酸化浸渍法评价全肾肾素数

酸化方法可以帮助回答有关肾脏的关键问题，特定基因如何促进或影响肾隆的发展，以及特定条件，如糖尿病或高血压，如何影响肾隆数。这一点很重要，因为出生者在胎儿发育期间确定肾上腺的总数，肾隆的丧失与肾脏病理学有关。酸洗法的主要优点是，它比磁共振成像等其它肾素计数方法更快、更可重复、更廉价、更耗时。

该技术有助于肾上号对肾功能的影响相关性，这对于进一步理解特定基因如何影响肾隆功能和发育非常重要。研究影响整体肾毒药物数量的基因或因素将有助于开发旨在限制疾病相关肾毒损失的药理学或遗传方法。有了良好的实验技术和实践，新进入这种方法的个体应很容易掌握酸性 maceration 方法，从而能够可靠且可重复地估计整个肾肾素数。

首先使用精细的手术剪刀沿中线打开小鼠腹腔。小心地将肠道和生殖脂肪转移到动物的右侧。使用粗解剖，分离左肾，切断左肾动脉和静脉，小心地取出肾脏，将器官放入贴有适当标签的PBS称重船中。

以相同的方式收集右肾脏，将两个肾脏放在与 PBS 预湿润的手术纱布上。快速去除任何粘附的非肾脏组织和肾胶囊。然后分别对每个肾脏进行重量调整，分别记录左右器官的重量。

称重后，将每个肾脏放回一个没有PBS的适当标记称重的船上，并使用干净的剃刀刀片将每个器官切成两半。将每个肾脏半切侧向下，将每半切成两毫米或更小的碎片。使用相同的剃须刀刀片，小心地将切碎的肾片转移到适当标记的 15 毫升锥形管中。

在通风良好的烟气罩中，在每个管中加入五毫升六摩尔盐酸。接下来，轻轻搅拌肾酸混合物，然后将管子放入37摄氏度的水浴90分钟。在酸洗结束时，将一根 18 量针连接到每个肾脏一个五毫升注射器上，并小心地取出注射器柱塞。

将注射器放入单独的 50 毫升锥形管中，放入烟罩中，将肾脏溶液倒入每个注射器的开端，将空管放在试管架上。然后小心地更换柱塞，使每个溶液通过针头缓慢挤出到 50 毫升管中。用每管5毫升PBS溶液清洗15毫升锥形管，使任何剩余的肾脏组织溶解。

如刚刚演示的，将洗涤内容物挤出到适当的 50 毫升管中。挤出第三次洗涤后，为每个注射器配备 21 量针。通过较小的孔针洗将 50 毫升管的内容物挤出到第二组 50 毫升管中，然后用新鲜 PBS 将前 50 毫升管内装物挤出三次。

第三次洗涤和挤出后，将每个管的总体积与额外的 PBS 一起带到 50 毫升，并在四摄氏度的摇板上放置管架，在四摄氏度下过夜。在加工的五天内，将包含 16 个独立部分的网格放在 12 孔板的 6 口井底部。轻轻反转肾脏溶液的管几次，以重新暂停颗粒组织。

小心地将每个肾脏的三个 500 微升等同液添加到 12 孔板的三口井中。用等量的PBS稀释每一个井的含量。将板放在倒置显微镜的舞台上。

通过球形结构、红色色调以及附着在个体球状体上前或后动脉来识别球状。计算每个网格部分的 glomeruli 数，以求和每个网格的计数，以计算每个井的 glomeruli 总数。然后乘以每个井的球状数乘以 100，以获得每个肾脏的球状菌数。

在这个具有代表性的实验中，在注入车辆14天的小鼠中，肾上每只肾的肾上总数量约为12，500个肾。然而，血管紧张素两次输液，使心房压力增加了约40毫米汞，并显著减少了近26%的肾素总数。在这个大鼠肾发生基因模型中，与两个肾脏出生的动物被计算为在酸洗后每个肾脏含有大约27，500个肾，而出生时有单独肾脏的老鼠的肾总数量明显减少。

这两项实验的估计值与以前在大鼠身上报告的范围一致。酸洗法是估计整个肾脏中肾精的的理想之选，特别是在没有配备更多劳动密集型和成本高的技术来计算肾精的实验室中，例如分离分馏器方法或磁共振成像。此方法允许对整个肾肾素数进行高吞吐量、高效且可重复的估计，该估计值在磁共振成像确定的数数的 5% 以内。

对肾上科数的评估具有临床意义，因为肾隆数的减少与心血管疾病（如慢性肾脏疾病）的风险增加有关。不要忘记，使用盐酸可能非常危险，应采取预防措施，例如戴上手套、防护眼镜和实验室外套。