用于靶向质粒DNA输送的美聚氨酸功能化生物相容性块共聚物

Cationic聚合物药物载体具有稳定性好、免疫原性低、制备和改性简单等优点。在这里，我们提供了一个快速和简单的方法，其合成。可逆添加-碎片链转移聚合法是一种适用于具有受控分子量和结构及携带功能群的组块聚合物的方法。

这些药物携带者可以同时携带不同的药物，以实现癌症、炎症和其他疾病的协作治疗。IFT聚合是一种经典方法，该协议给出了它在基因治疗中应用的例子。这种聚合物合成成功的关键是精确控制反应温度。

使用油浴比水浴更可取。要开始此过程，请获得带橡胶塞和磁力搅拌器的圆底烧瓶作为聚合瓶。将1.87克双羟基 HEMA 溶解在聚合瓶中一毫升蒸馏水中。

在五毫升烧杯中，将 0.03 克 CTP 和 0.02 克 ACVA 溶解在 0.5 毫升 1、4-二氧烷中。将此混合物加入聚合瓶。然后，使用冷凝水疏水阀将溶液冻结在聚合瓶中。

将瓶子固定到铁支撑上，并使用用针头跳闸的导管吸尘并注入反应混合物中的氮气。然后，密封聚合瓶，并在室温下解冻溶液30分钟。重复此冻结泵解冻循环三次。

在此之后，将瓶子放入70摄氏度的油浴中，让溶液在氮气下24小时反应。第二天，在零摄氏度下冷却聚合瓶，打开橡胶塞，以终止聚合反应。接下来，在负20摄氏度的冰箱中预冷丙酮两小时，以50比1的比例与聚合瓶中的反应溶液混合。

将混合物在8，200倍g下离心10分钟，以去除丙酮并收集沉淀物。为了净化合成的多双羟基 HEMA，将收集的沉淀物溶解在两毫升的纯水中。然后，以 1 比 50 的比例与 100 毫升预冷丙酮混合。

将溶液在8，200倍g下离心10分钟，收集沉淀物。重复溶解、混合和离心沉淀物的净化过程三次。首先，在5毫升蒸馏水中溶解0.96克APMA和0.93克纯化聚双羟基水马。

将 0.01 克 ACVA 溶解在 0.5 毫升 1，4 二恶烷中，并将其添加到 APMA 和聚双羟基 HEMA 溶液中。将混合物转移到聚合瓶中，用干氮气通风一小时。然后，将聚合瓶放入70摄氏度的油浴中，让它在氮气下24小时反应。

第二天，在零摄氏度下冷却聚合瓶，打开橡胶塞，终止聚合工艺溶液。首先，将MCF-7细胞以每井2万个细胞的密度将MCF-7细胞播种到六井板的井中。在37摄氏度的加湿培养箱中培养细胞，用5%的二氧化碳培养细胞12小时。

在此之后，用含有阳离子聚合物和pDNA多丛的新鲜培养基代替不同氮磷比的培养基。培养细胞6小时，然后用两毫升新鲜RPMI 1640培养基取代培养基。继续培养48小时。

然后，收集细胞，并使用流动细胞计检测绿色荧光。本研究通过可逆添加-碎片链转移法，对获得mBG的质粒DNA复合能力及其转染效率进行了调查，mBG/pDNA聚丙烯的平均粒径和泽塔电位分别是124纳米和15.7毫伏，N-P比为16。

电泳迟钝显示，N-P比为零的pDNA可以在加糖凝胶中不受约束地移动，并观察为凝胶成像器中的条纹。当pDNA与mBG复合时，pDNA的运动会迟钝，随后，频带的亮度会降低。这表明当N到P高于4时，mBG可以完全使pDNA变得复杂。

然后使用标准 MTT 测定测量 mBG/pDNA 聚丛的细胞毒性。这些结果表明，mBG/pDNA 聚丛的细胞毒性比 PEI/pDNA 多面体具有 4、8、16 和 32 的 N-P- P- P 比。同样可以看到，mBG/pDNA聚丙烯的细胞毒性随着N-P比的增加而增加。这种增加的细胞毒性是带正充电的GPMA成分的结果。

根据细胞毒性结果选择pDNA转染实验中使用的N-P比。通过测量GB荧光强度，比较了mBG1、mBG2和mBG3的转染能力，结果表明mBG3是最佳基因载体。重要的是要排出从淤泥圆底烧瓶中排出的空气，并保持反应温度。

获得的聚合物药物载体可应用于化疗药物和基因药物的联运，以协同治疗耐药癌症。进一步探讨基因药物与化疗药物结合的分子机制，治疗耐药肿瘤。丙酮的急性毒性低毒性。

应避免使用钥匙、吸入或接触眼睛或皮肤。避免在加热过程中出现烫伤的风险。