循环介导等温扩增 (灯管) 法快速识别烟粉虱
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October 29, 2018
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这种方法为鉴定贝米西亚塔巴奇提供了一个快速可靠的诊断工具，贝米西亚塔巴奇是一种侵虫害，影响到世界许多国家的蔬菜和观赏作物的生产。由于其易用性，该方法可以直接在工厂进口产品的入境点（如港口和机场）现场执行，从而有可能减少贝米西亚塔巴奇在贸易网络上的分散。首先，用剪刀将八管灯条切成两根四管灯条。
然后，根据文本协议之一中概述的方案标记管。在此之后，准备足够的B.tabaci LAMP反应主混合80反应。然后，将主混合的 22.5 微升分配到四管 LAMP 条的每个管中。
脉冲离心机，并把它们放在冰上。快速涡流和脉冲离心机 B.tabaci LAMP PAC。然后，将 2.5 微升添加到每个四管 LAMP 条中标有 PAC 的管中。
接下来，关闭盖子，将即用型 B.tabaci LAMP 套件单元存放在零下 20 摄氏度。要开始DNA提取，使用无菌牙签将昆虫标本转移到0.5毫升微离心管中，并采用30微升DNA提取溶液。然后，在将热混合器设置为 300 rpm 的 95 摄氏度下孵育样品 5 分钟。
短暂地涡流和脉冲离心样品。解冻一个即用型 B.tabaci LAMP 套件。然后，快速旋转套件，并脉冲离心。
将2.5微升的样本DNA提取物加入S-1和S-2管中。然后，在NAC管中加入2.5微升的纯碱性DNA提取溶液。在涡旋和脉冲离心套件后，将试剂盒插入 LAMP 分析设备，并在 65 摄氏度下执行等温 DNA 扩增分析 60 分钟。
在同一运行中，首先将试剂盒加热至 98 摄氏度，冷却至 75 摄氏度，对 DNA 扩增产品进行熔化温度分析。使用自动 LAMP 验证应用程序验证 LAMP 读出。首先，在单击”生成报告”按钮之前，定义目标物种和测试样本的数量。
最后，将读出转移到验证应用程序的适当输入字段。输入数据后，将立即显示验证结果。在该协议中，通过LAMB测定，对在瑞士常规进口控制过程中截获的B.tabaci昆虫标本进行了分析。
在分析的总共80个样本中，75个样本被正确识别为真阳性，2个样本被正确识别为真阴性。然而，三个标本是假阴性，被错误地识别为不是B.tabaci。苏黎世机场的植物卫生检查员在现场进行了一次检测。
在代表性的结果中，样本一和二在预期退火温度约82摄氏度后，通过DNA扩增正确鉴定为B.tabaci。开发后，该方法为快速、易于进行现场识别 Bemisia tabaci 铺平了道路。该协议的设计方式是，工厂卫生检查员在实验室培训有限的情况下可以执行该协议。
在瑞士工厂进口产品入境点成功现场验证该方法后，该方法可适用于其他植物病原体，但如果需要，也可以适应其他人类或兽医病原体。
Summary
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本文报道了一种基于环路介导等温扩增 (灯管) 技术的烟粉虱快速鉴定方法。该议定书要求进行最少的实验室培训, 因此可以在港口和机场等植物进口点现场实施。
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Blaser, S., Diem, H., von Felten, A., Gueuning, M., Andreou, M., Boonham, N., Tomlinson, J., Müller, P., Utzinger, J., Frey, B., Frey, J. E., Bühlmann, A. A Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay for Rapid Identification of Bemisia tabaci. J. Vis. Exp. (140), e58502, doi:10.3791/58502 (2018).
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