一种优化的 Rhizobox 协议, 用于可视化根系生长和对局部营养素的响应

这种方法可以帮助回答根和Rhizsphere科学领域的关键问题，例如根如何回应局部的营养物质斑块。该技术的主要优点是，它允许重复的，非侵入性测量在土壤中的单个根系，但它不需要专门的设备，它相对便宜。收集 Rhizobox 的零件以进行装配。

其中包括由透明丙烯酸制成、约40厘米、61厘米的正面和背面面板。此时，后面板顶部有侧面和底部的空格。空间器与面板中以前钻过的孔对齐。

切割聚酯填充的长度，沿 Rhizobox 的底部。将衬垫放在底部垫垫正上方的后面板上，以帮助防止泄漏。将顶部面板放在垫片上，以将衬垫放置到位。

现在获取硬件来组装 Rhizobox。每个钻孔都使用螺钉、两个垫圈和六角螺母。将垫圈放在前面板上，然后将螺钉拧紧到后面板上。

另一个垫圈和十六进制螺母。为避免土壤流失，请确保所有螺钉都很紧。此外，创建两个空格来形成处理和控制补丁。

用高密度聚乙烯板制作，并在顶部固定螺钉，仅允许部分插入。对于光剥夺和减少热量，准备一个保护箱，可以包围盒子。最后，构建一个框架，鼓励根在后面板上生长。

此 PVC 框架以大约 55 度的角度将盒子保持。准备好田间土壤和沙子的均质混合物。从一个大袋子开始，里面装着每个 Rhizobox 的基底混合物。

每个盒子标有两个小拉链袋，用于处理和控制补丁。使用秤，重达 30 克的土砂基材。将基板转移到控制袋中。

同样，在治疗袋中加入30克基板。然后称一克氮15标签氮源，并将其添加到处理袋中。将基板和氮气源彻底混合。

使用一个 Rhizobox 和它的补丁贴片器。将两个空格器插入 Rhizobox，直到螺钉防止进一步运动。标记 Rhizobox 侧面的空格基底边缘的深度。

然后删除下一步的空格。使用漏斗将 Rhizobox 从大袋基材填充到标记的深度。缓慢均匀地来回移动漏斗，以均匀地填充 Rhizobox。

当基板处于显著深度时，将空间器放入包装盒中。它们应该距离盒子的左右两侧五厘米。继续灌装盒子，直到基板距离盒子顶部约五厘米。

接下来，用150毫升的水或用手，安排在包装盒中的基板缓慢灌溉。让它休息几个小时或过夜，使水扩散，每个空间周围的区域是彻底湿。此时，拆下空格，为贴片留空空腔。

现在，磁带透明膜到盒子的外面。使用透明度将一个修补程序标记为处理，另一个修补程序标记为控件。然后使用漏斗和准备好的控制基板填充控制补丁。

这是填充后标记的控制修补程序。继续用准备好的治疗基板以同样的方式填充处理补丁。完成后，使用永久标记跟踪透明度胶片上每个修补程序的边界。

接下来，用大袋中剩余的基材均匀地填充 Rhizobox。通过跟踪透明度上的基板顶部完成。盒子准备好后，移植发芽的种子。

首先，使用狭窄的铲子在 Rhizobox 的中心挖一个洞。这个洞应该深2.5厘米。将发芽的种子放在里面，确保基是直接向下。

跟踪附加到框的透明度上种子的位置。盖上种子，然后用高达50毫升的去化水浇水。接下来，将框封闭在它的情况下，以防止光在生长过程中与根相互作用。

将盒子放在准备的框架上。将 Rhizobox 放在框架上，以鼓励向后框架增长。每三到四天的植物生长后取回盒子。

移除外壳后，每次使用不同的彩色笔跟踪植物可见的根。与本示例一样，此步骤要保持一致和系统化。将盖盒返回到其支架，并确保其位于其原始方向。

在这里，24 个 Rhizobox 背面的跟踪根的总根长度根据使用扫描仪和计算机软件测量的根长度绘制。框前面跟踪根图案的类似图显示根在框的背面优先生长。此图中总根长度对数的一致斜率表示不同框之间的增长率相似。

以下是一种玉米基因型的根长密度数据。控制片的密度小于氮处理片的密度。实验比较了六种独立玉米基因型的根长密度。

在所有情况下，与控制贴片相比，氮 15 标记处理贴片中的根长密度更大。该协议可以与其他方法相结合，如植物学或浮游原位杂交，以可视化酶活性或微生物的分布。