Name: 利用机器人系统对结肠小鼠样本进行处理和嵌入进行组织学分析 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 33 s
Description: 学习利用机器人系统对小鼠结肠组织进行标准化处理和石蜡包埋的方法。该技术可减少方法学变量，提高组织学分析质量，适用于炎症和肿瘤研究。

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感谢米兰IRCCS综合医院病理科提供的技术支持，以及IEO动物实验中心在动物饲养方面给予的协助。

动物实验已获得意大利卫生部批准（授权编号：127/15，27/13），并遵循欧洲肿瘤研究所IACUC（机构动物护理与使用委员会）的动物护理指南
1. 通过重复给予DSS诱导慢性结肠炎
<ol>
	<li>将年龄和性别相匹配的小鼠分为2组（DSS处理组 vs. 对照H2每实验组至少5只同窝小鼠。</li>
	<li>处理组饮用含2.5% DSS（40 kDa）的水，对照组饮用纯水，持续7天。 
	注意： 该模型可诱导产生慢性透壁性肠道炎症9.</li>
	<li>7天后停止DSS处理，两组均给予饮水14天。重复此过程3次。 
	注意：重复给予DSS可诱导结肠黏膜发生改变，与人类炎症性肠病（IBD）的纤维化表现极为相似。9.</li>
	<li>根据机构IACUC批准的程序处死小鼠，即, 由 CO2 吸入</li>
	<li>用手术刀切开小鼠腹腔和腹膜。 
	注意： 建议无菌操作，但并非严格必需。</li>
	<li>用镊子和止血钳将结肠与小肠分离。用镊子和止血钳切除结肠。 
	注意： 结肠长度测量（图1A是一种用于确定DSS处理小鼠是否发生结肠炎的方法。</li>
	<li>在培养皿中用 10 mL 冷的 1x 磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗结肠，并轻轻按压以去除粪便物质。</li>
</ol>
2. 小鼠组织固定
<ol>
	<li>将每份小鼠结肠样本浸入 10 mL 的 10% 中性缓冲福尔马林（NBF）中，于室温（RT）下处理。 
	注意：建议保持无菌，但非严格必需。</li>
	<li>于室温下固定组织 18–24 小时。</li>
</ol>
3. 结肠切片与组织制备
<ol>
	<li>用小镊子将固定组织从NBF容器中取出，并放入培养皿中。用小镊子将结肠放置在切片工作板上。</li>
	<li>用无菌手术刀将结肠切成片段（长度为0.2 cm至0.3 cm）。此片段长度最为适宜，可避免超过包埋盒的厚度限制。</li>
	<li>用小镊子夹取一段结肠组织（图2A）。用小镊子将一段结肠组织插入定向石蜡包埋盒的其中一个塑料凸起端内（图2B）。</li>
	<li>每个包埋盒重复步骤（3.2–3.3）再插入另外3段结肠组织。避免将组织段插入相邻的凸起端，以尽量减少组织重叠。</li>
	<li>小心按压包埋盒的四个边缘，将其紧密闭合（图2C）。避免挤压组织，以防造成组织损伤。</li>
	<li>将网格插入塑料支撑架中。标记支撑架以识别样品。对每个生物学样品重复上述操作。</li>
</ol>
4. 组织处理
<ol>
	<li>按下电源按钮，启动自动组织处理仪（图3A，3B）。</li>
	<li>预热1小时，以确保石蜡完全融化。观察仪器上专用图标是否出现，以确认石蜡已完全融化（图3C）。</li>
	<li>将每个已定向的组织包埋盒（内含组织样本）手动插入自动组织处理仪配备的金属篮中（图3D）。将包埋盒垂直放置，并紧密排列，以优化篮子的空间利用率。</li>
	<li>关闭金属篮（图3E）。</li>
	<li>打开浸蜡缸的盖子（图3F）。浸蜡缸是用于将金属篮插入仪器内部的腔室。将金属篮插入处理仪指定的卡槽中（图3G），然后关闭浸蜡缸盖子（图3H）。</li>
	<li>使用仪器计算机上的触摸屏设定工作程序（图3I）。根据表1提供的方案，选择所用试剂溶液的顺序、处理时间和温度。</li>
	<li>通过点击计算机上的专用图标，将选定程序分配给装有金属篮的浸蜡缸（图3J）。点击启动按钮开始运行程序（图3L）。</li>
	<li>等待仪器显示程序结束的专用图标，并听到仪器发出的提示音，以确认程序已完成。</li>
	<li>打开浸蜡缸盖子，从处理仪中取出金属篮（图3M）。</li>
</ol>
5.&#160; 组织包埋
<ol>
	<li>按下电源按钮，启动自动包埋机（图4A）。</li>
	<li>预热1小时，以确保石蜡完全融化。观察仪器内置温度计显示的石蜡浴温度，待仪器确认石蜡已完全融化后方可继续操作。</li>
	<li>将处理完毕的组织盒从处理机篮中手动转移至包埋机架上。每个架最多可容纳32个组织盒（图4B、4C）。</li>
	<li>打开包埋机主盖板（图4C、4D、4E）。</li>
	<li>使用仪器计算机上的触摸屏，向机器人系统发出即将插入架的信号（图4F）。</li>
	<li>打开进样仓盖板（图4G），将架插入进样仓。每台包埋机最多可同时容纳4个架（图4H、4I）。关闭进样仓盖板（图4J）。</li>
	<li>根据表2，使用仪器计算机上的触摸屏启动包埋程序（图4K）。 
	注意：每批32个组织盒的包埋过程需时45分钟。</li>
	<li>观察仪器上专用图标是否出现，待仪器确认程序结束后再进行下一步操作（图4L）。</li>
	<li>取出出口架（图4M），关闭包埋机主盖板。</li>
	<li>从架上取下已包埋的蜡块（含方向网格），并将蜡块转移至储存用纸板盒中。</li>
</ol>
6. 微米切片
<ol>
	<li>打开切片机的冷却板，将温度设置在 -8 至 -10 °C 之间。</li>
	<li>打开切片机的恒温水浴，其中装有2 L蒸馏水，将水浴温度设定在42–45 °C之间。</li>
	<li>将石蜡包埋块置于冷却板上，至少静置5分钟以使包埋块充分冷却。</li>
	<li>从冷却板上取下一个组织块，并将其放入切片机的样品夹中。</li>
	<li>将切片机切片厚度设置为 10 µm。以 10 µm 厚度对包埋块进行修块，连续切片 6 次。</li>
	<li>将切片机的厚度设置从10 µm调整为3 µm。切一张3 µm厚的切片用于苏木精和伊红（Hematoxylin and Eosin，H&E）染色。&amp;#38;E) 染色。</li>
	<li>用小刷子收集3 µm切片。将3 µm切片放入水浴中，小心铺展于水面，以减少组织皱褶。从恒温水浴中将组织切片转移至单张载玻片上。
	<ol>
		<li>如有需要，可切取更多切片。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用记号笔在载玻片上标注样本编号。</li>
	<li>将载玻片放入37 °C的烘箱中至少10分钟。</li>
	<li>将载玻片放入架子中用于立即分析，或放入储存盒中保存。</li>
</ol>
7. 苏木精和伊红（H&amp;#38;E）染色
<ol>
	<li>按下电源按钮，开启自动染色机。通过观察仪器显示器上加载进度条的变化，等待机械臂完成初始化。</li>
	<li>将玻璃载玻片垂直插入染色机支架中，最多可插入30张载玻片。</li>
	<li>使用合适的射频识别（RFID）塑料标签标记支架。RFID标签系统用于识别已加载到染色机计算机中的正确染色程序。</li>
	<li>将支架插入染色机中。计算机将根据RFID标签的识别信息自动加载并启动相应的染色程序。 
	注意：苏木精和伊红（H&amp;#38;E）染色的程序详见表3。</li>
</ol>
8. 免疫组织化学染色
<ol>
	<li>按照先前所述方法进行免疫组织化学染色和马洛里三色染色7。</li>
</ol>

<ol><li>Gibson-Corley, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+Integration+of+the+Histology+Core+Laboratory+in+Translational+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+histotechnology%22%5BJournal%5D)">Successful Integration of the Histology Core Laboratory in Translational Research.</a> Journal of histotechnology. 35, 17-21 (2012).</li>
<li>Olivier, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+modified+species+in+research%3A+Opportunities+and+challenges+for+the+histology+core+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+histotechnology%22%5BJournal%5D)">Genetically modified species in research: Opportunities and challenges for the histology core laboratory.</a> Journal of histotechnology. 35, 63-67 (2012).</li>
<li>Gibson-Corley, K. N., Olivier, A. K., Meyerholz, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+for+valid+histopathologic+scoring+in+research%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+pathology%22%5BJournal%5D)">Principles for valid histopathologic scoring in research.</a> Veterinary pathology. 50, 1007-1015 (2013).</li>
<li>Stolfi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+interleukin-21+in+the+regulation+of+colitis-associated+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">Involvement of interleukin-21 in the regulation of colitis-associated colon cancer.</a> The Journal of experimental medicine. 208, 2279-2290 (2011).</li>
<li>Begley, C. G., Ellis, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+development%3A+Raise+standards+for+preclinical+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Drug development: Raise standards for preclinical cancer research.</a> Nature. 483, 531-533 (2012).</li>
<li>Peters, S. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPeters%2C+SR+%22A+Practical+Guide+to+Frozen+Section+Technique%22">A Practical Guide to Frozen Section Technique</a>. , New York, N.S.N.Y. (2010).</li>
<li>Rosai, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRosai%2C+J+%22Rosai+and+Ackerman%27s+Surgical+Pathology%22">Rosai and Ackerman's Surgical Pathology</a>. , Elsevier. (2011).</li>
<li>Blumberg, R. S., Saubermann, L. J., Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+mucosal+inflammation+and+their+relation+to+human+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Animal models of mucosal inflammation and their relation to human inflammatory bowel disease.</a> Current opinion in immunology. 11, 648-656 (1999).</li>
<li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature. 2, 541-546 (2007).</li>
<li>Kaser, A., Zeissig, S., Blumberg, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Inflammatory bowel disease.</a> Annual review of immunology. 28, 573-621 (2010).</li>
<li>Cribiù, F. M., Burrello, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implementation+of+an+automated+inclusion+system+for+the+histological+analysis+of+murine+tissue+samples%3A+A+feasibility+study+in+DSS-induced+chronic+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Inflammation%22%5BJournal%5D)">Implementation of an automated inclusion system for the histological analysis of murine tissue samples: A feasibility study in DSS-induced chronic colitis.</a> European Journal of Inflammation. 16, 1-12 (2018).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

在小鼠组织进行组织病理学分析的制备过程中，我们采用了多种自动化步骤。本方案旨在提供技术提示，以提高整个流程的可重复性和标准化程度，从而提升最终组织病理学评估的整体质量。我们引入了用于组织制备和包埋的自动化仪器与方法，这些仪器和方法在病理学核心设施中常用于人源样本的研究。
为了展示该方法的潜在适用性，我们选择了一种称为DSS诱导的慢性结肠炎模型的小鼠慢性实验体系，用于研究肠道炎症。该模型类似于炎症性肠病（IBD）患者中观察到的复杂疾病进程，需要进行精细的组织学评估，以深入分析慢性肠道炎症过程中组织结构发生的显著改变。总体而言，对这些过程的组织学评估可能会因样本制备质量的提高而显著受益。需要注意的是，本方案也可应用于其他小鼠组织（如脾脏、淋巴结、肝脏、脑组织），唯一的区别在于，对于无管腔的组织，无需使用定向包埋盒。
最重要的观察结果是手动错误的减少（即, 由于使用了带有网格的包埋盒，并且在包埋过程中无需重新打开包埋盒（这一步骤在手动操作流程中通常需要），样品的取向得以保持，从而显著提高了分析的整体可重复性。根据本...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58654/using-robotic-systems-to-process-embed-colonic-murine-samples-for">Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses</a>.&#160; An author affiliation&#160;was updated.
The affiliation for Claudia&#160;Burrello and Federica Facciotti was updated from:
Department of Experimental Oncology, European Institute of Oncology
to:
Department of Experimental Oncology, IEO, European Institute of Oncology IRCCS

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58654/using-robotic-systems-to-process-embed-colonic-murine-samples-for">Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses</a>.&#160; An author affiliation&#160;was updated.

Erratum: Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses

近几十年来，已开发出多种实验模型，用于解析导致人类疾病的致病机制1,2。为了评估疾病的严重程度，研究人员必须评价治疗的效果，并研究细胞学和组织学结构的变化或炎症程度3。对这些实验模型进行研究时，需要进行详细的组织病理学分析，通常需比较小鼠与人类样本4,5。
此外，人类样本通常由组织病理学核心设施和经验丰富的病理学家通过标准化的组织病理学标准和方法进行处理和评分。相反，小鼠组织通常由对组织病理学操作流程经验有限的研究人员进行固定、包埋和分析。组织病理学检查的质量和可靠性始于高质量组织切片的制备。多个关键因素会影响最终分析结果的质量，包括固定、大体切片、处理、石蜡包埋以及样本的包埋方式6,7。
所有这些涉及样本操作的步骤均可能引入人为误差，包括样本的手动包埋，以及在较小程度上的手动切片和染色。目前，小鼠组织用于组织学评估的整个制备过程依赖于各实验室之间存在差异的手动操作方案。本研究的目标是建立标准化的自动化操作流程，以减少小鼠组织病理学检查中的误差和变异。
据我们所知，本文首次描述了用于小鼠组织病理学评估的全自动组织处理与包埋方案，这些方案通常被病理科用于人类标本的分析。作为该方法可行性的实际示例，已对一种小鼠肠道炎症模型进行了分析，即, 通过在饮水中反复给予硫酸葡聚糖钠（DSS）诱导的慢性结肠炎模型8,9该实验条件与人类炎症性肠病（IBD）高度相似10 由于DSS处理的动物会表现出肠道炎症的迹象，例如体重减轻、稀便或腹泻、结肠缩短以及纤维化8,9,11正如在人类炎症性肠病（IBD）患者中所观察到的那样，DSS处理会引发复杂的疾病进程。在此背景下，需要进行详尽的组织学评估，以理解组织结构的深刻改变。因此，采用所述方案提高样本制备质量，可能有助于依赖组织学和免疫组织化学分析来解读小鼠实验结果的研究人员。涉及组织结构改变、不同组织和器官（如肠道、脑、肝脏、皮肤）中存在细胞浸润或炎症反应的人类疾病小鼠实验模型，均可从更高质量的样本制备中受益，以用于组织病理学检查。

<table><tbody><tr><td>无水乙醇</td><td>Carlo Erba</td><td>414605</td><td>试剂</td></tr><tr><td>无水乙醇（ETOH）</td><td>Honeywell</td><td>02860-1L</td><td>试剂</td></tr><tr><td>硫酸铝钾</td><td>SIGMA</td><td>A6435</td><td>试剂</td></tr><tr><td>苯胺蓝</td><td>SIGMA</td><td>415049</td><td>试剂</td></tr><tr><td>石炭酸品红</td><td>SIGMA</td><td>C4165</td><td>试剂</td></tr><tr><td>CD11b（克隆 M1/70）</td><td>TONBO biosciences</td><td>35-0112-U100</td><td>抗体</td></tr><tr><td>CD20 免疫组化（克隆 SA275A11）</td><td>Biolegend</td><td>150403</td><td>抗体</td></tr><tr><td>CD3（17A2）</td><td>TONBO biosciences</td><td>35-0032-U100</td><td>抗体</td></tr><tr><td>CD4（GK1.5）</td><td>BD Biosciences</td><td>552051</td><td>抗体</td></tr><tr><td>CD45.2（克隆 104）</td><td>BioLegend</td><td>109837</td><td>抗体</td></tr><tr><td>CD8（53-6.7）</td><td>BD Biosciences</td><td>553031</td><td>抗体</td></tr><tr><td>柠檬酸盐缓冲液 pH 6 10倍浓缩液</td><td>SIGMA</td><td>C9999</td><td>试剂</td></tr><tr><td>DAB</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td>试剂</td></tr><tr><td>DPBS 1倍溶液</td><td>Microgem</td><td>L0615-500</td><td>试剂</td></tr><tr><td>DSS</td><td>TdB Consultancy</td><td>DB001</td><td>试剂</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>SIGMA</td><td>E9884</td><td>试剂</td></tr><tr><td>EnVision Flex 过氧化物酶阻断试剂</td><td>DAKO</td><td></td><td>包含于 GV80011-2</td></tr><tr><td>EnVision Flex 底物</td><td>DAKO</td><td></td><td>包含于 GV80011-2</td></tr><tr><td>EnVision Flex/HRP</td><td>DAKO</td><td></td><td>包含于 GV80011-2</td></tr><tr><td>EnVision Flex+ 大鼠连接剂</td><td>DAKO</td><td></td><td>包含于 GV80011-2</td></tr><tr><td>伊红</td><td>VWR</td><td>1.09844</td><td>试剂</td></tr><tr><td>F4/80（克隆 BM8）</td><td>BioLegend</td><td>123108</td><td>抗体</td></tr><tr><td>福尔马林</td><td>PanReac</td><td>2,529,311,215</td><td>试剂</td></tr><tr><td>冰醋酸</td><td>SIGMA</td><td>71251</td><td>试剂</td></tr><tr><td>山羊抗大鼠-HRP</td><td>Agilent DAKO</td><td>P0448</td><td>抗体</td></tr><tr><td>苏木精</td><td>DIAPATH</td><td>C0303</td><td>试剂</td></tr><tr><td>LEICA 旋转式切片机（RM2255）</td><td>Leica</td><td>RM2255</td><td>设备</td></tr><tr><td>Ly6g（克隆 1A8）</td><td>BD Biosciences</td><td>551459</td><td>抗体</td></tr><tr><td>氧化汞(II)</td><td>SIGMA</td><td>203793</td><td>试剂</td></tr><tr><td>Omnis Clearify 透明剂</td><td>DAKO</td><td>CACLEGAL</td><td>试剂</td></tr><tr><td>Omnis EnVision Flex TRS</td><td>DAKO</td><td>GV80011-2</td><td>试剂</td></tr><tr><td>橙黄G</td><td>SIGMA</td><td>O3756</td><td>试剂</td></tr><tr><td>石蜡</td><td>Sakura</td><td>7052</td><td>试剂</td></tr><tr><td>Peloris</td><td>LEICA</td><td></td><td>设备</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>SIGMA</td><td>P4937</td><td>试剂</td></tr><tr><td>不含L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基</td><td>Microgem</td><td>L0501-500</td><td>试剂</td></tr><tr><td>STS020</td><td>Leica</td><td></td><td>设备</td></tr><tr><td>Tissue-Teck 可切片包埋盒（Paraform）</td><td>SAKURA</td><td>7022</td><td>设备</td></tr><tr><td>Tissue-Tek 自动石蜡包埋机</td><td>Sakura</td><td></td><td>设备</td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>J.T.Baker</td><td>8080.1000</td><td>试剂</td></tr></tbody></table>

使用机器人系统处理并包埋小鼠结肠样本以进行组织学分析

Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses

由于动物模型的研究，人类疾病的认识已得到极大拓展。然而，实验模型的组织病理学评估必须与人类样本的评估同样严格。事实上，得出可靠且准确结论的关键在于组织切片制备的质量。本文介绍了一种小鼠组织组织病理学分析的方案，在从初始处理到小鼠样本石蜡包埋的整个过程中引入了多个自动化步骤。通过自动化操作实现严格的方案标准化，减少了方法学上的变量，从而提高了小鼠病理分析的整体可靠性。具体而言，本方案描述了利用自动化处理和包埋机器人系统——这些系统通常用于人类样本的组织处理和石蜡包埋——来处理小鼠肠道炎症标本的方法。我们得出结论：引入标准化和自动化的技术可显著提高小鼠组织组织病理学检查的可靠性。

通过在饮水中反复给予DSS诱导的实验性慢性结肠炎是一种小鼠肠道炎症模型，与人类炎症性肠病（IBD）非常相似8,9。图1描述了DSS处理的影响，包括结肠缩短（图1A），这是评估DSS诱导炎症存在与否的常用指标，以及结肠中促炎基因CXCL10、tnf和mcp-1的表达（图1B）。DSS处理显著增强了炎性细胞的浸润，通过流式细胞术分析显示肠道固有层中免疫反应被募集（图1C）。
图2 展示结肠组织...

缺乏标准化的小鼠组织处理流程降低了小鼠组织病理学分析的质量，相较于人类样本存在明显不足。本文介绍一种用于小鼠炎症性及非炎症性结肠组织病理学检查的实验方案，以证明常规用于组织处理与包埋的机器人系统的可行性&#160;人源样本

人类疾病的研究因动物模型的使用而得到了极大拓展。然而，对……的组织病理学评估

该自动化方案利用常规用于人源样本处理和包埋的机器人系统，实现小鼠组织的组织病理学制备，显著提高了样本质量。该技术的主要优势在于减少了方法学上的变量，并改善了操作步骤的标准化。本次演示由 Francesca Boggio 进行。Francesca Boggio 是在我实验室工作的病理学家。首先使用小镊子将固定好的小鼠结肠组织样本从中性缓冲甲醛溶液中转移至培养皿内的切片工作板上。用无菌手术刀将结肠切成 0.2 至 0.3 厘米的片段，并用镊子将一段组织放入定向石蜡包埋盒中三个不相邻的带塑料凸起的孔内。小心地推压盒盖的四个边缘以闭合暗盒，并将载网插入塑料支撑框中。随后标记支撑框以标识样品，并将暗盒转移至载网中。处理前一小时，启动自动处理仪。当仪器显示石蜡已熔化时，手动将金属篮插入自动处理仪中。当所有包埋盒都插入后，合上篮子并打开浸蜡缸的盖子。将篮子放入处理仪的专用腔室内，然后关闭浸蜡缸盖。使用仪器计算机上的触摸屏，根据表格中提供的方案设定工作程序，选择溶液序列、时间和温度。点击专用的计算机图标，将程序分配给装有盒篮的反应罐，然后点击启动按钮。当仪器以专用图标和警报声提示程序结束时，打开反应罐盖，从处理器中取出盒篮。在组织包埋前一小时，打开自动包埋机，并等待仪器上的石蜡浴温度计显示石蜡完全融化。手动将最多32个已处理的包埋盒从处理机篮中转移至包埋机载架上，并打开包埋机主盖。使用触摸屏向机器人系统发出信号，提示正在插入载架，并打开进样口外壳盖。将最多四个托架插入进样仓，并合上进样仓盖。然后，按照表格中的指示，使用触摸屏启动包埋程序。当仪器通过专用图标提示程序结束后，取出出样托架并合上包埋机主盖。然后，将嵌入的组织块从架子转移到储存盒中。结肠缩短以及促炎基因在结肠中的表达是评估葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导炎症的常用指标。DSS处理还会显著增强炎性细胞向肠黏膜固有层的浸润。如图所示，通过自动化处理的未处理样本进行H&E染色后显示，与DSS处理动物的样本相比，其浸润性炎性细胞较少，上皮结构改变及黏膜组织结构变化也较轻微。可通过CD20免疫组织化学染色和Mallory三色染色进一步确认自动化仪器对小鼠组织样本制备和包埋的质量。值得注意的是，与手工方法处理的样本相比，自动化样本处理 consistently 能够评估更高比例的组织学参数。注意将组织正确插入网格中，等待自动处理仪准备就绪，并等待石蜡完全融化。该方法可用于对任何小鼠组织进行组织学分析，其质量可达到用于小鼠模型中的人类病理学家所使用的人体组织学样本的水平。该技术已成功应用于炎症性组织炎症的研究，也将有助于结直肠小鼠癌症模型的研究。由于本方案中使用的某些试剂具有危险性，因此在操作过程中请务必佩戴防护手套、护目镜和实验服。

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Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

利用机器人系统对结肠小鼠样本进行处理和嵌入进行组织学分析

本视频介绍了建立患者来源的异位移植结直肠癌小鼠模型的实验方案，用于研究结直肠癌细胞在非肥胖型糖尿病/重度联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠体内的进展过程。该小鼠模型有助于理解原发肿瘤的生长特性及转移模式。...

建立结直肠癌PDOX小鼠模型：在小鼠模型中研究结直肠癌的进展

结直肠癌, PDOX模型, 小鼠模型, 肿瘤异种移植, 癌症进展, 原位移植, 患者来源的异种移植, 肿瘤微环境, 转移, 预临床模型

本视频演示了在小鼠中进行结肠镜引导下钳取活检的实验方案。该技术有助于直观分析结肠腔，并采集组织样本用于深入研究。...

小鼠模型中结肠镜引导下的钳取活检技术：一种用于观察和提取小鼠结肠组织样本的方法

近年来，新一代内窥镜已成为评估小鼠结肠炎和结直肠肿瘤的重要诊断与研究工具。本文详细介绍了一种用于小鼠内窥镜下评估炎症及结直肠肿瘤的实验方案，并提出一种新颖的评分系统，该系统采用小数标识符来记录结肠炎和结直肠肿瘤的内窥镜下严重程度。...

利用经验证的内镜评分系统对小鼠进行柔性结肠镜检查以评估结肠炎和结直肠肿瘤的严重程度

介绍了一种使用简易装置切割并“卷绕”小鼠肠道以快速制备全组织铺片的方法。...

一种快速制备小鼠肠道全组织装片的简易装置

本文介绍一种简单的方法，用于分离空间位置不同的鼠结肠上皮表面细胞与 underlying crypt-base...

小鼠结肠黏膜显微解剖的冷冻切片法

肠上皮干细胞（ISCs）与潘氏细胞相互混杂。这些潘氏细胞是ISC的分化后代，不仅支持ISC的存活，还提供抗菌保护。本文展示了我们如何利用转基因条件型小鼠模型，证实潘氏细胞在维持肠上皮稳态中发挥关键作用。...

使用条件性 Cre-lox 小鼠模型分析潘氏细胞在小鼠肠道再生中作用的实验方案

本文详细描述了在小鼠中进行结肠镜引导下钳取活检并实时追踪伤口闭合过程的操作步骤。此外，还提供了用于对伤口床进行组织学、免疫组织化学及分子学分析的组织制备方法。...

在小鼠中进行结肠镜引导下的钳取活检及后续组织变化评估

这一简化的实验方案详细描述了从组织固定到利用荧光标记微生物，以检测和成像复杂组织样本中细菌的工作流程 原位 杂交...

通过荧光技术可视化肠道微生物群-宿主相互作用 原位 杂交、凝集素染色与成像

为了研究小肠如何处理不同大小的颗粒物，我们改进了一种已建立的方法 体内...

研究小鼠小肠对管腔内颗粒物的机械感知

本方案描述了一种高通量工作流程，利用人工智能对染色的薄组织切片图像中经病理学确认的兴趣区域进行分割，以通过激光显微切割富集组织学分辨的细胞群体。该策略包含一种新算法，可将标记感兴趣细胞群体的边界直接传输至激光显微镜。...

工业化的、人工智能引导的激光显微切割技术用于肿瘤微环境的微尺度蛋白质组学分析

我们描述了一种通过肠道操作建立的小鼠术后肠梗阻模型。在手术后24小时评估了胃肠道传输功能、病理变化以及免疫细胞的活化情况。...

术后肠梗阻小鼠模型

学习利用机器人系统对小鼠结肠组织进行标准化处理和石蜡包埋的方法。该技术可减少方法学变量，提高组织学分析质量，适用于炎症和肿瘤研究。

使用机器人系统处理并包埋小鼠结肠样本以进行组织学分析

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