一种基于微 ct 的小动物脑损伤和定位电极表征方法

这种方法通过提供一种更简单、更不容易出错的方法和更多的定量方法来验证病变和定位电极位置，从而有助于回答神经科学领域的关键问题。这种技术的主要优点是，它允许验证整个大脑的病变和电极位点，而无需分段。最终产品是大脑的数字3D体积，多个大脑可以并行处理。

虽然这种方法将在大鼠身上得到证明，但它也可以应用于其他生物体，如老鼠和斑马雀。一般来说，对这种方法的新鲜人将很难，因为有些步骤需要特别小心，以确保最佳结果。首先，将提取的大脑放在50毫升锥形管中。

将样品储存两到三天，在摄氏四度下轻轻摇晃。确保在水中稀释，而不是缓冲液。这是因为水会起到温和的洗涤剂，使奥斯米深入组织。

在双蒸馏水中准备 50 毫升 2%的三氧化钛。然后将大脑放在一个新的50毫升圆锥管中，并加入三氧化硅溶液。关闭管子，用石蜡膜密封，防止泄漏。

将密封的管子存放在四摄氏度下，轻轻摇晃两周。确保管子水平放置。大脑非常厚，通过扩散旅行的方式很长。

水平放置管将允许奥斯米深入组织。样品孵育两周后，用双蒸馏水洗五次，从样品中去除所有未绑定的三氧化硅。接下来，用双蒸馏水在4摄氏度下清洗样品30分钟。

用四种乙醇稀释代替双蒸馏水，使样品脱水。要开始树脂渗透过程，请将样品通过三个丙酮和三个丙酮树脂稀释，然后在室温下将样品浸入 100% 树脂中，继续渗透过程。在此之后，将样品转移到一次性模具中。

在室温下，用新鲜 100% 树脂注入样品四个小时。在45摄氏度下在真空烤箱中解气15分钟。然后在烤箱中固化样品48小时，温度为60摄氏度。

最后，当样品固化完成后，剥离一次性模具，然后用 Micro-CT 机器扫描。在传统的分段中，大脑的方向必须预先确定。使用这种 Micro-CT 方法，样本大脑的数字体积可以三维操作，并且几乎在任何方向进行切片。

扫描准备好的大鼠大脑的电子显微镜，确认在微CT成像方面，组织没有明显受损。根据该协议，还准备和扫描斑马雀脑，以测试这种方法在其他小动物大脑中的效用。这种技术可以用来发现大脑的表面病变，以及大脑深处的病变。

该技术还可用于原位单四分体、电解病变、电极轨道、原位四分位阵列和原位硅探针的位置。在尝试这个程序时，重要的是要记住让大脑孵育足够长的时间，有足够的激动。按照这个程序，可以执行其他方法，如光遗传学和双光子成像，以回答有关不同大脑区域在不同行为中的作用的其他问题。

这项技术可以让神经科学领域的研究人员更好地探索大脑与大鼠、老鼠、鸣鸟和其他小动物行为之间的结构-功能关系。不要忘记，在执行此过程时，应始终使用 osmium 非常危险，并应采取预防措施，例如戴上手套和在真空罩中工作。