Name: 多平行板流室对剪切应力暴露的内皮细胞基因表达分析 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: 了解多平行板流室技术用于分析剪切应力下内皮细胞基因表达的方法。该技术可同时研究多种流动条件，为血管生物学和动脉粥样硬化研究提供可靠的实验框架。

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本工作获得了加拿大卫生研究院（CIHR）MOP 142307 项目对 P.A.M. 的资助。H.S.J.M. 获得了加拿大卫生研究院再生医学培训项目博士后奖学金。H.S.J.M.、A.N.S.、K.H.K. 和 M.K.D. 获得了伊丽莎白二世科学技术研究生奖学金。

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作者无任何利益冲突需要披露。

剪切应力是一种生理条件，部分通过影响基因的稳态表达来调节内皮细胞功能2,5。在不同剪切应力条件下研究基因调控的模型将有助于更深入地理解内皮细胞功能。该实用工作流程包含一个使用平行板流动腔的流动回路，该装置改编自 Lane et al.9，可模拟层流、非脉动性流动。整体装置设计旨在支持需要多个流动腔的实验，并在此类实验条件下最大限度地减少实验变异性。
流路组件是该工作流程的主要组成部分，改编自 Lane 等9对这一组装和方案进行了多种调整，以适应不同实验系统之间的差异。其中一种改进是大型加热装置BEACH，该装置可在相同环境下同时运行并监测多个流体回路。该系统已成功用于对内皮细胞施加不同持续时间（从1小时至7天）和多种水平的剪切应力例如，1.0、1.5 和 2.0 Pa）。该系统还用于基因敲低研究，以评估在剪切应力条件下...

血管内皮细胞构成高等物种封闭心血管系统中血管的内层细胞衬里。它们形成血液与组织之间的界面，并具有管腔面和管腔外表面。内皮组织是一个多样化、活跃且具有适应性的系统，可调节血流、营养物质运输、免疫反应以及新生血管的形成1。在体内，内皮细胞通常存在于受到循环摩擦力——即剪切应力——作用的环境中2。剪切应力是调控内皮细胞基因表达的重要因素3，内皮细胞会努力将剪切应力维持在一定范围内2,4。在缺乏剪切应力的情况下，内皮细胞会表现出促血管生成的模式5，从而改善组织灌注。局部区域的紊乱血流和异常剪切应力与炎症相关基因的表达6以及动脉粥样硬化的发生发展密切相关7,8。因此，包含剪切应力的模型对于理解内皮细胞基因调控机制至关重要。
我们描述了一种在剪切应力条件下研究血管内皮细胞基因调控的方法。该系统采用非脉动流动，模拟动脉内皮细胞所处环境中的流体剪切应力水平和氧浓度。本方案包括利用RNA干扰（RNAi）进行基因敲低的方法、使用平行板流动装置施加剪切应力的设置，以及在进行逆转录定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）分析前加入外源性参照RNA的技术。该流程可用于研究层流剪切应力存在或缺失条件下内皮细胞的基因调控，并对Lane et al.9所述的平行板流动装置进行了改进。该特定装置设计用于同时评估多种实验条件，从而实现对不同剪切应力条件的直接比较以及RNA分析的标准化。系统配备一个大型恒温恒湿培养单元，可同时运行多个独立的流动腔室和泵，并实时监测每个流动腔组件的流速。本装置主要用于在层流/剪切应力条件下利用RNAi进行基因敲低研究，但该方案中的部分技术也可适用于任何RNA表达水平的检测。
用于内皮细胞施加剪切应力的常用方法包括微流控系统10、锥板式黏度计11和平行板流动腔12。来自不同制造商的微流控系统已被广泛应用于多种细胞和组织类型以及各种生物物理刺激下的力学生物学和力传导研究。对于内皮细胞，这些系统已被用于研究内皮细胞本身，以及内皮细胞与免疫细胞或肿瘤细胞迁移之间的相互作用10。然而，这些系统在获取大量细胞方面适用性较差9。锥板式黏度计和平行板流动腔均允许从融合的单层细胞中回收大量细胞12。这些系统能够产生多种剪切力和流动模式12。平行板流动腔装置9的优势在于，可通过玻璃窗口进行实时成像，以在任意时间点评估细胞形态。此外，灌注液可在无菌条件下收集。对于本文所介绍的系统，还可实现多腔室设置下的实时流动监测，有助于维持各腔室之间的剪切条件一致性。
在代表性实验中，采用人脐静脉内皮细胞（HUVEC），该细胞代表大血管内皮细胞类型，所使用的剪切应力条件（1 Pa）反映了动脉环境（0.1 - 0.7 Pa）。然而，本方案也可适用于其他类型的内皮细胞，并可根据具体实验需求调整剪切应力条件。例如，在模拟静脉循环条件下研究人内皮细胞时，需使用较低的剪切应力水平（1 - 6 Pa）；而在模拟微血管循环的研究中，通常采用的剪切应力范围为 0.4 - 1.2 Pa13,14。此外，即使在同一血管内的内皮细胞之间，剪切应力也可能存在差异6。在当前的系统设置中，使用一个监测系统可同时监控四个独立的流体回路。对于需要更多流体回路的实验室，专用环境中仍留有空间以增加额外的监测系统。
RT-qPCR 用于在剪切应力条件下对基因表达进行绝对定量。目标基因的相对表达水平常用于比较不同条件下的 RNA 表达。某些 RNA 分子可能以极低的量存在或完全缺失，从而增加相对测量的复杂性。例如，内皮细胞中的长链非编码 RNA 可在每细胞相对较低的拷贝数下发挥显著作用5此外，引物效率的差异可能导致采用delta-delta循环阈值（Ct）法分析数据时产生不准确的解释。为解决这一问题，我们通过使用已知量的质粒DNA生成标准曲线，进行绝对定量。此外，互补DNA（cDNA）合成是一个效率较低的过程，cDNA合成效率的差异可能导致不同实验条件或不同样本间RNA表达水平的差异15剪切应力和/或转染试剂的应用可能影响细胞增殖、凋亡和活力，或引入可能干扰RNA提取和/或cDNA合成的成分。为校正RNA提取和cDNA合成过程中可能产生的偏差，我们使用在实验室中合成的外参RNA对照，在RNA提取时加入，并在每次cDNA合成中进行检测。 通过 RT-qPCR。这不仅可以校正RNA提取和cDNA合成过程中的技术差异，而且在已知细胞数量时，还可用于计算每个细胞中目标分子的绝对数量。
该系统采用额外的步骤来维持不同条件之间的相似性，或弥补技术上的差异。我们特别强调这些步骤，因为这些实验具有复杂的性质，涉及多种物理装置和实验条件，可能导致实验结果的变异性。

<table><tbody><tr><td>0.05% 胰蛋白酶-EDTA</td><td>gibco</td><td>25300-062</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 注射器</td><td>BD</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>10 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; 培养皿</td><td>Sarstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>30 mL 注射器</td><td>BD</td><td>302832</td><td></td></tr><tr><td>四通旋塞阀</td><td>Discofix</td><td>D500</td><td></td></tr><tr><td>铝箔</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>海滩</td><td>达尔文·钱伯斯公司</td><td>MN: HO85，SN: 4947549</td><td></td></tr><tr><td>细胞刮刀</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>一氧化碳&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 流量计</td><td>BioSphenix, Ltd.</td><td>MN: P120, SN: 0342</td><td></td></tr><tr><td>一氧化碳&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 传感器</td><td>BioSphenix, Ltd.</td><td>MN: C700, SN: 52852</td><td></td></tr><tr><td>蒸馏水</td><td>gibco</td><td>15230-170</td><td></td></tr><tr><td>杜尔贝科磷酸盐缓冲液（DPBS）-/-</td><td>gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>内皮细胞生长培养基2</td><td>Promo Cell</td><td>C-22011</td><td></td></tr><tr><td>内皮细胞生长培养基2补充剂混合液</td><td>Promo Cell</td><td>C-39216</td><td></td></tr><tr><td>纤连蛋白（纯品）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11051407001</td><td></td></tr><tr><td>滤器（0.20 μm）</td><td>Sarstedt</td><td>83.1826.001</td><td></td></tr><tr><td>流阻尼器与盖帽</td><td>多伦多大学玻璃吹制车间</td><td></td><td></td></tr><tr><td>流量计：400系列控制台</td><td>Transonic Scisense Inc.</td><td>T402</td><td></td></tr><tr><td>流量计：400系列管路</td><td>Transonic Scisense Inc.</td><td>TS410</td><td></td></tr><tr><td>流体储液罐与盖帽</td><td>多伦多大学玻璃吹制车间</td><td></td><td></td></tr><tr><td>流量传感器</td><td>Transonic Scisense Inc.</td><td>ME4PXL</td><td></td></tr><tr><td>Isotemp 737F 烘箱</td><td>Fisher Scientific</td><td>FI-737F</td><td></td></tr><tr><td>J 布</td><td>J 布</td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微镜载玻片（25 × 75 × 1 mm）</td><td>Fisherfinest</td><td>12-544-4</td><td></td></tr><tr><td>纸制灭菌袋</td><td>Cardinal Health</td><td>92713</td><td></td></tr><tr><td>泵（Masterflex L/S Economy Drive）</td><td>Cole-Parmer</td><td>7554-90</td><td></td></tr><tr><td>泵头（Masterflex L/S Easy Load）</td><td>Cole-Parmer</td><td>7518-00</td><td></td></tr><tr><td>矩形4孔培养皿</td><td>Thermo Scientific</td><td>267061</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;名称&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;目录编号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;评论&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;管路&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masterflex C-Flex L/S 25 软管</td><td>Cole-Parmer</td><td>06424-25</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex C-Flex L/S 14 软管</td><td>Cole-Parmer</td><td>06424-14</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex C-Flex L/S 16 软管</td><td>Cole-Parmer</td><td>06424-16</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex PharMed BPT L/S 13 硬质管</td><td>Cole-Parmer</td><td>06508-13</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex PharMed BPT L/S 14 硬管</td><td>Cole-Parmer</td><td>06508-14</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;名称&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;目录编号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;评论&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;鲁尔 &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3/16&quot; 雄性鲁尔接头</td><td>Cole-Parmer</td><td>45518-08</td><td>对于 #25 规格导管</td></tr><tr><td>1/8&quot; 雄性鲁尔接头</td><td>Cole-Parmer</td><td>30800-24</td><td>对于 #16 管路</td></tr><tr><td>1/8&quot; 女性鲁尔接头</td><td>Cole-Parmer</td><td>30800-08</td><td>对于 #16 管路</td></tr><tr><td>1/16&quot; 雄性鲁尔接头</td><td>Cole-Parmer</td><td>45518-00</td><td>对于 #14 管路</td></tr><tr><td>1/16&quot; 女性鲁尔接头</td><td>Cole-Parmer</td><td>45508-00</td><td>对于 #14 管路</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;名称&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;目录编号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;评论&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;基因敲低试剂&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oligofectamine 试剂</td><td>Invitrogen</td><td>12252-011</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I 低血清培养基</td><td>gibco</td><td>31985-070</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;名称&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;目录编号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;评论&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;&lt;strong&gt; 转录 &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Generuler 1kb+ DNA Ladder</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>SM1331</td><td></td></tr><tr><td>MEGAclear试剂盒</td><td>Ambion</td><td>AM1908</td><td></td></tr><tr><td>mMESSSEGE mMACHINE SP6 转录试剂盒</td><td>Ambion</td><td>AM1340</td><td></td></tr><tr><td>pSP-luc+</td><td>Promega</td><td>E4471</td><td></td></tr><tr><td>超螺旋DNA梯度标记物</td><td>New England BioLabs Inc.</td><td>N0472S</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure 琼脂糖</td><td>Invitrogen</td><td>16500-500</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure 溴化乙锭</td><td>Invitrogen</td><td>15585011</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;XhoI&lt;/em&gt; 限制性内切酶</td><td>New England BioLabs Inc.</td><td>R0146S</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;名称&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;目录编号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;评论&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;RNA提取 &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>β-巯基乙醇</td><td>Sigma</td><td>M3148-100mL</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td></td></tr></tbody></table>

使用多个平行板流动腔对暴露于剪切应力下的内皮细胞进行基因表达分析

Gene Expression Analysis of Endothelial Cells Exposed to Shear Stress Using Multiple Parallel-plate Flow Chambers

我们描述了一种利用多个监测式平行板流动腔分析经稳态层流作用的内皮细胞基因表达的工作流程。内皮细胞构成血管的内层细胞衬里，长期暴露于血液流动所产生的摩擦力，即剪切应力。在生理条件下，内皮细胞在多种剪切应力环境中发挥功能。因此，在体外实验中施加剪切应力条件对于研究内皮细胞的生物学行为至关重要。 体外 模型可更深入地揭示内皮细胞的反应 体内Lane先前发表的平行板流动腔 等9 适用于研究稳态（非脉动）层流存在与缺失条件下内皮细胞基因表达的调控。本文所述层流实验装置的关键改进包括：设有专门的大空间环境以容纳多个并行的流体回路，实时监测流速，以及在定量实时PCR数据分析中引入外源性参照RNA进行归一化处理。为在施加剪切应力的同时评估多种处理/条件，我们在同一温控恒湿培养箱内同步运行多个流体回路和泵。每个流体回路的流速均被连续实时测量，以确保整个实验过程中剪切应力条件的一致性。由于此类实验涉及多个实验条件，我们还使用一种外源性参照RNA，在RNA提取时加入，用于校正RNA提取效率及第一链cDNA合成效率的差异。这些措施可显著降低样本间的变异。该策略已整合至我们基于平行板流动腔开展剪切应力实验的基因表达分析流程中；但其中部分策略（如外源性参照RNA加标）亦可简便、经济地应用于其他研究场景。

通过在琼脂糖凝胶上电泳消化产物，验证了使用限制性内切酶对荧光素酶质粒进行线性化的成功（图1）。通过DNA分子量标记物以及与未切割质粒的比较，确认了线性化产物的大小。
我们改进了Lane et al.9报道的平行板流动腔装置，用于需要多种条件/处理或多种剪切应力条件的实验。我们使用一个专用环境——BEACH，可容纳多个完全组装的流动回路，且每个回路的流速均受到监控（图 2）。流速在平行板组件的上游附近进行监测（图 3）。通过BEACH的玻璃门可直接监控流动回路及流速，而不会引起BEACH内部温度、湿度或气体含量的波动。
制造工艺可能导致通道高度...

本文介绍了一种在流体剪切应力条件下培养内皮细胞并进行基因表达分析的工作流程。该流程包括一种物理装置，可在受控环境中同时容纳和监测多个流动腔室，并采用外源性参照RNA进行定量PCR分析。

我们描述了一种用于分析经受稳定层流的内皮细胞基因表达的工作流程，该流程采用多通道监测平行板...

该方法有助于解答血管内皮生物学领域中的关键问题，例如为何动脉粥样硬化在血管不同区域的发生存在差异？该技术的主要优势在于，可同时在剪切应力条件下研究多种实验条件，或在多种剪切应力条件下进行研究。该技术的应用意义在于有助于深入理解动脉和静脉系统中内皮细胞的基因调控机制，因为可采用不同的流速和流动模式进行实验。在此，我们展示了一种利用稳定层流的系统。该装置可针对其他流动模式（包括扰动流）进行调整。通常，初次使用该方法的研究人员在实验全程中难以维持细胞的连续单层状态，并且难以在不同实验之间获得一致的结果。分析前24小时，计数早期传代的人脐静脉内皮细胞，并将约1×10⁶个细胞接种至4孔细胞培养板的每个孔中，每孔含1毫升培养基，孔内预先放置经纤维连接蛋白包被的玻璃片。将细胞置于37°C条件下孵育15分钟，使其贴附于玻璃片上。随后，向每孔加入3毫升培养基，将培养板置于37°C、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养24小时。实验当天，向一个大型带加热功能的内置环境装置（可调节 CO2 和温度）或具有多层搁板、内部电源接口和玻璃门的沙滩孵化箱的水盘中注水，并确认实验所需的二氧化碳充足，且 CO2 监测仪工作正常。搭建流室时，将一个 1/8 英寸雌性接头插入 16 号软管的一端，并将一个四通旋塞阀连接到该接头上。将软管的自由端连接至顶板的进液侧，并将一个 1/8 英寸雄性接头插入另一根 16 号软管的一端。将一个四通旋塞阀连接到公接头引流端，将管子的游离端连接到顶板的流出侧。将1/8英寸公接头和1/8英寸母接头分别插入第三根16号软管的两端，并通过1/8英寸公接头将该管路连接至气泡捕集器。然后通过母接头将另一个四通旋塞阀连接至该管路的另一端。使用无菌镊子将一张接种有细胞的玻片转移至底板的凹槽内，细胞接种面朝上。用10毫升注射器向底板内红色垫圈线周围的区域加入10毫升预热的培养基，使培养基流过玻片并覆盖细胞。轻轻将上层板放置在下层板上，注意对齐两侧，并将两板紧密拧紧。为去除气泡捕集器中的气泡，首先打开进液口和气泡捕集器的旋塞，关闭出液口旋塞。然后使用30毫升注射器，缓慢注入20毫升温热培养基，冲洗流路板。为去除腔室中的气泡，关闭气泡捕集器的旋塞并打开流出端旋塞。将腔室的流出侧抬升至45度角，使用30毫升注射器从腔室的流入端缓慢冲洗20毫升温热的培养基。冲洗时必须以适当的速度沿流动方向进行，并使用显微镜确认细胞仍保持融合的单层状态，然后才能使细胞暴露于层流条件下。然后关闭腔室两侧的旋塞阀，盖上盖子，并在光学显微镜下确认细胞仍附着在载玻片上。将流动腔室和先前组装好的流动回路系统放入浴槽中，缓慢降低流动回路装置的泵速，随后完全暂停泵的运行。关闭流动回路系统上的旋塞阀以防止泄漏，并通过旋塞阀将腔室与回路系统连接在一起。当所有管路连接完毕后，重新打开所有旋塞阀，同时缓慢提高泵速，并监测系统是否存在泄漏或堵塞。将流量传感器置于灌流 chamber 进液侧的桥管上，传感器方向与液体流向一致，调节泵速以达到目标剪切应力对应的流速。随后打开 CO2 气瓶，使 CO2 浓度达到 5%。实验流动阶段结束后，缓慢将蠕动泵的转速降至零，然后关闭电源。迅速关闭所有打开的旋塞，将腔室及两侧带旋塞的连接管路转移至洁净的实验台面。小心拧下所有螺丝，取下上层板片，并使用尖头镊子将底部板片上的玻片转移至直径为100毫米的培养皿中。用10毫升冷的PBS洗涤载玻片，并在显微镜下检查细胞，以确认细胞已贴壁并沿流动方向排列整齐。吸除PBS后，将载玻片转移至一个洁净的直径100毫米的培养皿中，加入350微升裂解缓冲液（添加RNA提取试剂盒中β-巯基乙醇的1/100），滴加到载玻片上。使用聚乙烯刮刀细胞刮棒将细胞从载玻片上刮下，并倾斜组织培养皿使缓冲液汇集于底部。用镊子取出载玻片，并用移液器将细胞裂解液转移至冰上的 1.5 毫升离心管中。然后向细胞裂解液中加入 10 微升稀释的荧光素酶 RNA，用于后续的 RNA 提取与分析，具体操作按照标准方案进行。通过限制性内切酶对荧光素酶质粒进行线性化后，可将酶切产物在琼脂糖凝胶上电泳，以确认线性化是否成功；线性化产物的大小可通过 DNA Marker 以及与未切割质粒的比较来验证。制造工艺可能导致腔室高度存在微小差异，因此必须针对每个腔室计算流速，以实现相同的剪切应力。在涉及哺乳动物内皮细胞层流剪切应力的实验中，可使用萤火虫荧光素酶RNA作为外源性RNA spike-in。对内源性参考基因、外源性参考基因以及将内源性和外源性参考基因联合进行标准化，所得结果相似。值得注意的是，在这些使用两个同时运行的流室进行的代表性实验中，每个实验的剪切应力均为一帕斯卡（1 Pa），通过小干扰RNA（siRNA）敲低Kruppel样因子2（KLF2）在所测试的生物学样本间表现出相似的敲低效率。在进行该操作时，需注意在载玻片上形成均匀的单层细胞，并在连接流室前对流回路系统进行充分灌注。完成此步骤后，可采用其他方法（如RNA测序）评估全基因组范围的RNA表达水平，也可利用DNA和蛋白质等其他分子读出指标进行进一步的分子分析。该技术问世后，为内皮生物学领域的研究人员探索剪切应力与人内皮细胞血管生成潜能之间关系奠定了基础。

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Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

多平行板流室对剪切应力暴露的内皮细胞基因表达分析

本报告以可视化方式展示了在生理剪切应力条件下研究白细胞与内皮细胞相互作用的平行板流动腔分析方法。该方法特别适用于研究内皮细胞选择素（E-选择素）及其白细胞配体在介导白细胞沿内皮细胞表面滚动过程中的作用。...

E-选择素介导白细胞在微血管内皮上生理滚动的分析

我们正在描述一种在无菌连续流动回路中对贴壁细胞施加层流剪切应力的方法。通过透明的腔室可观察细胞的黏附和形态，从回路中获取样品用于代谢物分析，并在剪切作用后收集细胞以用于后续实验或培养。...

平行板流动腔室与连续流动回路用于评估内皮祖细胞在层流剪切应力下的反应

采用光刻技术蚀刻并由PDMS制成的微流控流动室，用于研究与内皮细胞功能障碍和炎症相关的功能结果。在一个代表性实验中，展示了不同剪切应力对单核细胞黏附于细胞因子激活的内皮细胞单层能力的调节作用。...

芯片上内皮炎症表型分析

本研究采用多孔板微流控系统，显著提高了在生理相关剪切流条件下细胞滚动研究的通量。鉴于细胞滚动在多步细胞归巢级联反应中的重要性，以及在外源性细胞群体经系统性递送至患者后细胞归巢的关键作用，该系统有望作为筛选平台，用于优化细胞治疗策略。...

系统分析 体外 使用多孔板微流控系统进行细胞滚动实验

已知不同水平和模式的流体剪切力可调节内皮细胞的基因表达、表型及其对疾病易感性。本文讨论“剪切环”模型的组装与使用：该模型可产生单向、周期性的剪切应力模式。剪切环结构简单、成本低廉，且可获得较高的细胞产量。...

“剪切环”的组装与应用：一种用于轨道式、单向周期性流体流动和剪切应力研究的新型内皮细胞模型

本实验方案的目的是描述一种改良的平行板流动室，用于研究剪切应力对机械敏感性离子通道的实时激活作用。...

在明确定义的剪切应力下进行单细胞离子电流的电生理记录

本方案描述了一种包被方法，用于在6孔板的特定区域限制内皮细胞生长，以便利用轨道摇床模型施加剪切应力。...

在轨道摇床中于6孔板内分割培养内皮细胞以用于力学生物学研究

本文建立了一种实验方案，用于在暴露于病理性和生理性流体剪切应力条件下的内皮细胞中，通过邻位连接实验（proximity ligation assay,...

利用邻近连接技术在不同流体剪切应力条件下可视化与定量TGFβ/BMP/SMAD信号通路

我们描述了一种分离和培养人隐静脉内皮细胞（hSVECs）的方案。同时提供了详细的方法，用于施加剪切应力和拉伸力，以研究hSVECs中的机械应力。...

人隐静脉内皮细胞的分离及其在可控剪切应力与拉伸条件下的暴露

在此，我们介绍一种用于构建和运行微流控系统的方案，该系统可使内皮细胞同时暴露于振荡性高血糖和脉动性剪切应力。该方法具有生理相关性...

一种用于模拟生理脉动剪切应力与振荡性高血糖共同作用下内皮功能障碍的微流控系统

了解多平行板流室技术用于分析剪切应力下内皮细胞基因表达的方法。该技术可同时研究多种流动条件，为血管生物学和动脉粥样硬化研究提供可靠的实验框架。

使用多个平行板流动腔对暴露于剪切应力下的内皮细胞进行基因表达分析

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