2018年10月25日
本文介绍一种制备 harvesting 针头的方案,该针头可用于采集全层皮肤组织,同时不会导致供体部位出现瘢痕。这些针头可与简单的采集系统结合使用,实现高通量采集。
该方法有助于解答皮肤组织再生领域中的关键问题,即如何替代天然皮肤中所含的多种细胞类型和结构。该技术的主要优势在于,能够以最小的供区并发症获取自体全层皮肤。本实验操作将由本实验室的研究助理 Bill Farinelli 进行示范。
按照文本方案中的描述,首先设置生产阶段。将两个切割轮同心安装到旋转工具上。在较大的高目数砂石切割轮上方,安装一个较小的低目数金刚石切割轮。
将带有可调节臂的顶置光源置于旋转工具上方,并使光线对准切割轮。为增强可视化效果,将解剖显微镜放置在制备装置上方,使目镜聚焦于切割片上。重塑针尖时,应佩戴护目镜和外科口罩,以防止细小的金属颗粒进入眼睛或呼吸道。
根据实验需求选择合适规格的皮下注射针。在每根采集针上标记出所需的长度。开启旋转工具电源,将针头垂直向下,利用外切割盘的边缘在标记处切断针头多余的长度。
将截短的平头针连接到生产阶段的雌性鲁尔锁接头上。调节水平旋转台,使针头与旋转工具上的切割盘平行,呈12度角。打开顶置光源,并在放大镜下观察针头的同时调整光源位置,直至光线从针头中线反射出来。
打开旋转工具的电源。然后使用平移台将针头向内侧切割盘推进。持续缓慢推进针头,使其紧贴切割盘,直至切割盘到达针头中线附近位置。
将切割好的针表面从内侧金刚石磨轮缓慢移至外侧磨石轮,以获得更精细的抛光效果,完成针表面的加工。将针从切割盘上移开。利用垂直旋转台将针旋转180度。
重复这些步骤以重塑针的另一侧。现在将针从制作台上取下。使用略小于针内径的金属丝清洁针内孔。
使用一根锋利的木棒,去除可能仍附着在新制成针头边缘的毛刺。当需要制备大量微柱时,从20毫升注射器上取下活塞,然后将注射器连接到抽吸接头上。
通过将采集针连接到注射器上来完成装置的组装。使用一段无菌吸液管将吸力接头连接至无菌吸液瓶。确保采集装置连接至允许液体顺畅流入吸液瓶的进液口。
现在将装置连接至负压源。通过将采集针插入皮肤来收集微柱。在采集过程中,间歇性地将采集针浸入无菌生理盐水容器中,以冲洗系统。
准备一根直径略小于收获针内径的金属丝或细针。如果针头堵塞,可将金属丝插入针管内以清除堵塞物。当收集罐中积累的微柱达到所需量时,断开装置的负压吸引。
然后将吸液瓶中的内容物倒入滤器中,以收集微柱。图中显示的是从正面和侧面观察的已完成的采集针。注意针尖处的两个切割点。
采集针应能够从全层皮肤组织中收集微柱,成功率约为80%至90%。在本图中,对勾标记代表一毫米。每个微柱应包含表皮、真皮以及部分皮下脂肪。
微柱可直接应用于伤口愈合,也可与不同的基质材料结合以制备复合结构。微柱还可用于体外培养研究。在进行高通量采集时,需注意间歇性地用生理盐水冲洗。
尽管该方法是为皮肤伤口修复而设计的,但类似的原理也可应用于其他需要自体组织移植的器官系统,例如肌肉。
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本文介绍了一种使用特殊针头获取全层皮肤组织的方案,该方法可最大限度减少供体部位的瘢痕形成。该技术旨在实现大量组织采集的同时,保持皮肤的完整性。
该方法可实现自体全层皮肤组织的采集,同时最大限度地减少供区并发症,解决了皮肤再生研究中的一个关键瓶颈问题。通过保留表皮、真皮和皮下组织成分,该方法为临床前模型和治疗开发提供了具有生物学相关性的组织。这种可扩展的、吸力辅助的系统支持大动物研究中的高通量采集,从而提高皮肤修复策略在转化应用中的可信度。
该技术通过提供具有生理相关性的皮肤组织,用于靶点验证、检测方法开发以及皮肤再生项目中的机制性风险评估,从而契合从发现到临床前研究的连续过程。