Name: 小鼠棕色脂肪组织的染色质免疫沉淀 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: 学习小鼠棕色脂肪组织的染色质免疫沉淀测序方法，优化用于高效免疫沉淀染色质相关复合物。该技术可研究组蛋白修饰和非组蛋白定位，为代谢调控研究提供重要工具。

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本方案中的动物操作步骤已获得波士顿大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准。
1. 第1天：用于染色质免疫沉淀（ChIP）的棕色脂肪组织解剖与制备
<ol>
	<li>使用二氧化碳（CO₂）安乐死小鼠2）室，并立即进行解剖。切口前用70%乙醇喷洒小鼠毛发。将小鼠背部朝上放置，沿颈部切开皮肤。在肩部之间的皮下直接定位棕色脂肪组织（BAT），该组织位于肩胛间区（interscapular），呈两个叶状、蝴蝶形结构，表面有一层薄薄的白色脂肪，需仔细去除7). 
	注意： 对于一只3月龄、饲喂常规饲料的C57BL/6J小鼠（此年龄段小鼠体重范围为27至30 g），每侧棕色脂肪组织（BAT）叶长约1 cm。无论雄性还是雌性小鼠，BAT库的总重量均约为0.15 g。</li>
	<li>每次使用1个BAT垫进行3次ChIP实验。可同时处理多个BAT垫，直至超声步骤。</li>
	<li>在室温下，将每块棕色脂肪组织（BAT）样本置于含有1%甲醛的10 mL磷酸盐缓冲液（PBS）中，以150 rpm转速旋转交联15分钟。</li>
	<li>加入甘氨酸至终浓度为125 mM，终体积由2.5 M储备液提供，室温下150 rpm旋转孵育5分钟，以终止交联反应。</li>
	<li>将BAT垫转移至500 µL低渗裂解缓冲液（10 mM HEPES, 1.5 mM MgCl₂）中2，10 mM KCl，0.5 mM DTT，0.2 mM PMSF）并加入2颗不锈钢珠（直径：3.2 mm，参见 材料表）用于每块棕色脂肪组织（BAT）。使用珠磨式组织匀浆器（参见 材料表）以破碎组织。</li>
	<li>从最大功率开始，持续5分钟。如有需要，延长处理时间，直至组织完全匀浆并分离出单个细胞。将样品转移至新离心管中，于4 °C、16,000 x g条件下离心 g 10 分钟。</li>
	<li>离心后，将上清液转移至新管中，并将细胞沉淀置于冰上。将上清液在4 °C以16,000 x g离心10分钟，以防止漂浮细胞丢失。弃去最终上清液，将两份细胞沉淀合并，共同重悬于300 µL SDS裂解缓冲液（SDS 1%；EDTA 10 mM；Tris-HCl pH 8, 50 mM）中，并加入1x蛋白酶抑制剂（参见 材料表）。冰上孵育10分钟。</li>
	<li>将裂解液超声处理，以产生长度为200–500个碱基对的DNA片段。超声处理后，于16,000 x g离心10分钟，去除碎片 g 在 4 °C 下检查超声处理的成功与否 通过 在1%琼脂糖凝胶上进行DNA电泳。对于中等大小的凝胶，以120 V电压运行，45分钟后可获得良好的分离效果。 
	注意： 可能需要优化超声处理条件以获得合适大小的片段。使用选定的超声仪（参见 材料表），这需要在320 W输出功率和20 kHz频率下进行2次，每次10分钟，采用30秒开启/30秒关闭的循环模式。</li>
	<li>将上清液组分用ChIP稀释缓冲液（含0.01% SDS、1.1% Triton、1.2 mM EDTA、16.7 mM Tris-HCl pH 8、167 mM NaCl）稀释10倍（每张BAT垫最终体积为3 mL），并加入1×蛋白酶抑制剂。保留该染色质溶液的1%（对于3 mL样品相当于30 µL）作为ChIP输入样品。将输入样品在4 °C下避光保存过夜（直至步骤2.4）。 
	注意：上述组分将作为输入对照，用于相对于免疫沉淀前各样品中DNA含量对免疫沉淀产物进行相对定量。</li>
	<li>加入ChIP抗体（参见 材料表 将此处用作示例的抗体加入 1 mL 染色质溶液中，4 °C 条件下旋转孵育过夜。如有相应前免疫 IgG，或使用同一种属的正常 IgG，应平行进行免疫沉淀实验。例如，如果抗体由兔产生，则使用普通兔IgG）。或者，保留1 mL染色质溶液作为无抗体对照。 
	注意： 对于每种新抗体，若其浓度未知，应通过实验确定最适使用量。否则，可使用2–5 µg抗体作为合理的起始用量。应尽可能使用经染色质免疫沉淀（ChIP）验证的抗体，或已验证适用于免疫沉淀的抗体。</li>
</ol>
2. 第2天：免疫复合物的收集
<ol>
	<li>向免疫复合物中加入50 µL Protein A Agarose 50% 悬液，在4 °C下以150 rpm转速旋转孵育1小时。</li>
	<li>在4 °C下以100 × g离心1分钟，使珠粒沉淀。随后用严格度逐步增加的缓冲液对珠粒进行连续洗涤。
	<ol>
		<li>首先用低盐洗涤缓冲液（150 mM NaCl；20 mM Tris-HCl pH 8；2 mM EDTA；1% Triton-X；0.1% SDS）洗涤，接着用高盐洗涤缓冲液（500 mM NaCl；20 mM Tris-HCl pH 8；2 mM EDTA；1% Triton-X；0.1% SDS）洗涤，然后用LiCl洗涤液（0.25 M LiCl；10 mM Tris-HCl pH 8；1 mM EDTA；1% Igepal；1% 脱氧胆酸盐）洗涤，最后用1× TE缓冲液（10 mM Tris-HCl pH 8；1 mM EDTA）洗涤。</li>
		<li>所有洗涤步骤均在0.45 µm PVDF离心滤柱（材料表）中进行：首先用500 µL低盐洗涤缓冲液将珠粒转移至滤柱中，在2,500 × g下离心3分钟使珠粒沉淀。弃去滤过液，并对步骤2.2.1中列出的所有洗涤缓冲液重复此操作1次。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>完成洗涤后，向滤柱中的沉淀珠粒加入300 µL洗脱缓冲液（1% SDS，0.1 M NaHCO3），在室温下以400 rpm振荡孵育30分钟。将滤柱置于新管中，以2,500 × g离心3分钟，收集洗脱液。</li>
	<li>将步骤1.9中收集的洗脱液和输入样本在65 °C下孵育过夜，以逆转交联。</li>
</ol>
3. 第3天：通过苯酚/氯仿抽提回收DNA
<ol>
	<li>加入 300 µL 苯酚:氯仿:异戊醇（1:1），分别至洗脱液和输入样本中，涡旋振荡 10 秒。</li>
	<li>4 °C 条件下以 21,000 x g 离心 15 分钟 g将上清液转移至新离心管中。加入3 µL糖原、30 µL 3 M乙酸钠和750 µL预冷的100%乙醇。涡旋振荡10秒。于-80 °C保存2小时。</li>
	<li>在 4 °C、21,000 × g 条件下离心 20 分钟，保留沉淀，弃去上清液。用 1 mL 冷的 70% EtOH 洗涤沉淀，然后在 21,000 × g 条件下再次离心 g 4 °C 下离心 5 分钟。弃去上清液，将沉淀物空气干燥。</li>
	<li>将沉淀重悬于70 µL无DNA酶的水中。</li>
	<li>进入第4步，通过定量聚合酶链式反应（qPCR）检测特定基因组区域的染色质占据情况；或进入第5步，制备用于测序的样品。</li>
</ol>
4. 使用qPCR分析ChIP（单/多基因读数）
<ol>
	<li>将步骤 3.4 中的输入 DNA 进行稀释，以生成标准参考曲线。通常进行 1/10、1/100 和 1/1000 的系列稀释即可覆盖线性范围，但对于浓度更高的样品，可能需要进一步稀释。</li>
	<li>针对每对引物（本实验中使用了靶向 NDUFV1 和 TOMM20 启动子的引物），准备两组 qPCR 反应：一组使用步骤 4.1 中稀释后的输入样品，另一组使用步骤 3.4 中通过免疫沉淀分离得到的 DNA 样品。每个反应需设置三个重复。 
	注意：可使用 96 孔板或 384 孔板并行设置多个基因的反应。</li>
	<li>每孔反应体系设置为 10 μL，包含 5 μL 的 2x PCR 混合液（材料表）、1 μL 引物混合液（1 μM 正向引物和 1 μM 反向引物），以及 4 μL 来自 ChIP 的 DNA（或输入对照 DNA）。</li>
	<li>短暂离心收集板内液体。</li>
	<li>在实时荧光定量 PCR 系统上运行 qPCR 反应，采用试剂生产商推荐的检测程序（材料表）。本实验使用的反应条件如下：1）95°C 变性 1 秒，1 个循环；2）95°C 变性 1 秒，随后 60°C 退火延伸 20 秒，共 45 个循环；3）95°C 15 秒，60°C 60 秒，再 95°C 15 秒，1 个循环。 
	注意：检查溶解曲线：若熔解曲线图中仅出现一个峰，表明 PCR 反应生成了单一扩增产物。若观察到多个峰，则可能提示存在多个非特异性扩增产物；此时建议重新设计引物对。</li>
	<li>根据步骤 4.1 中系列稀释的基因组 DNA，通过 Ct（循环阈值）值绘制标准曲线，确定每对引物扩增反应的指数扩增线性阶段。</li>
	<li>若 ChIP 样品和输入对照 DNA 的 Ct 值处于 Ct 值的线性范围内，则根据步骤 4.1 中 ChIP DNA 与输入对照 DNA 的稀释倍数，计算 ChIP 样品相对于输入对照的 DNA 富集程度。</li>
</ol>
5. 用于高通量测序（全基因组读出）的 ChIP DNA 扩增
注意：如果内部不具备测序能力，可将此步骤外包给学术核心设施或商业测序公司。
<ol>
	<li>使用合适的ChIP文库制备试剂盒（参见材料表），按照制造商说明书从提取的DNA中制备DNA文库。</li>
	<li>在高通量测序系统上对文库进行测序，采用50 bp单端读长作为读出方式（参见材料表）。 
	注意：根据ENCODE6建议的ChIP-seq指南，哺乳动物基因组测序至少需要1000万条读段。</li>
</ol>
6. 原始数据分析
<ol>
	<li>使用 FastQC 对原始测序读段进行质量控制8。 
	注意：常见的测序质量指标包括每个碱基的序列质量、每个碱基的序列组成、每条序列的 GC 含量、序列长度以及序列重复水平。通常，每个碱基位置的读段质量值 Q &#62; 30 表明测序结果质量较高。所有读段的 GC 含量分布应大致呈正态分布，其峰值应位于该物种基因组实际 GC 含量百分比附近。</li>
	<li>使用读段修剪工具 Trimmomatic9 去除测序接头污染和低质量读段。 
	注意：默认参数设置包括去除平台特异性接头序列、去除首尾端低质量碱基，并采用宽度为 4 个碱基的滑动窗口，当窗口内平均碱基质量低于设定阈值时进行读段修剪。</li>
	<li>使用 Bowtie2 比对程序11 及其默认参数，将处理后的读段比对至小鼠 MM10 参考基因组10。</li>
	<li>使用 Samtools12 过滤比对后的读段，去除 Bowtie2 比对质量分数（MAPQ）低于 10 的读段。</li>
	<li>确定多种比对后质量指标，如比对读段百分比、链间相关性、累积读段覆盖度以及样本重复间的可重复性&#173;。 
	注意：可使用多种软件包（如 SPP13、ChIPqc14 和 Deeptools15）计算这些质量指标。</li>
	<li>使用输入对照或适当的基因敲除（KO）样本，采用 MACS 算法（MACS2）16 及其默认参数进行峰检测分析。</li>
	<li>使用 Bedtools18 去除与 mm10 注释中已知的黑名单区域重叠的任何检测峰17。 
	注意：黑名单区域是指在不同细胞系或测序技术中均表现出高信号或高读段计数的基因组区域。这些区域在基因组特定位置会产生人为的高伪信号，可在功能基因组测序实验中予以过滤。所有重复样本应独立通过该分析流程处理，之后可用于不可重复发现率（IDR）分析。IDR 用于评估重复样本间结果的一致性，其方法由 Li、Brown、Huang 和 Bickel 所描述19,20。IDR 方法可定量评估重复样本之间的一致性，已被 ENCODE 和 modENCODE 推荐作为其 ChIP-seq 实验指南的一部分。</li>
	<li>将具有统计学显著性的峰用于多种下游分析，如基因本体分析21,22、富集分析或基序分析23。</li>
</ol>

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</ol>

此处描述的实验方案是从鼠类组织（特别是优化用于棕色脂肪组织）进行染色质免疫沉淀（ChIP）的一种有效工具。从组织样本中进行ChIP时面临的主要挑战之一是在样品制备过程中回收足够数量的细胞。使用组织匀浆机搅拌器结合不锈钢珠对棕色脂肪组织（BAT）进行剪切，相较于传统的玻璃匀浆器，可显著减少因组织未充分破碎而导致的细胞损失。此外，直接在低渗缓冲液中对组织进行匀浆有助于脂质的释放，从而可更方便地将脂质与细胞核分离并去除。 通过 高速离心
适当的超声处理对于进行一致且可重复的染色质免疫沉淀（ChIP）实验也至关重要。使用水浴式超声仪可同时处理多个样品，从而提高染色质剪切的可重复性，并降低样品间交叉污染的风险。此外，采用温度控制的超声系统可减少样品过热，应避免过热以防止样品降解以及抗体对表位识别能力的丧失（详见材料表）。
另一个具有挑战性的步骤是免疫沉淀复合物的回收。此步骤通常优先使用磁珠，因为与磁力架配合使用时，磁珠能够实现更快且更有效的洗涤。然而，与Protein A琼脂糖相比，磁...

白色脂肪组织（WAT）主要负责能量储存，而棕色脂肪组织（BAT）则能够通过线粒体解偶联将碳水化合物和脂质转化为热能，从而以热量形式耗散能量via mitochondrial uncoupling1。由于这一特殊功能，BAT在生理条件下以及应对寒冷刺激时对维持体温至关重要。尽管BAT分化过程及产热应激期间的基因表达变化已在体内和体外得到广泛研究，但这些变化背后的分子机制主要是在永生化细胞系和原代前脂肪细胞中被解析的，仅有少数研究在体内条件下开展2,3,4,5。
通过染色质结构的协调变化，可实现对特定基因表达程序的转录调控 通过 多种转录因子及共调节因子的作用。染色质免疫沉淀（ChIP）是一种有价值的分子生物学方法，用于研究这些因子在DNA上的招募情况以及染色质结构中相关变化的图谱分析。ChIP实验成功的关键因素包括：优化不同样本间的交联条件和染色质剪切的一致性、提供充足的起始材料，以及最重要的一点——抗体的质量。当从完整组织进行ChIP实验时，还需考虑样本的异质性，并优化实验流程以提高细胞核分离的效率；由于脂肪组织富含脂质，该步骤尤为敏感。事实上，由于存在高水平的甘油三酯，从完整脂肪组织中进行分子分离的技术较为复杂，必须优化实验方案以提高染色质的提取量。最后，在完成ChIP-DNA分离并进行高通量测序时，测序深度对于可靠检测出的峰数量具有决定性作用。
本文参考了ENCODE和modENCODE联盟推荐的ChIP-seq实验工作标准和通用指南6，以提供最佳实践建议，并重点逐步描述一种针对棕色脂肪组织（BAT）来源的ChIP-seq优化实验方案。该方案可高效地从脂肪组织中分离染色质，用于对具有明确峰形的DNA结合因子以及信号较为弥散的组蛋白修饰进行全基因组测序分析。

<table><tbody><tr><td>Bullet Blender 组织匀浆器&amp;nbsp;</td><td>Next Advence&amp;nbsp;</td><td>BBX24</td><td></td></tr><tr><td>直径 3.2 mm 的不锈钢珠</td><td>Next Advence&amp;nbsp;</td><td>SSB32</td><td></td></tr><tr><td>Bioruptor 超声破碎仪</td><td>Diagenode</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL TPX 塑料微量离心管&amp;nbsp;</td><td>Diagenode</td><td>C30010010-5</td><td></td></tr><tr><td>Complete-蛋白酶抑制剂</td><td>Roche&amp;nbsp;</td><td>11836145001</td><td></td></tr><tr><td>Protein A 琼脂糖悬液&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen&amp;nbsp;</td><td>101041</td><td></td></tr><tr><td>GPS2 抗体</td><td>本实验室制备</td><td></td><td>兔多克隆抗体，Ct 抗体（Cardamone 等，Mol Cell 2018）</td></tr><tr><td>Pol2 抗体&amp;nbsp;</td><td>Diagenode</td><td>C15100055</td><td></td></tr><tr><td>h3K9me3 抗体</td><td>Millipore&amp;nbsp;</td><td>05-1242</td><td></td></tr><tr><td>Fast Syber Green 预混液</td><td>Applied Biosystems</td><td>4385612</td><td></td></tr><tr><td>ViiA7</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TruSeq ChIP 文库构建试剂盒</td><td>Illumina&amp;nbsp;</td><td>IP-202-1012</td><td></td></tr><tr><td>HiSeq 2000&amp;nbsp;</td><td>Illumina&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠棕色脂肪组织的染色质免疫沉淀

Chromatin Immunoprecipitation of Murine Brown Adipose Tissue

大多数细胞过程通过特定基因程序的转录调控进行调节。这种调控由多种转录因子（TFs）和辅因子共同作用实现，这些因子通过改变染色质结构来介导转录的激活或抑制。via染色质免疫沉淀（ChIP）是一种有用的分子生物学方法，可用于绘制组蛋白修饰图谱以及分析转录因子/辅因子在DNA上的结合情况，从而提供不同生物学过程中细胞核内动态变化的快照。
为了研究脂肪组织中的转录调控，需采用源自 体外 永生化或原代细胞系的细胞培养常被用于ChIP实验，因其起始材料丰富且生物学变异性较低。然而，这些模型仅能反映活体生物中实际染色质状态的有限片段。因此，迫切需要优化针对来自动物模型脂肪组织样本的ChIP实验方案。
本文介绍了一种从小鼠分离的棕色脂肪组织（BAT）中高效进行组蛋白修饰和非组蛋白的ChIP-seq实验方案。该方案针对BAT这一在形态和生理上均与其他脂肪组织不同的特殊组织，优化了全基因组范围内目标蛋白及表观遗传标记定位的研究。

<img alt="WT与KO中NDUFV1和TOMM20启动子活性比较图，显示相对信号水平。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58682/58682fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图1"> 
图1：通过qPCR进行的ChIP验证。 代表性GPS2靶基因的ChIP-qPCR分析 NDUFV1 （左）和 TOMM20 （右）WT 和 GPS2-AKO 小鼠 BAT 中 H3K9 甲基化水平及 GPS2 与 Pol2 结合情况的相对变化。柱状图表示 3 次重复实验的样本均值，*p &lt; 0.05 和 **p &lt; 0.01，经Student's t检验计算得出。该图修改自Cardamone 等2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58682/58...

本文介绍了一种高效染色质免疫沉淀（ChIP）后接高通量DNA测序（ChIP-seq）的实验方案，适用于从小鼠分离的棕色脂肪组织（BAT）样本。该方案可用于全基因组范围内组蛋白修饰的定位分析，以及非组蛋白目标蛋白的全基因组定位研究。 体内.

大多数细胞过程通过特定基因程序的转录调控进行调节。这种调控是通过……的共同作用实现的。

该方法用于对从小鼠棕色脂肪组织中分离的酯化和非酯化蛋白质进行高效的染色质免疫沉淀测序。该技术的主要优势在于，实验方案已针对脂肪组织中染色质相关复合物的高效免疫沉淀进行了优化。在进行切口前，用70%乙醇喷洒已处死的小鼠。将小鼠背部朝上放置，沿颈部做一切口。接着，在肩部之间的皮下直接找到棕色脂肪组织（BAT），小心去除表面一层白色脂肪。将每块棕色脂肪组织置于含有1%甲醛的10毫升PBS溶液中，在室温下以150 RPM振荡交联15分钟。孵育15分钟后，向BAT中加入2.5摩尔的甘氨酸以终止交联反应，终浓度为125毫摩尔。将样品置于摇床中，室温下以150转/分钟旋转5分钟。随后，将BAT组织块转移至500微升低渗裂解缓冲液中，并为每块BAT组织加入两颗不锈钢珠。然后使用基于珠子的组织匀浆器破碎组织。首先以最大功率处理五分钟。如有需要，可延长处理时间，直至组织完全匀浆并分离出单个细胞。将样品转移至新离心管中，在 4 °C、16,000 G 条件下离心 10 分钟。10 分钟后，将上清液转移至新的离心管中，并将细胞沉淀置于冰上保存。再次将上清液在 4 °C、16,000 G 条件下离心 10 分钟，以防止漂浮细胞的丢失。然后，弃去上清液，将两个细胞沉淀物共同重悬于 300 微升含一倍蛋白酶抑制剂的 SDS 裂解缓冲液中。冰上孵育 10 分钟。接着，对裂解物进行超声处理，以产生长度为 200 至 500 个碱基对的 DNA 片段。超声处理后，在4°C条件下以16,000 G离心10分钟，去除碎片。进行免疫沉淀时，保留1%的染色质溶液作为ChIP输入样本，并将输入样本在4°C下保存过夜。接着，向1毫升染色质溶液中加入ChIP抗体，并使用相应物种的前免疫IgG或正常IgG平行进行免疫沉淀。或者，保留一毫升染色质溶液作为无抗体对照。在4°C条件下旋转孵育过夜。为收集免疫复合物，向免疫复合物中加入50微升蛋白A琼脂糖50%悬液，在4°C、150 RPM条件下旋转孵育一小时。一小时后，在4°C条件下以1000 × g离心一分钟，使磁珠沉淀。使用0.45微米PVDF离心滤柱，用严格度逐步增加的缓冲液对磁珠进行连续洗涤：首先将磁珠转移至滤柱中，并加入500微升低盐洗涤缓冲液。然后，在2500 × g下离心三分钟，使磁珠沉淀，弃去滤过液。按照低盐洗涤步骤，使用高盐洗涤缓冲液重复洗涤一次。然后用氯化锂缓冲液重复上述步骤，最后用1倍TE缓冲液洗涤一次。洗涤完成后，在柱子中的沉淀珠中加入300微升洗脱缓冲液，以洗脱免疫复合物。将柱子置于摇床上，于室温下以400转/分钟孵育30分钟。随后，将柱子置于新离心管中，在2500 G条件下离心3分钟，收集洗脱液。将洗脱液及之前收集的输入样品在65摄氏度下孵育过夜，以逆转交联。为回收DNA，按1:1比例向洗脱液和输入样品中加入300微升苯酚-氯仿-IAA，

chromatin-immunoprecipitation-of-murine-brown-adipose-tissue

Research

科研

JoVE Journal

Genetics

遗传学

本文所述方法采用18F-氟代脱氧葡萄糖（18F-FDG）正电子发射断层扫描/计算机断层扫描（PET-CT）以及脂肪-水分离磁共振成像（MRI），在成年受试者分别暴露于热中性（24 °C）和寒冷（17...

通过正电子发射断层扫描/计算机断层扫描及配准磁共振图像自动分割的人类棕色脂肪组织库

我们提出了一种基于过滤的实验方案，用于从交联的小鼠骨骼肌中分离高质量的细胞核，该方法无需超速离心，因而更易于应用。我们证明，由此获得的细胞核所提取的染色质适用于染色质免疫沉淀实验，并可能适用于染色质免疫沉淀测序研究。...

一种基于过滤法的交联骨骼肌细胞核高质量制备方法，用于染色质免疫沉淀

本文介绍了一种改良的染色质制备新方案，适用于从成年小鼠骨骼肌中提取染色质，以通过染色质免疫沉淀技术研究肌纤维中基因表达的调控机制。...

小鼠骨骼肌染色质免疫沉淀实验的优化方案

本文介绍了一种从成熟脂肪细胞中分离细胞核、通过荧光激活分选进行纯化以及在单细胞水平上进行转录组学分析的实验方案。...

用于单细胞基因组学应用的脂肪组织细胞核分离

本报告描述了一种从新生小鼠中同时分离原代棕色和白色前脂肪细胞的实验方案。分离得到的细胞可在体外培养，并可诱导其分化为完全成熟的白色和棕色脂肪细胞。该方法可用于在培养条件下对原代脂肪细胞进行遗传学、分子水平及功能特性分析。...

从新生小鼠中分离与分化原代白色和棕色前脂肪细胞

本方案重点介绍从速冻组织中制备染色质的方法，适用于交联染色质免疫沉淀（X-ChIP）后续进行定量PCR分析（X-ChIP-qPCR）或高通量测序（X-ChIP-seq）。...

从冷冻嵌合肝组织中提取染色质用于染色质免疫沉淀分析

本研究介绍了一种分离小鼠棕色脂肪细胞以进行基因和蛋白质表达分析的新方法。...

从小鼠肩胛间棕色脂肪组织中分离棕色脂肪细胞用于基因和蛋白质表达分析

前脂肪细胞从小鼠肩胛间棕色脂肪组织的基质血管组分中分离获得，并分化为能够积累脂滴、表达分子标志物并呈现成熟棕色脂肪细胞线粒体形态的细胞。这些细胞进一步通过免疫荧光和透射电子显微镜进行分析。...

从新生小鼠肩胛间脂肪组织基质血管组分中分化与成像棕色脂肪细胞

本文提供了一种实用的小鼠锁骨上棕色脂肪组织解剖及其组织学与基因表达分析的操作流程。...

小鼠锁骨上棕色脂肪组织的解剖、组织学处理及基因表达分析

染色质结合蛋白的连续盐提取是一种用于确定大型蛋白质复合物结合特性的有效工具。该方法可用于评估蛋白质复合物中各个亚基或结构域在整体上与大量染色质结合亲和力中的作用。...

用于分析染色质修饰复合物整体染色质结合特性的连续盐抽提法

学习小鼠棕色脂肪组织的染色质免疫沉淀测序方法，优化用于高效免疫沉淀染色质相关复合物。该技术可研究组蛋白修饰和非组蛋白定位，为代谢调控研究提供重要工具。

小鼠棕色脂肪组织的染色质免疫沉淀

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