握。为诱导抑郁,连续21天每天对小鼠施加以下7种应激源中的任意2种。注意:在建模前每天给予两个治疗组小鼠药物,并向对照组和模型组小鼠提供0.5毫升蒸馏水。
通过清空每笼饲料使小鼠经历禁食处理,或通过移除饮水瓶使小鼠经历24小时禁水处理。使小鼠接受束缚应激处理,即将小鼠置于小型塑料容器中束缚3小时。
或者使用移除垫料的空笼子。另一种方法是,将水倒入每个笼子中,保持笼子潮湿24小时,使小鼠暴露于潮湿且被污染的笼子环境中。将5只小鼠放入同一个笼子中拥挤饲养25小时,使小鼠暴露于拥挤的笼养环境。
对于最后一步,将小鼠置于冰水游泳环境中,使每只小鼠在装有冰水的透明玻璃水族箱中游泳5分钟。最后,在建模结束前每周记录小鼠的毛发状态和体重,持续至第21天,并计算毛发状态的总评分。在蔗糖偏好试验的前两天,将小鼠单独饲养,每笼放置两个装有自来水的水瓶。
接下来两天,给小鼠提供两个装有1%蔗糖溶液的瓶子。最后一天,给小鼠提供两个瓶子持续24小时,一个装有自来水,另一个装有1%蔗糖溶液。为消除小鼠在饮水行为中的位置偏好,12小时后交换两个瓶子的位置。
记录消耗的蔗糖溶液和自来水的体积。最后,计算蔗糖偏好度。首先,用蓝色线条将一个四边、木质、黑色无光泽盒子的底部划分为25个相等的方格。
每次小鼠进入前,用5%酒精清洁旷场箱。然后将小鼠置于旷场中央。在旷场正上方约200厘米处悬挂一台高清数码相机,记录每只小鼠5分钟内的行为。
最后,使用视频追踪系统软件对小鼠行为视频进行评估和分析,并记录总运动距离和进入中心区域的次数数据。与模型组相比,连续给予逍遥散或氟西汀治疗后,小鼠的毛发状态明显改善。自第三周起,小鼠体重显著降低。
在基线时,所有组的小鼠蔗糖偏好相似。然而,在模型组中,经过3周应激处理后,蔗糖偏好显著下降。此外,所有小鼠在应激暴露前的基线期均表现出相似的行为状态。
然而,经过3周的应激暴露后,模型组在5分钟内移动的总距离显著低于对照组。与对照组相比,模型组进入中央区域的次数也显著减少。在进行该操作时,需要注意在每天造模前1至2小时进行此项行为学测试并给予两种药物,以确保观察到的效应确实由药物本身引起。
完成该操作后,可进一步开展其他方法,例如强迫游泳实验,以回答更多问题,如逍遥散是否能够改善抑郁小鼠在强迫游泳实验中的绝望行为?该技术建立后,为研究人员探索中药在抑郁症防治领域的效应及其潜在机制奠定了基础。
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本文介绍了一种通过慢性不可预见性轻度应激(CUMS)建立小鼠抑郁模型的实验方案,并评估了中药逍遥散的抗抑郁作用。
小鼠的标准化行为模型,例如慢性不可预测性轻度应激(CUMS)模型,在评估新型抗抑郁候选药物以及降低神经精神类早期阶段药物资产风险方面至关重要。通过定量行为终点指标和受控的组间比较,可对靶点参与度及功能结果评估提供可预测的可信度。本方案支持从发现到临床前评价的转化连续性,适用于包括传统药物候选物在内的神经活性化合物。
该方案将基于CUMS的行为学检测定位为神经精神药物研发中从早期发现到临床前候选药物评价的桥梁。