用不连续密度梯度用胶囊分离细菌

这种方法可以帮助回答克莱布西拉领域的关键问题，例如哪些基因用于调节胶囊和相关毒性。该技术的主要优点是，它提供了一种物理分离倾覆菌株和非倾覆菌株的手段，它也可用于快速比较胶囊生产菌株。虽然这种方法被开发用于研究克莱布西拉的胶囊调节，但它也可以应用于不同的细菌物种。

通常，对此方法具有新功能的个人将难以操作，因为浇注梯度并将单元格添加到梯度中可能相当困难。此方法的可视化演示至关重要，因为我们展示了难以掌握的技术，提供了帮助用户的建议和提示。首先，从带无菌循环的库存板中选择一个菌落，并接种10毫升的适当肉汤。

一夜之间孵育文化。然后将培养器转移到15毫升管和离心机。接下来，丢弃上一代，并在两毫升PBS中重新悬浮颗粒。

重复离心，并丢弃产生的上经剂。然后在两毫升PBS中重新悬浮颗粒。要创建密度梯度稀释，请将密度梯度介质与 PBS 混合。

然后将每个梯度的600微升稀释成单独的两毫升管。用200微升移液器接100微升细胞，将移液器尖端放在管子的一侧，就在许多梯度之一的半月板的下方。非常缓慢地将细菌细胞吸到梯度上，注意不要混合界面。

在8000克的离心管10分钟。在此之后，将管转移到机架中，以可视化保留梯度层上方单元格所需的最小梯度稀释。首先，将最稀薄密度梯度稀释的一毫升转移到五毫升的圆底管中。

使用带 1.5 英寸针头的注射器，占下一个最集中密度梯度的一毫升。将针头放在管子底部，并非常缓慢地注射注射器的内容。密度梯度的每个步骤都必须有一个清晰的接口。

如果层混合，你将不能实现细菌的清洁分离。轻轻地从渐变中取下针头，以免干扰梯度稀释之间的界面。然后将管子放在机架中。

小心地将 600 微升的已准备好的细胞添加到管中的梯度顶部。然后将管子放在管适配器中，然后用适配器称重管子以确保平衡。在此之后，将管适配器放在台式离心机内的固定角度转子中，并在 3，000 g 的离心机中离心 30 分钟。

最后，离心后，小心地取出管子，将其放在机架中，并拍摄结果。在该协议中，密度梯度离心用于根据细菌菌株产生的胶囊量分离细菌菌株。虽然确切的结果取决于细菌物种，但大多数菌株将迁移到梯度内的单个位置。

将此方法应用到细菌突变库中，应产生梯度上方的大带、穿过梯度最上层的密度较低的带和底部的小角角分数。在尝试此过程时，必须记住梯度接口不应混合，梯度不应包含气泡。按照程序，应执行验证方法，如尿酸测定或显微镜，以检查胶囊量。

当将这种技术用于新菌株时，这一点尤其重要。不要忘记，使用危险组 2 病原体可能是危险的。执行本程序时，应始终采取纠正防护设备、遵守风险评估和正确处置培养物等预防措施。