吸收性微活检取样与RNA提取用于微创同步血液和皮肤分析

该方法可促进皮肤疾病生物标志物的建立，同时降低临床研究参与者的风险。该技术的主要优点在于无需 intensive 培训，且不会留下任何疤痕。在进行微活检前五分钟，将一个空的 2 毫升离心管置于干冰上预冷五分钟。

佩戴一次性手套，在使用酒精棉片对受试者采样部位进行消毒前，先用70%乙醇喷洒双手和工具。从经辐照灭菌的包装中取出微活检装置时，避免触碰微针，并拉动活塞直至听到“咔”声且活塞锁定到位。将装好样本的装置对准待采样皮肤，保持大约垂直的角度，注意确保采样区域位置固定，并以至少1千克的力度将装置按压在皮肤上。

然后按下触发器，并将装置保持原位至少十秒钟。如果在十秒之前释放装置，血液吸收的变异风险会增加，进而影响后续分析结果。当样本被完全吸收后，轻轻拉出活塞以及吸收性微针，使用无菌镊子夹住微针上的两个孔，将其从活塞上取下。

向干冰上的离心管中加入 50 微升裂解缓冲液，并将完整的微针针尖朝下放入干冰上的离心管中。在移取过程中，注意不要让微针尖端接触任何物体。涡旋震荡离心管 3 至 5 秒，以从微针尖端收集部分样本材料，然后将离心管置于 42 摄氏度的加热块或水浴中孵育 30 分钟。

孵育结束后，使用无菌镊子将微针的尾端与微量离心管的上边缘对齐，并盖上管盖，使微针顶端被固定在管盖与管体之间。离心该管，以收集装置吸收层中的样品材料，然后用镊子小心取出微针，避免针尖重新浸入缓冲液中。再次离心样品，并小心将上清液转移至新的微量离心管中。

接下来，将250 µL裂解缓冲液加入纯化柱滤膜中，在室温下孵育5分钟，然后通过离心去除液体。向提取的RNA样品中加入50 µL 70%乙醇，轻轻混匀，将混合液转移至预处理过的纯化柱中。立即离心两次以去除穿流液，随后用100 µL洗涤缓冲液1进行洗涤。

进行DNA消化时，将40 µL新配制的DNA孵育混合液直接加入纯化柱膜上，室温孵育15分钟，随后用40 µL洗液一洗涤。离心结束后，用100 µL洗液二洗涤纯化柱，并检查纯化柱中是否有残留的洗液。将纯化柱转移至RNA提取试剂盒中提供的0.5 mL微量离心管中，将移液器吸头直接置于纯化柱膜上，向柱中加入11 µL RNA sPRE水。

室温孵育两分钟后，离心柱子一次，使RNA sPRE水充分分布于柱中，再离心一次以洗脱RNA。若不立即进行cDNA合成，将总RNA样本保存于负80摄氏度。吸收性微活检微针由两层钢板构成，中间夹有吸收层，可同时采集皮肤和血液样本。

使用吸收性微活检针仅会引发轻微的红斑，48小时后即不再明显。穿刺后，少量皮肤组织碎片会聚集在微针尖端附近，同时血液被滤纸吸收。若在穿刺后立即移除吸收性微针，则所获得的样本体积以及后续提取的mRNA量均显著低于穿刺后保留十秒钟再移除的情况。

通过定量PCR分析，在使用吸收性微活检和其前身皮肤微活检后，检测到相似水平的皮肤标志物表达。但在吸收性微活检取样后，检测到显著更高水平的白细胞生物标志物表达，表明吸收性微活检微针在血液采集方面表现更优，同时保持了与皮肤微活检相同的皮肤样本获取能力。因此，在应用该技术时，必须牢记按照我们建议的方法使用装置，对于获得可靠结果至关重要。

因此，按照此操作流程，可进一步采用其他方法（如实时PCR）进行相对基因表达谱分析。尽管我们仍在对该设备进行改进，但我们相信，该技术因其操作简便且微创性极低，已为临床研究中的取样、皮肤美容或儿科应用开辟了新的途径。