利用蚂蚁Vollenhovia Emeryi对近亲繁殖杂交的诱导和评价

这种方法可以帮助回答分子生物学和海月经的遗传领域，如性测定系统的关键问题。这项技术的主要优点是，我们可以轻松地诱导近亲繁殖线对蚂蚁Vollenhovia Emery，这是必要的基因映射和分子状态。因此，这个任务可以提供特定蚂蚁的性别确定系统的见解，它也可以适用于其他蚂蚁和其他海月视物种，如黄蜂。

要开始该协议，收集V.Emeryi殖民地在初夏。使用吸气器将蚂蚁标本从采集的树枝转移到带玻璃盖的人工石膏巢中。在16至8小时的光暗周期内，将人工巢中的菌落保持在25摄氏度。

提供自来水与洗涤瓶，以保持石膏湿润每隔一天在同一时间。接下来，添加约100微克用铝箔包裹的干板球粉和红糖水充满尖端到殖民地，每隔一天使用20微升尖，直到新的生殖蚂蚁出现。重要的是要收集微殖民地从田野和为他们提供足够的食物，以获得新的女王和男性。

首先，通过将殖民地放置在控制环境设定在摄氏4度的房间里15分钟，阻止个人移动。在立体镜下用钳子去除 30 只工人蚂蚁的中腿，以区分 F-Zero 代代和后续近亲繁殖十字架中产生的工人。然后将蚂蚁转移到一个新的较小的石膏巢近亲繁殖十字架。

接下来，在含有工人的石膏巢中加入三到四个幼虫或阴性。将一个长翼女王和一只雄性转移到先前准备的石膏巢中， 用于近亲繁殖的十字架。对于这一步骤，重要的是保持实验交叉殖民地在同一状态，作为一个正常的殖民地。

仅仅通过将男性和女性放在一起来繁殖是很难诱导的。在16到8小时的光光下，将殖民地保持25摄氏度，黑暗循环，食物和水供应，直到女王失去翅膀产卵。每天在立体显微镜下检查实验殖民地。

在F-One后代之间设置近亲繁殖十字架后，可以在立体镜下观察卵子。在F-One女王开始产卵后，从巢中去除F-one雄性和幼虫或阴性，以防止F-一代和F-2一代混合。保持殖民地在相同的条件下，直到F-2后代出现。

用钳子拆下 F-零女王的一条腿。将腿部转移到含有100微升冷却剂的1.5毫升微管中。在立体镜下，用钳子解剖一个装满300微升超纯水的玻璃盘中的女性腹部。

与含有雌性男性精子的精子不同。剥去精子的组织，用昆虫针将精子从女性组织中分离。使用微饼垫，将精子转移到含有100微升的冷却剂的1.5毫升微管中。

在95摄氏度下孵育F-Zero女王和精子的样本20分钟。闪存中点熔断微管，将样品储存在四摄氏度。在确认卵子生产后，由siv-matef-One女王，提取女王的DNA使用棚翅膀或一个中腿和基因型。

接下来，通过一条腿的基因分型提取F-1男性的DNA。为了评估近亲繁殖十字架中雄性蚂蚁的生育能力，用钳子用400微升PBS溶液在玻璃盘中解剖内部生殖器官。然后取出 PBS，并使用微饼垫将其替换为 4% 的甲醛。

通过将样品在PFA中孵育40分钟，在室温下固定组织。固定后，使用微饼垫用400微升PBS洗涤组织五次。将 DAPI 溶液稀释至 PBS 中每毫升 1 毫克。

去除 PBS，向组织添加约 300 微升稀释的 DAPI 染色溶液。在室温的黑暗条件下孵育组织15分钟。孵育后，用400微升PBS洗涤组织五次，用钳子将组织转移到玻璃滑梯的中心。

然后将组织安装在含有 TRITC 四甲苯胺的安装介质上。最后使用20或60 3倍物镜用共声激光扫描显微镜观察样品。Haploid 雄性 v Emeryi 睾丸的微观图像显示健康的纤维组织或精子，在双倍男性 v Emeryi 中不存在，没有显示健康的纤维组织。

双倍体雄性v Emeryi的男性生殖器官没有产生精子，他们的睾丸也没有发育，这表明在近亲繁殖十字架中产生的雄性生殖器官是无菌的。在它的发展，这项技术铺平了道路，我们探索性米阿托尼在Vollenhovia埃默里伊的快速定时蚂蚁物种的恒定。