平行板灌注系统的体外模型研究了细菌对移植组织的粘附性

这种方法可以帮助回答感染性心内膜炎的发病机制中的关键问题，以及通过细菌、血细胞和内皮细胞内衬肌肉等领域进行病理图谱。该技术的主要优点是，组织移植物可能直接暴露在与各种靶点（如细菌、血小板和蛋白质）的相互作用中，在标准化的流条件下。这项技术的含意延伸到我们的感染性内膜炎的治疗，因为它可以解开重要的分子相互作用和因素，推动某些组织的高感染性。

该方法提供了植被形成的发病机制的见解。它也可用于研究血管渗透性、细胞流动性和基因细胞表达。为了开始该协议，放置以前准备的组织活检直径10毫米，显微镜幻灯片和8毫米圆形穿孔之间的相同厚度，以及内表面朝上处的橡胶垫片，以接触细菌悬浮液。

在支架中放置组织移植方向时，重点关注。确保组织的内部表面已经暴露在血液表面向上接触您的实验介质。接下来，将带组织的支架插入嵌入在腔室底部金属框架中的垫片中。

将带相应垫片的上部金属框架与先前插入的组织支架一起连接到腔室底部。然后用八个螺钉和螺钉安装整个腔室。使用卡钳或尺子确保腔室高度在嫁接时始终相同。

接下来，用近体泵连接流量室。然后将 400 毫升储液罐与管连接。将100毫升悬浮液（10升）吸向磷酸盐缓冲盐水中的7个荧光标记菌落形成单元的组织，其绝对应力为每平方厘米3餐，使用心肺泵和细菌储液库，每分钟4毫升的相应流量为1小时。

使用同一收集储液罐连续循环 100 毫升细菌悬浮液。灌注后，拆除腔室以释放移植物。使用轨道摇床在12井板中用4毫升PBS清洗组织两次，进行三分钟。

然后使用直径较小的皮肤活检冲孔切割移植物的内部部分。将每个组织活检放入一个单独的14毫升管中，其中含有一毫升无菌0.9%氯化钠。使用声波浴将细菌从组织中分离出来10分钟。

准备一个14毫升管与10毫升无菌0.9%氯化钠，使连续稀释后获得的细菌悬浮液声波。标记管号 2。准备三个14毫升管与10毫升无菌0.9%氯化钠，用于连续稀释的初始细菌悬浮液到灌注实验。

标记管号 3、4 号和 5 号。接下来，固定三个加糖板，一个用于细菌灌注，一个用于控制PBS灌注，第三个用于最初用于灌注的细菌悬浮液。以下列方式标记每个板的三个扇区:10-1、10-3 和 10-4。

要计算细菌中形成菌落的单位数，请将板标为:10-1、10-3、10-5 和 10-7。旋转含有组织活检的管子，每个15秒，使连续稀释。要准备串行稀释，将100微升管1号转移到管号二号，并涡旋管彻底混合溶液。

将100微升的管号和二号管的内容物扩散到相应的扇区，10-1和10-3的加糖板。然后将10号管的10微升在10号四区。重复此步骤四次，从每卷 10 微升中获取四个单独的增长。

为了准备初始培养物的连续稀释，首先涡流稀释15秒，将100微升细菌悬浮液转移到三号管，然后通过涡流进行大力混合。将 100 微升的三号管添加到管四中，然后再次混合。从管号四重复管号 5 的过程。

将三号、四号、五号管和标记的初始培养物的100微升内容分别扩散到血脂板的10-3、10-5、10-7和10-1的部门。将血脂板放在层罩下，以空气干燥细菌扩散，通常持续 10 分钟。之后，将板在37摄氏度下放置，进行过夜孵育。

经过一夜的孵育，计算细菌菌落，以获得CFO的数量。在纯粹的压力条件下，观察到金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌表皮菌感染在各种移植组织之间出现类似的细菌附着。按照程序，与牛的葡萄球菌斑块相比，桑吉诺丝对牛的血管壁的依从性明显减少。

在比较这三种细菌时，桑吉诺氏链球菌与金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌表皮菌相比，与牛皮脉壁的粘附性显著降低。在尝试此程序时，重要的是要记住要准备同一头部的正确组织。它将确保所有实验样本的类似条件，并最大限度地减少不同系列实验之间的数据变异性。

开发后，该技术允许研究人员通过丰富其体外模型方法，以不同的元素建立接近医疗状态的全部复杂性，从而逐步探索复杂的疾病系统。