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用利穆鲁布莱巴细胞裂解液 (lal) 法检测纳米配方中的内毒素
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JoVE Journal Bioengineering
Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

用利穆鲁布莱巴细胞裂解液 (lal) 法检测纳米配方中的内毒素

Full Text
15,162 Views
06:15 min
January 30, 2019

DOI: 10.3791/58830-v

Barry W. Neun1, Marina A. Dobrovolskaia1

1Nanotechnology Characterization Lab., Cancer Research Technology Program,Frederick National Laboratory for Cancer Research sponsored by National Cancer Institute

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

工程纳米材料中内毒素的检测是纳米医学领域面临的重大挑战之一。在这里, 我们提出了一个案例研究, 描述了由三种不同的 lal 格式组成的框架, 以估计纳米颗粒中潜在的内毒素污染。

该方法有助于医学界对纳米药物的安全性进行解答。该技术的优点是它是标准的,并用于全球范围内的产品,To nano药物的评估。演示的程序,将是巴里纽恩,在纳米技术特征实验室。

对于校准标准制备,请使用 900 微升的石灰细胞解质或 LAL 级水。和100微升控制标准内毒素,准备尽可能多的中间稀释所需的,使准备校准标准与浓度一个内毒素单位每毫升。然后使用900微升LAL级水,以及100微升的一个内毒素单位每毫升校准标准,准备第二个校准标准,浓度为0.1内毒素单位每毫升。

然后重复连续十倍稀释,以准备两个较低的校准标准。获得总共四个校准标准,范围从每毫升0001到一个内毒素单位。为了准备每毫升05内毒素单位质量控制,将每毫升控制标准内毒素溶液中一个内毒素单元的50微升与950微升的LAL级水相结合。

接下来在软件中选择仪器设置,然后创建模板。选择收集数据,并在常规选项卡中输入测试 ID 和数据组。在硬件选项卡下,选择仪器类型和 LAL 方法,并验证屏幕上是否显示序列号、系统 ID 和串行端口信息。

单击"确定"两次以确认仪器的选择和与仪器的通信,然后以与样品测试相同的顺序输入样本 ID。然后使用默认按钮输入负控制标准曲线,并测试示例。将适当体积的负控制校准标准添加到重复的预标记玻璃管中。

并将适当的 LAL 卷添加到第一次测试中。短暂地旋转,将小瓶放入仪器旋转木马中的适当测试槽中。在装载样品之前,在最大有效稀释范围内对测试纳米材料进行多次稀释,如所证明的。

为了准备每毫升抑制增强控制05内毒素单位,将每毫升控制标准内毒素溶液中一个内毒素单元的25微升与475微升的测试纳米材料在给定的稀释中结合。涡旋后,将适当的创新增强控制装置和未皮的学习样品加载到仪器中。然后等分解解,在特定稀释时将尖峰纳米材料稀释成预标记管。

在涡旋之前,并加载到仪器旋转木马中。要执行Gel-Clot LAL,将控制标准内毒素制备为四个 lambda 的最终浓度,并将 100 微升标准,与 100 微升水相结合,或测试样品,以达到最终浓度控制标准内毒素二 lambda。在每个羊肉稀释中加入100微升的Lysine。

短暂地旋转管子,将管子架放入37摄氏度的水浴中一小时。在孵化结束时,用平滑运动反转管子,并使用加号手动记录结果,用于坚定的血块,减去无血块或松动的血块。在这项具有代表性的分析中,PEGylated脂质体多索鲁比辛在稀释五时干扰了色原LAL,然而这种干扰在高稀释时被克服。

当配方在浊度和色度LAL的稀释液50和500中测试,以及在浊度LAL的稀释5中测试时,尖峰回收率在50%至200%之间。当根据稀释系数调整时,结果在两篇文章中的错觉之间是一致的。此外,结果在三种论文格式之间是一致的。

请记住,每个样品都有自己的稀释范围,每种LAL格式使用其控制标准在多辛和利盐,以及管用于准备稀释,并执行不同的反应,每LAL论文。对于这个程序,其他方法,如可以执行,以回答有关材料的其他问题后,它的发展,这项技术铺平了道路的缝合线和纳米医学领域,探索纳米技术配方药物在人类的医学应用,和临床模型,包括但不限于非人类灵长类动物,兔子,狗和大鼠。不要忘记,使用多辛可能非常危险,在执行此程序时应始终采取佩戴个人防护装备等预防措施。

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生物工程 第143期 内毒素 纳米粒子 lal 检测 干扰 穗恢复 热生性 污染

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