一种用于快速鉴定烟粉虱（Bemisia tabaci）的环介导等温扩增（LAMP）检测方法

该方法为识别烟粉虱（Bemisia tabaci）提供了一种快速且可靠的诊断工具。烟粉虱是一种入侵性害虫，影响全球多个国家蔬菜和观赏作物的生产。由于该方法操作简便，可在植物进口产品的入境点（如港口和机场）现场实施，因此有望减少烟粉虱在贸易网络中的扩散。首先，使用剪刀将八孔LAMP条带剪成两条四孔LAMP条带。

然后，根据文字方案中图一的说明对试管进行标记。接着，配制足够进行80个反应的烟粉虱LAMP反应预混液。随后，将22.5 µL预混液分别加入四联管LAMP条带的每支试管中。

脉冲离心后，置于冰上。迅速涡旋并脉冲离心B.tabaci LAMP PAC。然后，取2.5 µL加入四管LAMP条带中每个标有PAC的试管中。

接下来，盖上管盖，将即用型烟粉虱 LAMP 试剂盒单元于 -20 摄氏度保存。开始 DNA 提取时，使用无菌牙签将昆虫样本转移至含有 30 µL DNA 提取液的 0.5 mL 微离心管中。然后，将样本置于设定为 300 rpm 的 ThermoMixer 中，在 95 摄氏度下孵育 5 分钟。

短暂涡旋并瞬时离心样品。解冻一个即用型烟粉虱LAMP试剂盒，然后快速涡旋试剂盒，并进行瞬时离心。

向 S-one 和 S-two 管中各加入 2.5 µL 样品 DNA 提取物。然后，向 NAC 管中加入 2.5 µL 纯碱性 DNA 提取液。涡旋振荡并短暂离心试剂盒后，将试剂盒放入 LAMP 分析仪中，在 65 °C 下进行 60 分钟的等温 DNA 扩增分析。

在同一次运行中，通过先将试剂盒加热至98摄氏度，再冷却至75摄氏度，对DNA扩增产物进行熔解温度分析。使用自动化的LAMP验证应用程序验证LAMP结果。首先，在点击“生成报告”按钮之前，定义目标物种和检测样本的数量。

最后，将读数结果输入至验证应用程序的相应输入字段中。数据输入后，将立即显示验证结果。在本方案中，通过LAMP检测方法分析了在瑞士常规进口检疫过程中截获的烟粉虱（B.tabaci）昆虫样本。

在分析的80个样本中，75个样本被正确鉴定为真阳性，2个样本被正确鉴定为真阴性。然而，有3个样本为假阴性，被错误地鉴定为非烟粉虱（B. tabaci）。部分检测在苏黎世机场由植物健康检查员现场完成。

在代表性结果中，样本一和样本二在约 82 摄氏度的预期退火温度下，经过约 30 分钟的 DNA 扩增后，被正确鉴定为 B.tabaci。该方法建立后，为烟粉虱（Bemisia tabaci）的快速、简便的现场鉴定提供了可行途径。本实验方案的设计使得仅接受过有限实验室培训的植物健康检疫人员也能完成操作。

在瑞士植物进口产品的入境点成功完成该方法的现场验证后，该方法可被推广应用于其他植物病原体，如有需要，也可适用于其他人或兽医病原体。