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DOI: 10.3791/58544-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
利用花浸法进行农杆菌介导的转化, 可以成功地利用这种方法, 创造出稳定的极端植物模型schrenkiella parvula的转基因线。考虑到不同的生长习性和四肢的生理特性, 我们提出了一种从这种方法中修改的方案。
这种方法是Schrenkiella parvula的可重复转化方案,可以帮助回答植物比较和功能基因领域的问题,特别是研究植物适应恶劣环境的研究。该技术能够研究施伦基拉帕武拉的常规功能,对适应多离子盐应力的极生植物进行检测。它还支持比较研究,也看其近亲,母亲父母阿里比多普西斯·塔利亚娜。
将施伦基拉·帕尔武拉与阿里比多普西斯·塔利亚纳进行比较,可以深入了解基因调控和功能的差异,使施伦基埃拉帕武拉具有独特的适应能力。阿拉伯塔利亚纳的转型议定书已经确立。这种方法现在能够使用转基因施伦基拉帕武拉植物进行比较研究。
一般来说,由于施伦基拉帕尔武拉植物的开花习惯和叶形态,利用植物浸渍进行有效转化以及选择真正的转化剂困难,因此对这种方法的新研究人员将难以进行学习。首先,使用湿牙签将大约 20 到 25 S.Parvula 种子转移到湿土上。然后在四摄氏度下分层,为期五至七天。
分层后,将种子返回生长室7至10天。一旦所有的幼苗都发芽了,在四个角落和盆的中心只留下一个幼苗。在生长室中种植植物8至10周,直到它们开花。
在转换当天,根据文本协议选择 S.Parvula 植物。使用钳子和小剪刀去除已经发展成硅的授粉花序。植物准备好后,准备一个农业细菌渗透溶液。
在此之后,在农业细菌渗透溶液中浸入S.Parvula花样20秒。这里展示的是可用于转化的植物的最早阶段,只要在转化前去除已经发育的硅酸盐,可以使用花朵更多的较老植物。改造后,将花浸植物水平放在干净的托盘与圆顶覆盖植物。
然后将植物放在黑暗的生长室一到两天。将植物返回直立位置,并转移到生长室。在下面的一周,监测浸花序。
第一次花浸后十天,S.Parvula植物将继续生产新的花序和花香。第二轮花卉浸渍可以进行,以进一步改变新兴的花序。种植植物,直到种子成熟,收获种子约21周。
在室温下,在装满干燥剂的密封容器中干燥种子两到三周。根据文本协议种植 T 一种子。种植植物,直到前两到三个真正的叶子发展。
要进行抗除草剂的第一选择,稀释葡萄糖酸铵除草剂并喷洒在幼苗上。用圆顶盖住幼苗过夜。将托盘放回生长室,然后取下圆顶。
等到除草剂选出大部分幼苗。要开始第二个选择,请确定使用 BASTA 溶液喷洒三到四次后存活下来的植物。在种植植物两到三周后,选择每个植物上最大的成熟叶。
接下来用手指轻轻擦擦叶子的表面,去除蜡层。然后将稀释的BASA溶液滴在叶子上。使用 BASTA 溶液监测处理的叶子是否有枯萎迹象长达一周。
最后选择叶子不受BASA滴影响的植物作进一步分析。在该协议中,S.Parvula使用花浸法对农业细菌进行转化。农业细菌的感染导致一些花流产。
然而,S.Parvula植物在第一次花浸后继续生产新花,并可以再次转化。使用 BASTA 喷雾和跌落测试,可以准确识别真正的正转化剂。可减少使用 PCR 确认测试的样品数量。
虽然这种方法类似于阿拉伯塔利亚纳的转化,但重要的是要记住施伦基拉·帕尔武拉的生长和形态差异。修改协议以反映这些差异对于成功转换至关重要。这项技术可以帮助研究人员探索基因组变异的进化,导致多种盐应力适应在极性植物模型,施伦基拉帕尔武拉。
将这项技术与阿拉多皮斯·塔利亚纳(Aradopsis Thaliana)的功能信息相结合,该植物与施伦基埃拉·帕尔武拉密切相关。研究人员可以研究这两个物种之间的两种不同结构,在调控和功能上的变化。在转化过程中,在可 <3>性容器中包含所有农业细菌渗透溶液非常重要。
消毒并安全地丢弃与农业细菌接触的所有材料,包括手套、宏移液器提示和纸巾。
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